Gpx4、PCNA在彌漫性大B細胞淋巴瘤中的表達及臨床意義

蒙玉娜 馬淑萍 黨春艷 薛麗 李紅玲

【摘要】 目的：探討磷脂酰谷胱甘肽過氧化物酶（Gpx4）、增殖細胞核抗原（PCNA）在彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）中的表達及臨床意義。方法：收集2016年1月-2019年12月甘肅省人民醫(yī)院經(jīng)病理活檢確診的67例DLBCL患者的臨床資料，設為淋巴瘤組，同期收集20例反應性增生性淋巴組織作為對照組。采用免疫組化法檢測淋巴瘤組及對照組中Gpx4、PCNA的表達水平。結(jié)果：Gpx4、PCNA在淋巴瘤組中的陽性表達率分別為31.34%和64.18%，均高于對照組中的5.00%、15.00%，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不同LDH水平、臨床分期、B癥狀情況、骨髓侵犯情況DLBCL患者的PCNA表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;不同臨床分期、B癥狀情況DLBCL患者的Gpx4表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在67例DLBCL組織中，Gpx4和PCNA陽性表達分別為21、43例，其中兩者同時呈現(xiàn)陽性表達的有18例，同時呈現(xiàn)陰性表達的21例。結(jié)論：Gpx4和PCNA在DLBCL病理組織中呈高水平表達。

【關(guān)鍵詞】 DLBCL Gpx4 PCNA 免疫組織化學

Expression and Clinical Significance of Gpx4 and PCNA in Diffuse Large B-cell Lymphoma/MENG Yu’na， MA Shuping， DANG Chunyan， XUE Li， LI Hongling. //Medical Innovation of China， 2021， 18（33）： 0-057

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of phosphatidyl glutathione peroxidase （Gpx4） and proliferating cell nuclear antigen （PCNA） in diffuse large B cell lymphoma （DLBCL）. Method： Clinical data of 67 DLBCL patients diagnosed by pathological biopsy in Gansu Provincial People’s Hospital from January 2016 to December 2019 were collected， they were assigned to lymphoma group， and 20 reactive hyperproliferative lymphoid tissues were collected as control group. The expression levels of Gpx4 and PCNA in lymphoma group and control group were detected by immunohistochemistry. Result： The positive expression rates of Gpx4 and PCNA in the lymphoma group were 31.34% and 64.18%， respectively， higher than 5.00% and 15.00% in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Comparison of PCNA expression in DLBCL patients with different LDH levels， clinical stages， symptoms B and bone marrow invasion， the differences were statistically significant （P<0.05）. Comparison of Gpx4 expression in DLBCL patients with different clinical stages， symptoms of B， the differences were statistically significant （P<0.05）. In 67 DLBCL tissues， Gpx4 and PCNA were positive in 21 and 43 cases， respectively， including 18 cases of both positive and 21 cases of both negative expression. Conclusion： Gpx4 and PCNA are highly expressed in pathological tissues of DLBCL.

[Key words] DLBCL Gpx4 PCNA Immunohistochemistry

First-author’s address： Ningxia Medical University， Yinchuan 750000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.33.014

彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）是最常見的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL），是一種B細胞增殖的侵襲性淋巴瘤，常累及淋巴結(jié)或結(jié)外淋巴組織，占所有NHL的30%～40%，其在亞洲地區(qū)的發(fā)病率遠遠高于歐美地區(qū)[1]。研究表明，惡性腫瘤的發(fā)生與體內(nèi)氧化應激高度相關(guān)，高水平氧化應激直接導致組織損傷，引起相關(guān)病理性改變，參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。Gpx4是體內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶系中最重要的亞單位[2-3]，是氧化應激過程中重要的抗氧化酶。研究表明，Gpx4在各系統(tǒng)惡性腫瘤中異常表達，基因敲除后通過特征性的鐵死亡引起腫瘤細胞死亡[4]。此外，PCNA參與細胞DNA的合成，調(diào)控細胞增殖，其表達水平反映了腫瘤的惡性程度，是腫瘤細胞增殖可靠的標志物。本研究通過免疫組化法檢測Gpx4和PCNA在DLBCL組織中的表達水平，并分析其與患者臨床資料的關(guān)系，探討兩者在彌漫性大B細胞淋巴瘤發(fā)生發(fā)展中的臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 本研究收集2016年1月-2019年12月甘肅省人民醫(yī)院經(jīng)病理活檢確診的DLBCL患者的臨床資料67例，設為淋巴瘤組，其中男33例，女34例;年齡16～79歲，中位年齡53歲。DLBCL診斷依據(jù)《淋巴瘤病理診斷》標準[5]。納入標準：（1）符合DLBCL診斷標準;（2）年齡16～80歲;（3）資料完整，病理組織取材良好;（4）初診患者，入組前均未進行治療。排除標準：（1）有其他系統(tǒng)惡性腫瘤者;（2）有心臟疾病;（3）有肝臟疾患;（4）有感染性疾病;（5）有中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患。同期收集20例反應性增生性淋巴組織作為對照組。患者知情同意并簽署知情同意書，本研究經(jīng)倫理委員會批準。

1.2 方法 采用免疫組化法檢測兩組石蠟標本中Gpx4、PCNA的表達水平。兔抗人Gpx4、PCNA多克隆抗體均購自Abcam公司，按說明書進行操作，Gpx4抗體的稀釋濃度為1︰400，PCNA抗體的稀釋濃度為1︰800。對結(jié)果評定如下：由兩位具有豐富經(jīng)驗的病理科醫(yī)師雙盲閱片，隨機選取5個高倍視野（×400），每個視野計數(shù)100個細胞。分別對Gpx4和PCNA陽性細胞數(shù)和染色強度兩個變量進行評分。二者得分乘積如下：0分者計陰性;1～4分者計弱陽性（+）;5～8分者計中度陽性（++）;9～12分者計強陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用字2檢驗。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組中Gpx4、PCNA的表達情況比較 Gpx4呈淡黃色、棕褐色彌漫表達于細胞膜上（圖1），PCNA呈棕褐色，主要表達于細胞核內(nèi)（圖2），兩者在淋巴瘤組中陽性表達率分別為31.34%、64.18%，而對照組的陽性表達率分別為5.00%、15.00%，兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 Gpx4、PCNA的表達與DLBCL患者臨床資料之間的關(guān)系 不同LDH水平、臨床分期、B癥狀情況、骨髓侵犯情況DLBCL患者的PCNA表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;不同臨床分期、B癥狀情況DLBCL患者的Gpx4表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 DLBCL組織中Gpx4和PCNA表達的關(guān)系 在67例DLBCL組織中，Gpx4和PCNA陽性表達分別為21、43例，其中兩者同時呈現(xiàn)陽性表達的有18例，同時呈現(xiàn)陰性表達的21例。見表3。

3 討論

DLBCL具有明顯的侵襲性和生物學異質(zhì)性，部分患者接受R-CHOP標準化療方案后可治愈，近年來隨著分子圖譜的出現(xiàn)，自體干細胞移植以及嵌合抗原受體T細胞的輸注，明顯改善患者臨床癥狀及預后，但仍有大約40%的患者最終死于復發(fā)性疾病[6-7]。因此迫切需要探索新的分子生物學標志物及有效的腫瘤治療分子靶點，提高DLBCL的診治水平及積極改善預后。

腫瘤細胞生長速度快，需氧量高，承受的氧化應激多。為了減少這種氧化應激，腫瘤細胞形成了不同的還原酶系統(tǒng)和胱氨酸/谷氨酸轉(zhuǎn)運蛋白（XC-）等抗氧化系統(tǒng)[8-9]。這些抗氧化系統(tǒng)和相關(guān)分子對癌癥進展至關(guān)重要，因此成為抗癌藥物的靶點，并在多種癌癥治療中作為生物標記物[10]。Gpx4是體內(nèi)抗氧化酶系中最重要的亞單位，也是一種細胞內(nèi)抗氧化劑，它在氧化動態(tài)平衡中起著主要作用[11]。Gpx家族包括八種亞型，在人體內(nèi)Gpx1、Gpx2、Gpx3和Gpx4主要作用是減少組織細胞內(nèi)的高水平過氧化物，減輕對機體的危害[12-13]。目前對于Gpx5～Gpx8的研究很局限。Gpx4主要表達于機體組織生物膜上，可以還原體內(nèi)過量的活性氧，催化機體細胞內(nèi)的H2O2分解，清除體內(nèi)有毒物質(zhì)。作用機制是將GSH作為抗氧化過程的底物，將體內(nèi)產(chǎn)生的過量有毒物質(zhì)進行分解和轉(zhuǎn)化，從而與SOD和CAT一同構(gòu)成體內(nèi)重要的抗氧化系統(tǒng)。據(jù)相關(guān)報道，在基因敲除動物模型中可觀察到脂質(zhì)過氧化[14]，說明了Gpx4對于保護細胞免受脂質(zhì)過氧化的重要性。近年來，文獻[15-17]報道Gpx4在結(jié)直腸癌，肝癌，肺癌等多種實體腫瘤中過表達，且與腫瘤的進展、轉(zhuǎn)移等相關(guān)。在本研究中，與對照組相比，DLBCL組Gpx4表達的陽性率較高，提示Gpx4可能參與DLBCL的進展。

細胞生長的基本特征是細胞增殖，腫瘤細胞的生物學行為主要是由細胞的生長行為和增殖狀態(tài)所決定的，腫瘤細胞增殖標志物可客觀反映它的增殖潛能。PCNA是一種存在于生物體組織細胞核內(nèi)，其蛋白相對分子量大小為36 kD的核蛋白多肽，且生物種屬間無明顯的特異性，細胞內(nèi)DNA的合成速率及腫瘤細胞的增殖狀態(tài)均由細胞核內(nèi)PCNA蛋白的合成水平所反映，是可靠的腫瘤細胞增殖標志物之一。PCNA形成一個DNA的同源三聚體環(huán)，電荷呈非對稱分布，并沿著三聚體環(huán)滑動，錨定DNA聚合酶和其他DNA編輯酶。此外，還通過蛋白盒（PIP-box）的序列與調(diào)節(jié)蛋白相互作用[18]。研究認為PCNA的異常表達參與各種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[19]。Juríková等[20]研究報道PCNA的高水平表達與惡性腫瘤細胞的高度異型性、擴散、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，同時與患者惡性腫瘤的臨床分期、遠處浸潤轉(zhuǎn)移等存在相關(guān)性，提示PCNA高水平表達增加了腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的危險性。Leoncini等[21]研究發(fā)現(xiàn)，NHL的惡性程度越高，病理組織中PCNA陽性表達水平也越強。文獻[22-23]研究一直認為PCNA可作為判定NHL預后的一個重要指標。本研究發(fā)現(xiàn)，在67例DLBCL病理組織中PCNA的陽性表達率明顯高于對照組，提示PCNA參與了DLBCL疾病的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)Gpx4和PCNA在DLBCL病理組織中呈高水平表達。由于本研究所納入樣本量有限，對照組淋巴結(jié)反應性增生組織病例20例，可能造成選擇性偏移，導致統(tǒng)計結(jié)果出現(xiàn)誤差，本研究未對所有入組病例進行定期隨訪，未做生存分析和對DLBCL患者預后的評價，需進一步擴充樣本量、選擇其他新技術(shù)進行相關(guān)研究，為DLBCL的臨床診斷與治療提供新的參考。

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（收稿日期：2021-04-07） （本文編輯：姬思雨）