地中海貧血507 例的基因突變類型分析

潘小莉，鮑幼維，潘澍青

地中海貧血（簡稱地貧）也稱海洋性貧血或珠蛋白生成障礙性貧血，是一種由常染色體隱性單基因控制的珠蛋白生成障礙性遺傳性疾病[1]。根據所缺陷的珠蛋白肽鏈類型分類，主要包括-地貧和-地貧；另有一些少見類型，如-地貧-地貧-地貧及遺傳性持續性胎兒血紅蛋白增高癥（HPFH）等[2]。地貧的發病率有明顯的地域和種族差異，寧波雖不是地貧高發區，但地處東南沿海發達地區，人口流動性大，而本地區詳細的地貧流行病學資料較少；因此有必要對本地區人群的地貧基因突變類型進行分析。本研究對892 例疑似患者（未經血液學篩查）進行地貧基因檢測，分析統計其基因類型及構成情況，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月至2020 年5 月在寧波市婦女兒童醫院就診的行地貧基因檢測兒童、孕婦及其配偶等地貧疑似患者892 例，其中男381例，女511 例；年齡0 ～49 歲。

1.2 試劑與儀器 采用廈門致善生物科技股份有限公司提供的Lab-Aid824s核酸提取儀，上海宏石醫療科技有限公司提供的SLAN-96S 全自動醫用PCR分析儀；DNA提取試劑盒和地中海貧血基因檢測試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）均有廈門致善生物科技股份有限公司提供。

1.3 地貧基因診斷 采集末梢血滴于專用濾紙片上，血斑直徑不小于8 mm，自然晾干后，進行DNA 提取，提取操作嚴格按照試劑說明書進行。采用熒光PCR熔解曲線分析技術進行熱點基因檢測，檢測中國人常見的3 種缺失型-地貧（－－SEA/、－4.2/、－3.7/）和3種非缺失型-地貧基因點突變（CSQS、WS），21 種-地貧基因點突變IVS-Ⅱ-654（C ＞T）、－28（A ＞G）、－29（A＞G）、－30（T ＞C）、－31（A ＞C）、－32（C ＞A）、CD14-15（+G）、CD15-16（+G）、CD 17（A ＞T）、IVS-Ⅰ-5（G ＞C）、CD 30（A ＞G）、IVS-Ⅰ-1（G ＞T）、CD 26（G ＞ A）、CD27-28（+C）、CD41-42（－TTCT）、CD43（G ＞T）、CD37（G ＞A）、CD71-72（+A）、IVS-Ⅱ-5（G＞C）、－73（A＞T）、－90（C＞T）。

2 結果

2.1 地貧基因檢測結果 507 例確診為地貧基因攜帶者，檢出率為 56.8%（507/892）。其中男性檢出率為56.2%（214/381）, 女性檢出率為57.3%（293/511）。211 例確診為-地貧基因攜帶者，陽性率為41.6%（211/507）；291 例確診為-地貧基因攜帶者，陽性率為57.4%（291/507）；5 例確診為-復合型地貧基因攜帶者，陽性率為1.0%（5/507）。

表1 211 例-地貧基因型分類及構成情況

表2 291 例-地貧基因型分類及構成情況

表2 291 例-地貧基因型分類及構成情況

基因型 例數構成比（%）IVS-II-654（C ＞T） 113 38.9 CD41-42（－TTCT） 88 30.3 CD17（A ＞T） 64 22.0 CD71-72（+A） 7 2.4 CD26（G ＞A） 6 2.1 CD27-28（+C） 3 1.0 CDs27-28（+C） 3 1.0 CD43（G ＞T） 2 0.7 IVS-I-5（G ＞C） 2 0.7－28（A ＞G） 1 0.3 CDs8-9（+G） 1 0.3 IVS-II-654（C＞T）；CD26（G＞A） 1 0.3合計 291 100.0

表3 5 例-復合地貧基因型分類及構成比

表3 5 例-復合地貧基因型分類及構成比

基因型 例數構成比（%）－3.7/ ；IVS-II-654（C ＞T） 2 40.0－3.7/ ；CD41-42（－TTCT） 1 20.0－4.2/ ；CD41-42（－TTCT） 1 20.0－－SEA/ ；CD17(A ＞T） 1 20.0

3 討論

地貧的發病機制主要是由于珠蛋白基因缺陷或調控異常使珠蛋白肽鏈合成減少或不能合成，呈進行性貧血[1]。地貧根據臨床表現分為靜止型、輕型、中間型和重型。由于機體代償能力不同或修飾基因的調控不同，臨床表現呈多樣性。重型地貧多在圍產期死亡，或出生后需靠終生輸血或干細胞移植。中間型地貧常引起持續性慢性溶血性貧血，易引發骨質疏松等并發癥和繼發性器官的損害[3-4]。輕型和靜止型地貧一般無臨床癥狀或出現輕度貧血。地貧發病率有明顯的地域和種族差異[5]。我國以廣西、廣東等地發病率較高，總陽性率最高達24%[6-8]。寧波雖不是地貧高發區，但本地區人口結構較復雜；因此有必要分析地貧基因突變類型，為今后的寧波地區人群地貧防控計劃奠定基礎。

本研究顯示總體地貧基因攜帶率為56.8%，共檢出24 種基因型，可見寧波地區地貧基因攜帶率較高，基因類型較為復雜，應引起重視。同時發現-地貧基因攜帶率為41.6%-地貧基因攜帶率為57.4%。與葛群芳等[9]報道稍有出入，可能與入選人群的民族、籍貫差異有關。-地貧中共檢出8 種基因型類型，最常見的是－－SEA/，這與－－SEA/可能是我國南方地區的-地貧的主要突變類型這一結論一致[10]。-地貧中共檢出12 種基因型類型，其中IVS-II-654（C ＞T）、CD41-42（－TTCT）、CD17（A ＞T）較為常見，這與徐琦煜等[11]報道溫州地區和楊勝等[12]報道的浙江北部地區常見-地貧突變基因型較為一致，但在比例上稍有區別。另外本研究還檢出了4 種-復合地貧基因，占1%。雖然-復合地貧的臨床癥狀有所減輕，但是與其他類型地貧個體婚配，生育重型地貧患兒的比率卻有所提高；因此應重視其在人群中的分布比例。

本研究直接采用干血斑進行檢測，有利于特殊人群的開展（如新生兒），擴大了本地區人群地貧熱點基因檢測率。同時直接進行熱點基因檢測可降低地貧攜帶者的漏檢率，更能反應寧波地區人群中地貧基因攜帶的情況。

綜上所述，寧波地區總體地貧基因攜帶率較高，且基因類型多元化，因此其貧已成為影響本地區人口素質的重要影響因素之一。