結(jié)核感染T細胞及結(jié)核抗體檢測在女性生殖器結(jié)核診斷中應(yīng)用研究

孫秀利 李妘

(1.陜西省結(jié)核病防治院(陜西省第五人民醫(yī)院)，陜西 西安 710100；2.漢中市中心醫(yī)院婦科，陜西 漢中 723000)

女性生殖器結(jié)核的臨床診斷，主要依賴于細菌學檢驗[1]。傳統(tǒng)檢驗方式診斷敏感性難令人滿意，診斷結(jié)果方面難以區(qū)分非結(jié)核分歧桿菌、活菌與死菌[2]。現(xiàn)有研究表明，結(jié)核抗體檢測(TB-Ab)與結(jié)核感染T細胞斑點實驗(T-SPOT.TB)均可運用于結(jié)核病的臨床診斷中，提供較佳的診斷效能[3]。本文淺析在女性生殖器結(jié)核診斷中采用結(jié)核抗體檢測(TB-Ab)與結(jié)核感染T細胞斑點實驗(T-SPOT.TB)的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2018年01月至2019年12月我院收治疑似生殖器結(jié)核的62例女性患者臨床病案資料作研究樣本，年齡19～41，平均年齡(27.62±4.16)歲；其中無生育史38例，有生育史24例；發(fā)熱、咳嗽等癥狀出現(xiàn)至就診時間7 d～20 d，平均就診時間(13.43±3.82)d；其中結(jié)核病史8例，接觸史3例，甲亢史1例，腎積水史1例。研究已上報本單位倫理委員會并獲得批準，納入標準：所有患者經(jīng)痰涂片、結(jié)核菌素試驗、影像學檢查、實驗室檢查、子宮內(nèi)膜診刮病檢或盆腔手術(shù)切除標本病檢結(jié)果支持，最終評估疾病有無，作為金標準[4]；于本院接受檢查及后續(xù)治療，臨床病案資料保存完整；患者知情同意。排除標準：未接受TB-Ab+T-SPOT.TB檢查者；合并其他部位結(jié)核者；嚴重全身性感染者；禁忌癥人群。以上基線資料對比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1TB-Ab 經(jīng)結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測試劑盒(北京健乃喜生物技術(shù)有限公司)，采用基因工程制備的結(jié)核抗原和膠體金免疫層析技術(shù)，嚴格依照說明書進行操作。取患者血清50μl加入檢測卡上的樣本孔內(nèi)，樣本中的結(jié)核抗體可與膠體金標記的抗原形成結(jié)核抗體-金標抗原復(fù)合物，因?qū)游鲎饔迷搹?fù)合物沿著試紙條向前移動，經(jīng)T1檢測線時IgM抗體-金標抗原復(fù)合物與膜上包被的小鼠抗人IgM結(jié)合顯色，經(jīng)T2檢測線時IgG抗體-金標抗原復(fù)合物與膜上包被的結(jié)核抗原結(jié)合顯色。膠體金標記的新西蘭白兔IgG在質(zhì)控線處與膜上包被的山羊抗兔IgG結(jié)合而顯色，陰性樣本僅在質(zhì)控線處顯色。

1.2.2T-SPOT.TB 使用結(jié)核分枝桿菌特異性細胞免疫反應(yīng)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附法)(海口維瑅璦生物研究院)，基于γ-干擾素(IFN-γ)釋放分析(IGRA)原理，判斷是否存在針對結(jié)核分枝桿菌的特異性T細胞反應(yīng)。采集患者5 mL血液，肝素鈉抗凝，分裝到陰性對照N、陽性對照P與檢測T三種含有刺激抗原(通過基因工程技術(shù)修飾后表達成為刺激抗原的結(jié)核分枝桿菌特異性抗原ESAT-6和CFP-10)的培養(yǎng)管中，混合并孵育后經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測特異性釋放的IFN-γ水平。當N<0.5時，若T-N/P-N≥0.16判為陽性，否則為陰性；當0.5≤N<2.5時，T-N≥1.5判為陽性，否則為陰性；當N≥2.5時，判為無法確定，建議復(fù)查。

1.3觀察指標 (1)陰/陽性：①真陰性：金標準與檢驗結(jié)果均提示陰性；②真陽性：金標準與檢驗結(jié)果均提示陽性；③假陰性：金標準提示陽性，但檢驗結(jié)果提示陰性；④假陽性：金標準提示陰性，但檢驗結(jié)果提示陽性。(2)準確率=(真陽性+真陰性)÷總例數(shù)×100%。(3)特異度=真陰性÷(假陽性+真陰性)×100%。(4)敏感度=真陽性÷(真陽性+假陰性)×100%。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0軟件處理所得數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以n(%)表示，行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1TB-Ab診斷陰/陽性分布情況 62例受檢者中，陽性分布率85.48%(53/62)，陰性分布率14.52%(9/62)。本組真陽性41例，真陰性3例，假陽性6例，假陰性12例。

2.2T-SPOT.TB診斷陰/陽性分布情況 62例受檢者中，真陽性46例，真陰性5例，假陽性4例，假陰性7例。

2.3TB-Ab+T-SPOT.TB聯(lián)合診斷陰/陽性分布情況 62例受檢者中，真陽性51例，真陰性8例，假陽性1例，假陰性2例。

2.4不同檢測方案的準確率、特異度與敏感度比較 準確率、特異度與敏感度方面，均示TB-Ab+T-SPOT.TB高于T-SPOT.TB，T-SPOT.TB高于TB-Ab，且TB-Ab+T-SPOT.TB與其他兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

3 討 論

回顧以往結(jié)核病診斷，主要在于對痰液的細菌學檢測及相關(guān)影像學檢查[5-6]。痰涂片檢驗被視作金標準，但其弊端同樣存在，即送檢時間長，操作較繁瑣，不符合臨床救治原則[7]。加之結(jié)核往往起病隱匿，患者難以自知，因此一定程度加大臨床誤診率。

T-SPOT.TB能夠在病早期或以往存在感染的患者樣本中測得效應(yīng)T細胞，具備較好的檢測敏感度，檢測效率高，一般24 h內(nèi)可出結(jié)果。ESAT-6與CFP-10為結(jié)核分支桿菌復(fù)合群基因RD1區(qū)域rv3874與rv3875編碼的結(jié)核特異性蛋白抗原，只在少部分的致病性分支桿菌及結(jié)核分支桿菌復(fù)合群基因組中出現(xiàn)，在卡介苗菌株、多數(shù)非致病性分支桿菌基因組中缺失，故基于ESAT-6與CFP-10基礎(chǔ)之上設(shè)計而來的T-SPOT.TB檢測技術(shù)，其ESAT-6、CFP-10可視為結(jié)核分支桿菌特異性抗原，通過體外定量測定全血細胞被結(jié)核分支桿菌特異性抗原刺激后釋放的γ-干擾素水平，定性判斷其是否具有針對結(jié)核分支桿菌的特異性T細胞反應(yīng)。基于上述檢測原理，該技術(shù)能夠有效降低卡介苗與多種環(huán)境結(jié)核分枝桿菌的交叉反應(yīng)，故而該檢測技術(shù)的特異性更佳。兩種抗原的多肽制備聯(lián)用，進一步提升檢測的敏感度[8-9]。故該技術(shù)在女性生殖器結(jié)核疾病的檢測中價值高，值得應(yīng)用。

TB-ab檢出效果不及T-SPOT.TB的原因主要是由于IgG抗體多在女性生殖器結(jié)核中晚期出現(xiàn)，早期診斷可能會存在漏診情況[10]，亦不排除與人體對致病菌的免疫應(yīng)答反應(yīng)有關(guān)。部分患者由于自身免疫功能出現(xiàn)異常，進而致其體內(nèi)特異性結(jié)核抗體表達水平過低，檢測的準確性受其影響。活動性女性生殖器結(jié)核，患者體內(nèi)結(jié)核抗原與特異性結(jié)核抗體結(jié)合，生成免疫復(fù)合物，加之試劑盒檢出效果能夠覆蓋的抗原表位不全，導(dǎo)致檢測效果失準[11]。

考慮到女性生殖器結(jié)核病T細胞淋巴因子分型復(fù)雜，細胞因子的反應(yīng)可能受到所處環(huán)境的干預(yù)發(fā)生變化，因此T-SPOT.TB技術(shù)診斷疾病同樣有其局限性。本次研究結(jié)果顯示，TB-Ab+T-SPOT.TB聯(lián)合診斷的陰/陽性、準確率、特異度與敏感度均優(yōu)于T-SPOT.TB診斷，T-SPOT.TB診斷的上述指標又佳于TB-Ab診斷，提示女性生殖器結(jié)核診斷中，TB-Ab+T-SPOT.TB聯(lián)合診斷效能最高，進一步論證上述觀點的正確性。

綜上，TB-Ab+T-SPOT.TB聯(lián)合檢測在女性生殖器結(jié)核診斷中應(yīng)用效果更好，其次為T-SPOT.TB診斷，推薦臨床使用聯(lián)合檢測。