牛結節性皮膚病診斷與防控

王 娟，劉美蓮，袁斌香，熊增宏

(1.贛州農業學校，江西贛州 341000；2.安福縣金田鄉人民政府農業辦公室，江西安福 343200)

牛結節性皮膚病（Lumpy Skin Disease,LSD）是一種病毒性傳染病，主要由蚊子、其它吸血昆蟲和蒼蠅傳播，主要特征是皮膚出現結節，故臨床上又稱牛結節性皮炎、牛結節疹或牛疙瘩皮膚病。LSD早在非洲和中東呈地方性流行，2015年先后在希臘和俄羅斯爆發，2016年在歐洲及歐亞交界等地蔓延傳播，哈薩克斯坦等國相繼報告發生LSD疫情[1]。2019年8月12日，新疆維吾爾自治區伊犁州發生LSD疫情，這是我國首次確診發生該病[2]。LSD是世界動物衛生組織法定報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。LSD發病率為5%～45%，病死率可達10%。LSD的流行與傳播一方面阻礙了養牛業的發展，另一方面威脅著食品安全和公共衛生安全。LSD的診斷和防控，是成功控制和根除流行地區和非流行地區LSD的基礎，對我國控制疫情的蔓延具有重要意義。

1 LSD的診斷方法

1.1 LSD臨床癥狀和病理變化

1.1.1 臨床癥狀

LSD臨床表現差異很大，與動物的健康狀況和感染的病毒量相關。患牛皮膚出現廣泛性疙瘩樣癥狀，體溫升高，可達41℃，食欲減退，活動性差，喜臥，淺表淋巴結腫大，特別是肩前淋巴結明顯。眼結膜炎，口腔黏膜有水泡，繼而潰瘍，個別牛流涎、流鼻涕，甚至流鼻血。奶牛產奶量下降；發熱48 h后皮膚出現直徑10～50 mm的結節，多發生于頭、頸、肩、乳房、外陰、陰囊等部位。結節可能出現破潰，吸引蠅蛆，反復結痂，數月不愈。牛的四肢及腹部、會陰等部位出現水腫，不愿行走。公牛感染，可永久性或暫時性不育，并通過精液長期排毒。懷孕母牛感染，出現流產，發情延遲數月。

1.1.2 病理變化

剖檢可見消化道和呼吸道內黏膜表面有結節病變；心臟腫大，心肌外表充血、出血，呈現斑塊狀瘀血；肝臟腫大，邊緣鈍圓；膽囊腫大，為正常的2～3倍，外壁有出血斑；脾臟腫大，質地變硬，有出血狀況；氣管黏膜充血，氣管內有大量黏液；肺臟腫大，有少量出血點；胃黏膜出血，小腸彌漫性出血；淋巴結腫大、出血；腎臟表面出現出血點。

1.1.3 臨床鑒別診斷

患畜臨床癥狀嚴重時，皮膚結節病非常典型，易于鑒別。但是溫和型感染需與以下疾病相鑒別，如偽牛痘、偽結核性皮膚病、牛皰疹病毒病、奶牛丘疹性口炎、疥螨病、嗜皮菌病、皮膚型結核、毛囊蟲病、盤尾絲蟲病、貝諾孢子蟲病等。

1.2 LSD的樣品采集

LSD病毒（LSDV）廣泛存在于皮膚、真皮損傷部位、結痂、唾液、鼻汁、牛乳、精液、肌肉、脾臟、淋巴結等處。一般情況下，活體動物病料采集部位在結痂和皮膚病變、鼻拭子、血液血清部位。痂皮內含有高濃度的病毒，且易于采集，能長時間運輸，操作時動物不需要鎮靜或局麻處理，被認為是最好的樣品材料。

1.3 LSD的實驗室檢測

根據臨床癥狀及病理變化可對病例進行初步診斷，對疑似病例只有通過實驗室診斷確診。目前，LSD實驗室診斷技術包括抗體檢測和病原檢測方法兩類。其中抗體檢測主要包括病毒中和試驗和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等方法，病原檢測包括聚合酶鏈式反應（PCR）、熒光聚合酶鏈式反應（RTPCR）、病毒分離檢測等技術。

1.3.1 抗體檢測方法

1.3.1.1 病毒中和試驗

病毒中和試驗是血清學檢測的金標準，特異性可達100%，具有以下特點。（1）靈敏度為70%～96%，在檢測臨床癥狀輕微和接種后體內低抗體水平低的動物還不夠敏感，但特異性可達100%。（2）檢測耗時、耗力、對實驗條件要求較高。病毒中和實驗是需要以細胞培養為基礎的檢測方法，需有適當的敏感細胞培養的材料，如適宜的原代細胞或細胞系和參考血清，且樣本材料必須是受感染動物的血清。此外，不同的實驗室，其標準和敏感性不同，導致判定的結果可能有變化。該法不適合初步檢測或大量樣本的檢測。

1.3.1.2 ELISA

ELISA是利用酶標記抗體或抗原，以檢測相應抗原或抗體的一種免疫學標記技術。我國成功構建山羊痘病毒（GPV）、綿羊痘病毒（SPV）的P32基因的真核和原核表達系統，建立了檢測山羊痘病毒抗體的間接ELISA方法。該法能對LSDV進行檢測，具有方便、敏感性和特異性高的優點，但其檢測結果的準確性會受到試劑與儀器的影響。Bowden等采用重組羊痘病毒屬抗原建立間接酶聯免疫吸附法對病毒進行檢測，對42種抗原進行篩選，選擇有效表達的兩個羊痘病毒核心蛋白，其敏感度達95%以上，且無交叉反應。

1.3.2 病原檢測方法

1.3.2.1 PCR

使用山羊痘病毒的特異性引物可以在活檢樣本中擴增LSDV的DNA。與RT-PCR比較，PCR速度慢、靈敏度低，但具有操作簡單、成本低的優點，適用某些資源有限以及專業人員缺乏的實驗室。

1.3.2.2 RT-PCR

RT-PCR具有定量、簡單、靈敏性高、特異性高等特點。RT-PCR的檢測水平每次反應均少于10個基因拷貝，與其他痘病毒無交叉反應，在檢測其他痘病毒或者陰性樣本時，也未出現假陽性結果。RT-PCR在歐盟相關實驗室被廣泛使用，可用于大規模的樣本檢測。

1.3.2.3 病毒分離鑒定

牛、山羊及綿羊的原代及傳代細胞常用于LSDV分離、培養和檢測。活檢材料或干燥痂皮中的山羊痘病毒屬病毒顆粒在電子顯微鏡下可被識別，病毒粒子形態呈磚塊狀或短管狀，大小約為290 nm×270 nm。電子顯微鏡法該法可用于病毒的診斷研究。

2 防控

2.1 重視宣傳教育

宣傳工作是防控LSD傳播的重要途徑。基層畜牧主管部門應定期對LSD防控技術進行知識培訓，同時組織養殖場、牧區、屠宰場等畜牧相關從業人員學習有關病例、報告及病毒的無害化處理技術。提高主管部門及養殖技術人員的疾病診斷和處理能力，同時提高牧民、養殖人員、屠宰工作人員對疫情危害及防控重要性的認識，按國家有關規定做到早發現、早報告、早確診、早處置，防止疫情擴散和蔓延。

2.2 加強生物安全防護措施的研究

2.2.1 控制傳染源

農業農村部《牛結節性皮膚病防治技術規范》提出，對發病場（戶）的動物實施嚴格的隔離、監視，禁止牛只及其產品、飼料及有關物品移動，必要時采取封鎖、撲殺等措施。

2.2.2 切斷傳播途徑

節肢動物作為機械性載體傳播疫病，環境中的廄螫蠅、庫蚊、非叮咬的蒼蠅、硬蜱、白蛉等都已證實參與LSD的傳播。實施吸血蟲媒控制措施，滅殺場區滅殺飼養場所吸血昆蟲及幼蟲，清除孳生環境。同時徹底清洗、消毒養殖場環境，生產中常用的消毒劑如氫氧化鈉、氯仿及福爾馬林均可抑制該病毒的增殖，但需要注意患牛結痂內的病毒存活時間長，難以殺滅，需多次反復消毒滅殺。

2.2.3 保護易感動物，免疫接種

在流行區，疫苗接種是控制LSD的主要措施。采用國家批準的山羊痘疫苗（按照山羊的5倍劑量）對病牛所在縣及其相鄰縣全部牛只進行緊急免疫。接種方法是尾根皮內注射，3～4周后再次加強免疫，部分動物在接種部位引起局部反應，有時甚至較為嚴重，但數天后可自行消退。

2.3 重視動物檢疫

LSD尚未發生的地區，首要防控措施是加強檢疫檢查。應對疫病傳播的關鍵環節在于加強管理，嚴格控制動物、動物產品及其副產品的流通，對非法流通的牛只及產品按相應規定處理，有效杜絕基層運輸過程中出現的患牛流入市場。

3 小結

隨著我國首例LSD的發現，當前養牛業面臨著新的挑戰。盡早診斷、有效防控，對控制LSD疫情的蔓延極為重要。LSD是可管理、可防、可控的疫病，獸醫主管部門要做好宣傳教育，加強生物安全的綜合防控措施，強化動物檢疫工作，早發現、早報告、早確診、早處置，最大限度地減少疫情造成的損失。