ILT4的免疫調節功能及其在腫瘤和免疫性疾病中的作用①

林艷清 文瑞婷 楊志剛（廣東醫科大學附屬湛江中心醫院血液風濕內科，湛江524045）

免疫球蛋白樣轉錄子（immunoglobulin-like tran?script，ILT），也稱白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族B（leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B，LILRB）、白細胞分化抗原85（cluster of differenti?ation 85，CD85），該家族包括抑制性亞型（ILT2、ILT3、ILT4、ILT5）、激活亞型（ILT1、ILT7、ILT8）和可溶性亞型（ILT6），在人體細胞中廣泛表達，能夠識別不同配體并發揮免疫抑制或免疫激活作用［1-2］。ILT4，也稱為LILRB2，淋巴細胞免疫球蛋白樣受體2（lymphocyte immunoglobulin-like receptor，LIR2），單核/巨噬細胞免疫球蛋白樣受體10（monocyte/mac?rophage immunoglobulin-like receptor 10，MIR-10）或CD85d，屬于ILT超家族中的抑制性受體，主要表達于髓系細胞，包括單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞（dendritic cells，DC）和粒細胞［1］。ILT4的配體包括HLAⅠ類分子、MHC樣分子（CD1d）、一些補體成分（C4d、C3d、C4b、C3b和iC3b）、血管生成素樣蛋白（angiopoietin-like protein，ANGPTL）、β-淀粉樣蛋白、髓鞘衍生抑制劑以及最新發現的信號素4A（sema?phorin 4A，Sema4A）蛋白，ILT4與其配體結合通過ITIM傳導抑制信號，發揮免疫抑制作用［1，3-7］。近年來，研究發現ILT4在免疫調節、腫瘤免疫、移植免疫以及自身免疫性疾病中均發揮重要作用［5，8-10］。進一步了解ILT4的免疫調節功能及其在疾病中的作用有望為以ILT4為靶點的免疫治療提供新思路。因此，本文就ILT4的結構與配體、免疫調節功能以及在腫瘤、自身免疫性疾病、移植免疫中作用的最新研究進展進行綜述。

1 ILT4的結構與配體

ILT4是一種典型的Ⅰ型跨膜蛋白，具有4個胞外串聯Ig樣結構域，1個由23個氨基酸組成的跨膜區和1個含有3個ITIM的細胞質尾部［11］。ILT4主要表達于固有免疫細胞，如單核細胞、巨噬細胞、DC和粒細胞，除此之外還表達于造血干細胞（hemopoietic stem cells，HSCs）、破骨細胞前體細胞、內皮細胞和神經元，通過與其配體結合發揮生物學作用［1］。ILT4有多種類型的配體，近年來備受關注的配體分子有HLAⅠ類分子人白細胞抗原-G（human leukocyte antigen-G，HLA-G）、ANGPTL、補體成分C4d和新發現的Sema4A，ILT4與其配體結合通過免疫細胞內ITIM轉導信號，導致免疫細胞活化的負調節，從而發揮免疫抑制作用［1］。

HLA-G是一類具有較強免疫調節活性的非經典的MHCⅠ類分子，是ILT4的重要配體，在大多數健康組織中不表達。然而，研究證實在移植后的同種異體移植物中以及在自身免疫性疾病、腫瘤、炎癥或病毒感染等多種病理條件下均可檢測到HLA-G表達［12］。HLA-G與其受體結合能夠通過阻斷免疫效應細胞的功能直接發揮免疫抑制作用或者通過誘導調節性T細胞（regulatory T cells，Tregs）、髓源性抑制細胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）的產生間接發揮免疫抑制功能［12］。近年來研究表明，HLA-G與其受體ILT4相互作用能夠引起抗腫瘤免疫應答受損導致腫瘤免疫逃逸，并且HLA-G高表達與疾病進展、臨床分期以及不良預后相關。除此之外，研究還證實HLA-G能夠控制自身免疫性疾病以及炎癥性疾病的發生與進展，并且與疾病療效反應相關［13］。但是，目前關于HLA-G與其受體ILT4在自身免疫性疾病中作用的研究仍然較為匱乏，仍需要進一步研究明確其作用及機制。

ANGPTL是一類分泌型糖蛋白，在脂質代謝、血管生成和炎癥過程中發揮重要作用。最近研究發現LILRB2（ILT4）及其小鼠直系同源配對的Ig樣受體B（paired immunoglobulin receptor B，PIRB）是ANGPTL的 受 體，LILRB2和PIRB分 別 表 達 于 人HSCs和小鼠HSCs上，并且ANGPTL與其受體LIL?RB2和PIRB結合能夠促進HSC的體外擴增和白血病的進展［8］。隨后研究證實，ILT4與其配體ANG?PTL2相互作用還能夠促進肺癌細胞的自我更新并且抑制其分化［8］。以上研究表明ILT4/ANGPTL2信號對正常干細胞以及腫瘤細胞的干性維持和遷移能力具有重要影響，抑制ILT4/ANGPTL2信號通路有望成為腫瘤免疫治療的新途徑。

補體片段C4d是補體經典活化途徑中C4裂解后的產物，是調控體液免疫應答的重要分子，可作為自身免疫性疾病或抗體介導的移植排斥反應疾病活動的標志物［14］。研究發現ILT4可作為可溶性補體片段C4d受體，細胞表面的ILT4與可溶性單體C4d相互作用能夠引起C4d的內吞作用［4］。此外，C4d在腫瘤的發生與發展中也發揮重要作用，研究認為補體片段C4d可作為腫瘤早期診斷與預后判斷的生物學指標［14］。那么，補體片段C4d在腫瘤中的作用是否與其細胞受體ILT4有關目前仍不清楚，值得進一步研究證實。

Sema4A屬于Sema家族的成員之一，主要表達在DC、巨噬細胞、B細胞。最新研究發現表達于DC上的Sema4A是CD4+T細胞上ILT4的重要配體分子，Sema4A與其受體ILT-4結合可以促進Th2細胞分化以及IL-4、IL-5和IL-13的產生，抑制Th1細胞分化和IFN-γ的產生，從而發揮了強大的免疫負調節作用［7］。這提示ILT-4/Sema4A軸對免疫系統的負調節作用有可能參與了機體的病理生理過程。Sema4A與其受體ILT-4在腫瘤或免疫性疾病中所發揮的作用是未來非常值得研究的方向，并且有望為以ILT-4/Sema4A軸為靶點的治療提供科學理論依據。

2 ILT4的免疫調節功能

2.1 ILT4與DC DC的成熟和激活在適應性免疫反應中起關鍵作用。ILT4與HLA-G相互作用能夠抑制DC成熟，降低其抗原遞呈能力，從而影響了T細胞免疫應答的啟動［15-16］。初始T淋巴細胞活化需要抗原提呈細胞（antigen presenting cell，APC）提供信號，而高表達ILT4的DC可抑制T淋巴細胞活化所需的相應信號，進而抑制T淋巴細胞的增殖與活化，誘導Th細胞無反應性［15］。DC-10是近來發現的一種耐受型DC細胞亞群，分泌大量IL-10，同時表達HLA-G分子及其受體ILT4，DC-10能夠通過IL-10及HLA-G/ILT4信號傳導過程，誘導產生1型調節性T細胞（type 1 regulatory T cell，Tr1），抑制免疫反應，在自身免疫性疾病或對誘導和維持移植耐受具有重要作用［15-17］。

2.2 ILT4與效應T細胞已報道表達于DC上的ILT4與HLA-G結合，能夠抑制DC成熟，從而促進無能性CD4+T細胞產生［15］。隨后研究表明CD14+DC表達的ILT4能夠抑制初始CD8+T向細胞毒性T淋巴細胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）分化，而促進Th2細胞產生細胞因子IL-4、IL-5、IL-13，同時研究表明外源性添加ILT4蛋白能夠抑制CTL啟動，而阻斷ILT4可以促進CTL產生［18］。然而另外研究發現，在體外實驗中，經過Poly I∶C刺激后，ILT4+BDCA-3+DC細胞產生IL-12β、TNF-α及趨化因子CCL3，趨化因子CCL3已被證明可促進CD8+T細胞的分化、遷移，IL-12β與Th1或Th17的生成有關［19］。因此，ILT4對效應T細胞的影響仍存在爭議，需要進一步研究證實。2.3 ILT4與調節性T細胞ILT4作為一種主要在DC中表達的免疫抑制受體，參與誘導不同Tregs的產生，包括CD4+CD25+Treg，CD8+CD28-抑制T細胞和Tr1細胞［15，20］。在腎移植受者中，用雷帕霉素治療后DC上ILT4的表達增加，且與CD4+CD25+Treg細胞和CD8+CD28-抑制T細胞數量呈正相關，這表明mTOR抑制劑能夠促進免疫抑制受體ILT4以及免疫抑制細胞Tregs和MDSCs的產生，然而ILT4、Tregs以及MDSCs三者之間相互作用的機制尚不清楚［20］。Tr1是初始CD4+T細胞分化而來的誘導型Tregs，其特點是能生成具有免疫抑制功能的IL-10，最近的一項研究表明，DC-10上的ILT4通過ILT4/HLA-G依賴方式誘導Tr1分化［15］。體外實驗證明，阻斷ILT4可減弱或消除對Tr1的誘導作用，這表明ILT4參與了誘導Tr1產生的機制［15，21］。

2.4 ILT4與髓源性抑制細胞MDSCs是骨髓來源的一群異質性細胞，具有顯著抑制免疫細胞應答的能力。最近的研究表明ILT4在孕婦的粒細胞樣的MDSCs中表達上調，ILT4與HLA-G的結合可顯著增加MDSC的比例和抑制活性，而阻斷ILT4可消除以上作用，表明ILT4對于MDSC介導的免疫耐受至關重要［22］。另外研究發現，阻斷ILT4可以減少Tregs和MDSCs產生，增強抗腫瘤反應［23］。動物實驗研究表明，PIRB信號對于MDSC介導的免疫抑制至關重要，抑制PIRB信號通路可促進MDSC向M1巨噬細胞分化，從而起到殺傷腫瘤作用［24］。總的來說，ILT4介導MDSC的成熟和功能的調節，促進了腫瘤免疫逃逸。

3 ILT4與疾病

3.1 ILT4與腫瘤

3.1.1 ILT4與血液腫瘤研究發現ILT4影響腫瘤的發展并調節腫瘤微環境中免疫細胞的功能［25］。在血液腫瘤中，ILT4和PIRB可能參與了白血病的發生與發展［5，26-27］。早期已有研究發現ILT4在慢性淋巴細胞白血病患者的B淋巴細胞上表達，但在正常人的B淋巴細胞上不表達，提示ILT4可能參與B細胞的惡性轉化［26］。隨后在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）研究中發現，急性單核細胞白血病的腫瘤細胞中ILT4表達較高，ILT4 mRNA的水平在急性單核細胞白血病患者外周血中比在其他亞型AML表達至少高4倍，并且發現人類臍帶血HSC上也表達LILRB2，LILRB2與ANGPTL結合能夠促進HSCs體外擴增［5］。動物實驗研究表明，在小鼠AML模型中，ANGPTL與PIRB的結合能夠激活HSC和腫瘤細胞中的Ca2+/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶4（calcium/calmodulin-dependent protein kinase 4，CAMK4），從而導致HSC的重新聚集和白血病的發展［5，27］。最新進一步研究發現，CAMKs能夠促進AML的發展，CAMKs的高表達與患者的總體存活率降低相關，并且發現CAMKs活性受PIRB信號傳導的調節，這提示由PIRB信號調節的CAMK激酶活性對AML的發生與發展至關重要［27］。然而，ILT4在各種血液腫瘤的研究相對匱乏，其在血液腫瘤中扮演的角色仍需要大量的研究證實。

3.1.2 ILT4與實體腫瘤研究發現ILT4在腫瘤細胞中過度表達與腫瘤患者的淋巴浸潤、分化程度、腫瘤轉移和生存期密切相關，如胰腺癌、非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）、乳腺癌、子宮內膜癌、肝癌、結直腸癌和食管癌［8，28-35］。近年來關注較多的是肺癌，研究表明自分泌的ANGPTL2可以與NSCLC腫瘤細胞上的ILT4結合，激活下游的SHP2-CAMK1-CREB信號通路，從而促進腫瘤細胞增殖，以及抑制腫瘤細胞凋亡和分化［8］。另一研究發現ILT4通過細胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）信號通路上調NSCLC中血管內皮生長因子C的表達，促進腫瘤進展和轉移［29］。隨后研究發現在NSCLC細胞中，ILT4能夠上調HLA-G的表達，HLA-G與ILT4結合，能夠促進腫瘤細胞的遷移和轉移。更重要的是，自分泌的HLA-G可以反過來上調腫瘤細胞中ILT4的表達，形成正反饋以促進腫瘤進展［30］。進一步研究表明ILT4與HLA-G結合促進NSCLC的遷移和侵襲是由于介導了腫瘤細胞中ERK信號通路的激活和磷酸化增強［30］。在結直腸癌研究中，2019年CAI等［34］研究表明人類結直腸癌組織中ILT4和HLA-G共表達，并且與不良預后因素有關。在體外實驗中，HLA-G融合蛋白處理也以劑量依賴性方式增加了ILT4表達，從而激活蛋白質絲氨酸蘇氨酸激酶（protein-serinethreonine kinase，AKT）和ERK信號傳導，并促進結直腸癌細胞的增殖，遷移和侵襲。另外，阻斷ILT4能夠抑制由HLA-G誘導的AKT和ERK活化以及結直腸癌細胞的惡性特征［34］。因此，以上研究提示了ILT4有可能成為腫瘤預后判斷的生物學指標及治療腫瘤的新靶標。

3.2 ILT4與自身免疫性疾病研究發現在系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血中漿細胞樣DC和髓樣DC上ILT4的表達均較健康人顯著降低；且體外實驗發現在SLE患者中ILT4能夠抑制DC的免疫功能，而在健康人中ILT4對DC的成熟或免疫功能無影響［36］。在銀屑病關節炎研究中發現，患者單核細胞上的ILT4的表達減低，且與疾病活動呈負相關，經治療后患者單核細胞上的ILT4顯著增加［37］。最近在免疫性血小板減少癥（immune thrombocytopenia，ITP）患者中發現CD8+CD28-抑制性T細胞（suppressor T cells，Ts）數量和免疫抑制功能降低，進而體外研究發現健康人的Ts細胞能夠上調單核細胞上的ILT4表達，而ITP患者的Ts細胞不能上調單核細胞上ILT4的表達，且不能誘導APC耐受，這提示ILT4異常表達和Ts細胞免疫抑制功能降低有關，這可能參與了ITP的發病［9］。以上結果表明ILT4在自身免疫疾病的發病中扮演了重要作用，有望作為疾病活動和療效判斷的免疫學標記。

3.3 ILT4與移植免疫早期研究發現ILT4在非專職性APC內皮細胞上的表達增加，通過提高APC的耐受性，從而抑制了CD4+T細胞的激活，可以預防同種異體移植排斥反應［38］。在腎移植研究中發現，與接受麥考酚酸酯和糖皮質激素的移植受者相比，接受雷帕霉素治療的受者隨訪至2年時DC上ILT4表達上調，并且伴隨Tregs和CD8+CD28-T細胞的數量和血清HLA-G水平增加［20］。在肝移植研究中發現，由他克莫司轉換為西羅莫司（雷帕霉素）治療后，移植受者DC上ILT4表達以及Tregs的數量均增加［39］。以上結果提示ILT4可能是mTOR抑制劑發揮免疫調節作用的新途徑，并且有望成為治療移植排斥反應的新靶點。異基因造血干細胞移植最常見的并發癥是移植物抗宿主反應（graft-versus-host disease，GVHD），BIEDRON等［10］研究發現移植后0~Ⅰ級GVHD患者單核細胞、NK細胞上ILT4受體的表達水平均高于Ⅱ~Ⅳ級GVHD患者，這提示ILT4表達與GVHD的強度有關，有望作為移植后GVHD發生和嚴重程度的預測指標。目前ILT4在移植免疫中的研究較少，其在移植免疫中的作用以及作用機制尚不明確，有待進一步研究闡明。

4 結語

綜上所述，ILT4通過與不同配體結合發揮生物學作用，并且參與調節DC、效應T細胞、Tregs以及MDSCs等免疫細胞的功能。最近研究表明ILT4參與了腫瘤、自身免疫性疾病與移植免疫的發生、發展，但是目前ILT4在這些疾病中扮演的作用及其機制尚不明確。因此，進一步研究ILT4的生物學功能及其在腫瘤、自身免疫性疾病、移植免疫中的作用機制，有望為以ILT4為靶點的免疫治療提供理論依據。