中性粒細胞表面分化抗原CD67 CD24在陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥表達水平及臨床意義

丁 園，熊 濤

(湖北省漢川市人民醫院醫學檢驗科, 湖北 孝感 431600)

陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)為一種后天獲得性造血干細胞基因突變的溶血性疾病，患者磷脂酰肌醇糖苷-A(phosphatidylinositol glycanclass-A,PIG-A)基因突變，導致糖肌醇磷脂(glycosylphosphatidylinositol,GPI)錨合成障礙，繼而誘發一系列由錨缺失引起的細胞功能變化[1]。PNH臨床表現主要為貧血、血紅蛋白尿、感染等，與再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)臨床表現相似，臨床誤診或漏診并不少見[2]。近年，利用單克隆抗體技術及流式細胞術檢測中性粒細胞表面分化抗原CD55、CD59，成為診斷PNH的重要手段，較傳統溶血試驗更具敏感性[3]。外國學者也指出，PNH患者不僅存在CD55、CD59缺失，其中性粒細胞表面還可見CD67、CD24缺失，CD67、CD24表達水平也能輔助診斷PNH[4]。基于此，本研究就PNH、AA及對照組患者中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表達水平展開分析，并評估上述分化抗原對PNH的診斷價值，為PNH診療提供參考依據，如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性分析2018年2月至2019年12月我院32例PNH患者(PNH組)臨床資料，并收集同期入院治療的28例AA患者(AA組)及32例健康體檢者(對照組)臨床資料。納入標準：PNH及AA均符合《血液病診斷及療效標準》[5]診斷標準；AA患者不合并PNH；年齡>18歲；相關資料完整。排除標準：對照組排除體檢前3個月內出現感染、輸血等情況者。

1.2方法:采用熒光免疫標記法檢測中性粒細胞表面分化抗原CD67、CD24、CD55、CD59：采集清晨空腹外周靜脈血，取100μL全血置于管中，1號管加入20μL同型對照(藻紅蛋白標記的鼠抗人單克隆抗體)，2號管加入20μL熒光抗體CD67；室溫避光30min，在5根試管中分別加入2mL溶血素，避光10min；溶血后，離心1000r/min，5min，棄去上清液；使用2mL磷酸緩沖鹽溶液洗滌2次，再懸于0.5mL磷酸緩沖鹽溶液中，使用流式細胞儀檢測(美國BD公司，型號：FACS Calibur)，以細胞物理參數前向、側向散射光的點狀圖設門，確定中性粒細胞細胞群，以同型抗體為陰性對照；使用上述相同的步驟檢測中性粒細胞表面CD24、CD55、CD59表達水平。

2 結 果

2.13組基線資料比較:3組性別、年齡、體質量指數(body mass index,BMI)、吸煙史、飲酒史比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 3組基線資料比較

2.23組中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表達水平比較:3組中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表達水平比較，均為PNH組

表2 3組中性粒細胞表面CD67 CD24 CD55 CD59表達水平比較

2.3PNH組中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表達水平的相關性分析:經Pearson相關性分析，發現PNH組中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表達水平均呈顯著正相關(P<0.05)，見表3。

表3 PNH組中性粒細胞表面CD67 CD24 CD55 CD59表達水平的相關性分析

2.4中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59及其聯合檢測對PNH診斷價值分析:經ROC曲線分析，發現中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59表達水平均對PNH具有較高診斷價值(AUC=0.961、0.967、0.972、0.995，P<0.05)，其cut-off值分別為81.88%、83.64%、84.42%、81.37%，且4項聯合檢測診斷價值最高(AUC=1.000，P<0.05)，見表4、圖1。

表4 中性粒細胞表面CD67 CD24 CD55 CD59及其聯合檢測對PNH診斷價值分析

圖1 中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59及其聯合檢測診斷PNH的ROC曲線分析

3 討 論

目前，PNH異常克隆增殖尚未闡明，可與免疫機制、抗凋亡機制、微環境改變等相關，但PNH細胞PIG-A基因突變引起的GPI錨鏈膜蛋白缺失，引起的血管內溶血機制已得到廣泛認可[6]。學術界普遍認為[7,8]，PNH發生發展過程中，最先累及中性粒細胞，其表面GPI錨鏈膜蛋白缺失可最早被檢出，其中衰變加速因子CD55及反應性溶血膜抑制物CD59是臨床最常研究的GPI錨鏈膜蛋白；細胞表面CD55、CD59表達缺失，導致細胞膜上缺乏抑制自身補體活性的物質，PNH細胞對自身補體異常敏感，遭到補體復合物攻擊，出現細胞破壞、消滅，而引起血管內溶血、血管栓塞等表現。因此，臨床也常通過檢測中性粒細胞表面CD55、CD59缺失情況，診斷PNH[9]。本研究也發現，3組中性粒細胞表面CD55、CD59表達水平比較，均為PNH組

除上述CD55、CD59外，CD67、CD24也是中性粒細胞表面GPI錨鏈膜蛋白，早在上世紀初，就有外國學者指出[12]，PNH患者血漿CD67、CD24呈低水平，中性粒細胞表面存在CD67、CD24缺失。然而后續相關報道較少，大部分研究集中于CD55、CD59與PNH的關系。本研究就中性粒細胞表面CD67、CD24表達情況與PNH的關系展開分析，也發現3組中性粒細胞表面CD67、CD24表達水平比較，均為PNH組

綜上所述，PNH及AA患者中性粒細胞表面CD67、CD24、CD55、CD59均存在不同程度缺失，PNH缺失程度更為顯著，可作為診斷依據，輔助臨床判斷。