一例奶牛出血性敗血癥的診斷體會(huì)

馬 亭

四川省涼山州昭覺縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川涼山 615000

0 引言

牛出血性敗血癥，又稱牛巴氏桿菌病，是由牛多殺性巴氏桿菌所引起的一種急性、熱性傳染病。多殺性巴氏桿菌是一種條件性致病菌，存在于健康動(dòng)物體內(nèi)，當(dāng)外界刺激引起動(dòng)物免疫能力下降時(shí)，引起動(dòng)物發(fā)病。該細(xì)菌血清型眾多，在毒力和流行病學(xué)等方面生物學(xué)特異性差異很大。牛多殺性巴氏桿菌感染無年齡和性別特異性，各個(gè)品種的牛均易感，但黃牛、水牛和奶牛更為易感。該病主要通過發(fā)病動(dòng)物的分泌物、排泄物傳播，發(fā)病一般無季節(jié)特異性，但冷熱交替的潮濕多雨季節(jié)較為常見[1]。

雖目前已經(jīng)有成熟的商品化疫苗，但由于不合理的免疫規(guī)程及飼養(yǎng)管理，該病在我國主要畜牧養(yǎng)殖地區(qū)仍廣泛流行。2020年11月底，某奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)引進(jìn)的奶牛突然發(fā)病，經(jīng)獸醫(yī)站專業(yè)工作人員診斷為牛巴氏桿菌病。由于診斷治療及時(shí)，除了3 頭患病奶牛由于發(fā)病較急死亡外，其余均治療痊愈，疫情得到了有效控制，以下將對(duì)此次疫病的診治過程進(jìn)行介紹。

1 發(fā)病情況

2020年11月，某奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)從外地引進(jìn)10 頭奶牛，在隔離飼養(yǎng)期間，奶牛突然出現(xiàn)精神沉郁、食欲不振的癥狀，隨后腹瀉拉稀。該病發(fā)病急、傳染快，隨后隔離飼養(yǎng)的奶牛均發(fā)病，且死亡3 頭。但由于此批次奶牛為隔離飼養(yǎng)，因此，同一養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的其他牛群未發(fā)病。

2 臨床表現(xiàn)

病牛發(fā)病初期體溫升高，可達(dá)41～42 ℃，隨后出現(xiàn)全身癥狀，精神沉郁，食欲和飲欲廢絕，反芻活動(dòng)停止。由于高熱，病牛脈搏加快、鼻鏡干燥、結(jié)膜潮紅，呼吸心跳加快，病牛發(fā)病后期出現(xiàn)腹瀉癥狀，病程較短，通常在腹瀉后出現(xiàn)體溫迅速下降，隨后死亡。

3 解剖變化

對(duì)病死的奶牛進(jìn)行剖檢可發(fā)現(xiàn)全身性的病理變化，全身黏膜、漿膜、皮下、肺、肌肉存在散在的點(diǎn)狀出血；心、肝、腎等實(shí)質(zhì)器官變性；大小腸出現(xiàn)不同程度的出血淤血，腸黏膜脫落，腸內(nèi)容物混有血液；全身淋巴結(jié)如頜下淋巴結(jié)、頸上淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)等出血、充血、腫脹。胸腹，腹腔和心包內(nèi)有大量的漿液纖維樣滲出物。

4 病原鑒定

使用發(fā)病死亡實(shí)驗(yàn)對(duì)牛的肝臟和脾臟進(jìn)行觸片檢測(cè)，經(jīng)革蘭氏、瑞氏和印度墨汁染色并鏡檢。革蘭氏染色發(fā)現(xiàn)大量革蘭氏染色陰性，大小不一的短桿菌；瑞氏染色結(jié)果顯示短桿菌兩極濃染，符合巴氏桿菌的染色特性；印度墨汁染色結(jié)果可見短桿菌周圍有明顯的莢膜。為了進(jìn)行進(jìn)一步的診斷和治療，使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）對(duì)病原體進(jìn)行了進(jìn)一步鑒定，并對(duì)其進(jìn)行藥敏試驗(yàn)檢測(cè)，確定最合適的治療藥物[2，3]。

5 分子生物學(xué)檢測(cè)

為了對(duì)病原體進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)鑒定，參照文獻(xiàn)并設(shè)計(jì)合成了針對(duì)多殺性巴氏桿菌16S rRNA和Kmt1的鑒定引物，隨后將無菌采集的病死牛的肝臟置于血清肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌培養(yǎng)，并用商品化的細(xì)菌DNA提取試劑盒提取細(xì)菌DNA[4]。以提取的細(xì)菌DNA作為PCR模板，使用合成的兩對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核酸電泳檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)16S rRNA引物擴(kuò)增出大小為1 500 bp左右的特異性條帶，kmt1引物擴(kuò)增出450 bp左右的特異性條帶，將PCR產(chǎn)物送至生物科技公司進(jìn)行測(cè)序并將測(cè)序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blast比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)，引起此次疫情的病原體為多殺性巴氏桿菌，且kmt1基因可以作為快速診斷該病原體的特異性基因[5]。

6 藥敏試驗(yàn)

為了選擇治療本次疫病的有效藥物，對(duì)分離到的病原微生物進(jìn)行藥敏檢測(cè)。挑取單個(gè)菌落接種到血清肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌培養(yǎng)并稀釋至合適濃度制備菌懸液，用無菌棉簽蘸取菌懸液均勻涂布到血瓊脂平板上，待平板干燥后使用無菌的鑷子將多種藥敏紙片平貼到培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)24 h后測(cè)量藥敏紙片的抑菌圈大小，以確定病原體對(duì)藥物的敏感性。本次分離到的多殺性巴氏桿菌對(duì)復(fù)方新諾明、新霉素、阿莫西林、慶大霉素、頭孢曲松高度敏感，對(duì)先鋒必、土霉素、磺胺甲惡唑中毒敏感，對(duì)青霉素、甲氧芐啶低度敏感，對(duì)紅霉素、米諾環(huán)素、妥布霉素、氟哌酸、林可霉素、頭孢孟多、氯霉素耐受。因此，針對(duì)本次疫情，建議采用復(fù)方新諾明、新霉素、阿莫西林等抗生素進(jìn)行聯(lián)合給藥和交替給藥，以防細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性[3，6～8]。

7 防治方法

對(duì)發(fā)病牛群和健康牛群進(jìn)行嚴(yán)格的隔離，對(duì)牛群圈舍及其飼養(yǎng)的相關(guān)用具使用過氧乙酸或氯制劑進(jìn)行嚴(yán)格消毒，同時(shí)對(duì)運(yùn)輸發(fā)病牛群的車輛及牛群經(jīng)過的道路進(jìn)行消毒，每天1 次，連續(xù)7 天。禁止患病牛群及健康牛群的飼養(yǎng)人員相互流動(dòng)[4]。

使用復(fù)方新諾明、新霉素、阿莫西林等抗生素對(duì)發(fā)病牛群進(jìn)行聯(lián)合給藥和交替給藥，以防止細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，視發(fā)病牛群的痊愈情況給藥3～5 天，同時(shí)在飼料和飲用水中拌入抗生素和黃芪多糖等添加劑，提高牛群的免疫力。對(duì)發(fā)病未死亡的奶牛進(jìn)行牛巴氏桿菌滅活疫苗緊急免疫，每頭4～6 mL。

經(jīng)過緊急合理的診治與防控，聯(lián)合7 天左右的抗生素治療，除發(fā)病初期3 頭奶牛死亡，其余發(fā)病奶牛逐漸痊愈，本次疫情得到了有效的控制。

8 體會(huì)

多殺性巴氏桿菌是一種條件性致病菌，其可以存在于健康動(dòng)物體內(nèi)，當(dāng)外界環(huán)節(jié)發(fā)生猛烈變化時(shí)引起動(dòng)物體應(yīng)激，導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)病。本次發(fā)病的牛群是從外地剛經(jīng)長途運(yùn)輸引進(jìn)，且恰逢氣溫發(fā)生猛烈變化，陰雨連綿，因此，本次牛群發(fā)病的主要原因可能是新引進(jìn)牛群的抗體水平較低，且長途運(yùn)輸加冷熱交替引起動(dòng)物體應(yīng)激導(dǎo)致發(fā)病。

該病病程短、發(fā)病急、傳染性快，一旦發(fā)病可以引起大規(guī)模廣泛傳播。因此，一旦發(fā)現(xiàn)疫情，應(yīng)及時(shí)將發(fā)病牛群和健康牛群進(jìn)行隔離，并及早診斷和治療。由于本次疫情前，養(yǎng)殖人員嚴(yán)格執(zhí)行了新引入牛群應(yīng)先隔離觀察待無明顯疾病后方可合群的飼養(yǎng)規(guī)定，將疫情的范圍控制到了最小，沒有感染養(yǎng)殖場(chǎng)中的其他健康牛群。

本次疫病治療時(shí)使用復(fù)方新諾明、新霉素、阿莫西林等抗生素進(jìn)行聯(lián)合和交替給藥，選擇的均是對(duì)本次疫病分離到的多殺性巴氏桿菌高度敏感的抗生素，因此，在藥物治療1～2 天后，發(fā)病牛群的病情出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)；在3～5 天后，大部分病牛基本痊愈。對(duì)疫病病原體的快速診斷和藥物篩選，有助于快速有效控制疫情并減少藥物浪費(fèi)，同時(shí)也降低了多重耐藥菌株產(chǎn)生的幾率。