一例鴨傳染性漿膜炎的診斷

葛向平

（山東省膠州市動物疫病預防與控制中心 266300）

鴨傳染性漿膜炎由鴨疫里默氏桿菌（Rimerella anatipestifer，RA）引起的一種慢性或急性敗血性傳染病，又稱為鴨疫里默氏菌病，本病無明顯季節性，一年四季均可發生，春冬季節較為多發，通常具有1～3d 的潛伏期，有時達到7d 左右。該病的主要傳播途徑是呼吸道或感染的皮膚傷口，空氣傳播是重要的傳播途徑之一，感染該病原菌后主要侵害雛鴨，除此之外也可侵害雞、鵝、鵪鶉等多種禽類，主要癥狀為纖維素性氣囊炎、心包炎和肝周炎[1]，發病鴨出現站立不穩、飲食廢絕、精神萎靡、頭部震顫等一系列神經癥狀，嚴重阻礙鴨的生長，鴨發病率為5%～90%，病死率高達80%，是危害養鴨業的重要細菌性傳染性疾病。

鴨疫里默氏桿菌在自然界分布廣泛，公認的有21 種血清型[2]，報道中分離的鴨疫里默氏桿菌也有多種血清型，李書光等在50 日齡種鴨分離到一株2 型鴨疫里默氏桿菌[3]，郝東敏等在13 日齡肉鴨中分離到一株7 型鴨疫里默氏桿菌[4]，孔桂慧等從29 周齡產蛋鴨分離到一株1 型鴨疫里默氏桿菌[5]，由于不同鴨疫里默氏桿菌血清型之間的交叉免疫保護力差，臨床上使用抗生素不規范、濫用，加大了該病的防治難度[6-7]。

2020 年6 月份，山東省某地一養鴨場的鴨群發病，懷疑鴨傳染性漿膜炎，遂送樣進行診斷。

1 發病情況

一養鴨場14 日齡雛鴨出現精神不振、采食下降等現象，并出現癱瘓、神經癥狀，每天死亡50 只左右，剖檢死亡鴨可見纖維素性氣囊炎、心包炎和肝周炎。根據患病鴨的臨床癥狀及病理解剖變化，初步懷疑該鴨群感染了鴨疫里默氏菌病，為了進一步確定該病原，進行病原分離、鑒定。

2 病原分離

在無菌條件下，用接種環取肝臟、腦和心臟，分別接種到麥康凱培養基和含2%新生牛血清的TSA 培養基，將麥康凱培養基置37℃恒溫培養箱中培養，TSA 培養基置37℃、含5%CO2培養箱中培養。培養24h 后發現TSA 培養基均出現邊緣整齊的圓形菌落（圖1），而在麥康凱培養基上沒有菌落生長。

3 病原鑒定

3.1 鏡檢

將分離的菌落進行革蘭氏染色，染色后在光學顯微鏡下觀察其形態特點，結果革蘭氏陰性短桿菌（圖2）。

3.2 生化鑒定

參考生化反應管說明書，將分離菌分別接種于微量生化發酵管中觀察結果。分離菌不發酵乳糖、半乳糖、葡萄糖、果糖，甲基紅、硫化氫產氣試驗、過氧化氫酶試驗均為陰性，明膠試驗和過氧化氫酶試驗結果均為陽性，符合該菌的生化特性。

3.3 血清型鑒定

挑選單個菌落接種含2%新生牛血清的TSA 培養基上，培養24h 后洗脫菌液，與鴨疫里默氏桿菌1 型、2 型、7 型、10型陽性血清進行平板凝集發現，與7 型陽性血清能發生明顯的凝集反應，與其他型不發生凝集反應，可見分離菌的血清型為鴨疫里默氏菌7 型。

3.4 藥敏試驗

將分離的試驗菌涂布在含2%牛血清的TSA 培養基上，盡可能均勻，將大觀霉素、阿莫西林、紅霉素、頭孢唑肟、多黏菌素、磷霉素藥敏片貼在平板上，進行常規藥物的藥敏試驗，置37℃、含5%CO2微氧氣條件下培養24～48h。結果發現，該分離菌株對大觀霉素、阿莫西林、紅霉素、頭孢唑肟高度敏感，對多黏菌素、磷霉素不敏感。

3.5 PCR 鑒定

用鴨疫里默氏桿菌特異性引物進行PCR 鑒定，引物序列如下，F：5'-ATTAGTATTGAAAGCTCCG-3'，R：5'-TCCGAAGAAAACCGTATT-3'，擴增片段約為800bp，進行PCR 擴增。取菌液2ml，3000rpm 離心5min，棄上清，用無菌dd H2O 重懸菌液，煮沸10min，5000rpm 離心5min，取上清液作為模板；PCR 體系：PCR mix12.5μl、模板2μl、上游引物各1μl、下游引物1μl，補足無菌dd H2O 至25μl，同時設立陰性對照。反應條件：95℃預變性3min；95℃變性30s，48℃退火30s，72℃延伸45s，共30 個循環；72℃延伸7min。結束后，取PCR 產物用1%的瓊脂糖進行凝膠電泳，在凝膠成像儀下觀察結果，結果與預期相符，出現大小約為800bp 的目的條帶（圖3），由此可以確定該場雛鴨感染了鴨疫里默氏桿菌。

3.6 分離菌株對雛鴨的致病力試驗

將新鮮培養的鴨疫里默氏桿菌接種TSA 平板，37℃、5%CO2培養箱內培養24h 后，用無菌PBS 洗滌，洗滌兩次，最后用PBS 重懸并調整至菌數為2×106CFU/mL，腿部肌肉接種20日齡櫻桃谷鴨10 只，1ml/只，接種后10d 內雛鴨全部死亡，剖檢可見明顯的纖維素性氣囊炎、心包炎和肝周炎，表明該株菌對雛鴨確有較強的致病力。

4 小結

隨著養鴨業的不斷發展，規模化養殖越來越多，養殖密度的增加導致鴨傳染性漿膜炎的發病率越來越高，對養鴨業造成了嚴重的經濟損失，而此類疾病在診斷過程中很容易與大腸桿菌感染混淆，本試驗通過對剖檢鴨進行細菌分離、生化鑒定、PCR 鑒定、血清學鑒定、動物回歸等一系列試驗表明，分離的菌為鴨疫里默氏桿菌7 型，實驗室通過藥敏試驗及時給養殖戶提供了治療及用藥方向。

目前，鴨疫里默氏桿菌公認的血清型有21 種，程安春等報道鴨疫里默氏桿菌還存在新的血清型（22～25 型）[8]。由于不同血清型的抗原性存在差異，無交叉免疫保護力，而且研究發現，不同省份地區鴨疫里默氏桿菌優勢血清型分布也有差異[9-12]，這給鴨疫里默氏桿菌病的免疫防治帶來巨大挑戰。

市場可用的鴨傳染性漿膜炎預防疫苗主要有單價或多價滅活疫苗，飼養過程中一定要合理進行科學免疫，嚴格控制抗生素等藥物的使用，同時，改善飼養環境，規范養殖，加強飼養管理，定期更換墊料，另外，建議根據本地區的鴨疫里默氏桿菌流行血清型選擇合適的疫苗進行免疫，多舉并措，才能有效預防和減少此類疾病的發生。