鈣黏蛋白E、Stathmin-1表達在前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后復發中的預測價值

柯帥，徐消寒，苗明亮

（鄭州大學第一附屬醫院，河南 鄭州 450000）

前列腺癌是男性生殖泌尿系統惡性腫瘤，多發于老年人群，具有較高的發病率和病死率[1]。前列腺癌的發生與家族遺傳、飲食結構改變、吸煙、性激素水平等因素密切相關，患者常出現排尿、排便困難等局部壓迫癥狀，嚴重影響患者生活質量和生命安全[1-2]。根治性切除手術是前列腺癌的有效治療方式，經尿道等離子前列腺剜除術是其中的一種新型微創術式，具有精確切割、組織損傷小等優點，可在完整切除病灶的基礎上有效改善患者局部壓迫癥狀[3]。但晚期患者術后仍存在一定的復發率和骨轉移率，導致預后較差[3]。因此，積極尋求前列腺癌術后復發的預測指標對于改善患者預后具有重要意義。鈣黏蛋白E和Stathmin-1與前列腺癌的發生和發展具有密切聯系，下調鈣黏蛋白E的表達和上調Stathmin-1的表達均被認為會增加前列腺癌的侵襲和轉移風險[4-5]，但二者在前列腺癌經尿道等離子前列腺剜除術后復發中的預測價值仍不明確，尚未見有鈣黏蛋白E和Stathmin-1于前列腺癌術后復發關系的研究報道。基于此，本研究主要探討鈣黏蛋白E、Stathmin-1表達在前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后復發中的預測價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性選取2016年3月至2018年6月期間于我院經手術治療的108例前列腺癌患者作為研究對象，對其臨床資料和癌組織標本進行分析。納入標準：⑴符合《前列腺癌診斷治療指南》中前列腺癌的診斷標準[6]者；⑵直腸超聲檢查顯示前列腺增大體積＞30 ml者；⑶均行經尿道等離子前列腺剜除術治療，并保存癌組織標本者；⑷均完成2年隨訪，且具備完整的臨床及隨訪資料者。排除標準：⑴合并嚴重肝腎功能障礙、免疫性疾病者；⑵合并其他惡性腫瘤、嚴重心腦血管疾病者；⑶合并急性或嚴重機體炎癥反應者；⑷隨訪資料不完整者。本次研究已通過本院醫學倫理委員會的批準。依據入組患者隨訪2年后的復發或轉移情況將其分為兩組：有復發或轉移的復發組（n=32）和無復發及轉移的未復發組（n=76），復發組中年齡55～80歲，平均年齡（65.83±9.64）歲；TNM分期T1期-T2期19例，T3期-T4期13例；并發尿路梗阻21例；平均手術時間（94.46±4.72）min；未復發組中年齡57～83歲，平均年齡（66.17±10.25）歲；TNM分期T1期-T2期31例，T3期-T4期45例；并發尿路梗阻58例；平均手術時間（93.84±4.25）min，與復發組比較無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 組織芯片制備 兩組患者的癌組織樣本經10%甲醛溶液固定后，常規處理并石蠟包埋，按照病理結果標記組織靶點，準備合適大小的受體蠟塊。采用組織芯片制作儀（美國Beecher Instrument公司）制作組織芯片，每個組織芯片含128個位點。制作完成后進行4μm厚度連續切片，切片經常規脫蠟至水后進行EDTA高溫抗原修復、PBS沖洗、H2O2孵育，去除內源性過氧化物酶活性。

1.2.2 免疫組織化學染色 按照免疫組織化學試劑盒（北京中杉金橋生物公司）的操作說明進行染色，PBS沖洗3次后滴加正常血清，室溫孵育15 min，以兔抗人鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白單克隆抗體（均購自美國Santa Cruz公司）作為一抗，抗體稀釋至1:100，4℃過夜。采用PBS沖洗3次后滴加即用型二抗，經孵育15 min、PBS沖洗、DAB顯色劑顯色、蘇木精復染、脫水、封固等操作后，以PBS代替一抗作陰性對照，在顯微鏡下觀察切片染色情況，每張切片至少觀察5個高倍視野。

1.2.3 結果判定 鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白的染色結果以細胞膜和（或）細胞質出現棕黃色顆粒為陽性細胞，檢測結果依據兩種蛋白的染色強度和陽性細胞比例進行評分，染色強度無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色或棕褐色為2分；陽性細胞比例：1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。將陽性細胞比例得分與染色強度得分相乘判定最終檢測結果，總分1～2分為陰性，≥3分為陽性[7]。

1.3 統計學處理 采用SPSS 20.0軟件對實驗數據進行分析，本研究中涉及的計數資料用%表示，采用χ2檢驗；計量資料采用“±s”表示，兩組間比較采用兩樣本t檢驗，多因素分析采用Logistic回歸模型，采用Spearman進行相關性分析；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白表達及其與前列腺癌臨床病理特征的關系 經免疫組化染色檢測后，108例前列腺癌患者中鈣黏蛋白E陽性表達47例（43.52%），Stathmin-1蛋白陽性表達79例（73.15%）。不同TNM分期、Gleason評分、術前淋巴結轉移情況的前列腺癌患者其鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白的陽性表達率存在明顯差異（P＜0.05），不同年齡、術前前列腺特異性抗原（prostate specific antigen,PSA）水平、手術切緣情況前列腺癌患者的鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表達無明顯差異（P＞0.05），見表1。經Spearman分析結果顯示，前列腺癌組織中的鈣黏蛋白E和Stathmin-1表達呈負相關關系（r=-0.795，P＜0.05）。

表1 鈣黏蛋白E、Stathmin-1蛋白表達與前列腺癌臨床病理特征的關系（n/%）

2.2 前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后復發的單因素分析 單因素分析結果顯示，復發組和未復發組在年齡、術前PSA水平、飲酒史、吸煙史、合并基礎疾病及術中出血量方面比較無明顯差異（P＞0.05），兩組在術前淋巴結轉移、鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表達方面存在明顯差異（P＜0.05），見表2。

表2 前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后復發的單因素分析（n/%）

2.3 影響前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后復發的多因素Logisitic回歸分析 以前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后是否出現復發作為因變量，將單因素中差異存在統計學意義的因素（術前淋巴結轉移、鈣黏蛋白E和Stathmin-1蛋白表達）作為自變量，并進行賦值，術前淋巴結轉移（無=0，有=1）、鈣黏蛋白E表達（陽性=0，陰性=1）、Stathmin-1蛋白表達（陰性=0，陽性=1），并將其納入Logisitic回歸模型中，結果顯示：術前有淋巴結轉移、鈣黏蛋白E表達陰性和Stathmin-1蛋白表達陽性是前列腺癌患者經尿道等離子前列腺剜除術后復發的獨立預測因素，見表3。

表3 影響前列腺癌患者術后復發的多因素Logisitic回歸分析

3 討論

前列腺癌是一種較為常見的男性生殖系統惡性腫瘤，在歐洲老年男性中的發病率較高，致死率較高，嚴重威脅男性健康與生命安全。經尿道等離子前列腺剜除術在治療晚期前列腺癌和伴發尿路梗阻方面具有明顯優勢，可在完整切除前列腺癌灶組織基礎上有效解決患者的局部壓迫癥狀，改善患者術后生活質量[8]。但前列腺癌的術后仍存在35%左右的復發率[9]，而傳統的臨床病理數據難以準確預測某些前列腺癌患者復發或轉移。因此，尋找和發掘可靠的生化指標以評估前列腺癌患者術后復發風險就顯得尤為重要。

鈣黏蛋白E存在于上皮細胞膜上，是參與機體上皮細胞和鈣黏蛋白之間組成的一種重要成分，其表達缺失可對機體組織內的細胞黏附情況造成影響，進而影響腫瘤細胞的分化能力[10]。多項研究指出[11-12]，下調鈣黏蛋白E的表達可能有助于前列腺癌的侵襲和轉移。本研究結果顯示，108例前列腺癌患者中鈣黏蛋白E陽性表達率為43.52%，鈣黏蛋白E在TNM分期T3期-T4期、Gleason評分≥7分和術前有淋巴結轉移的前列腺癌患者組織中的陽性表達率相比于T1期-T2期、Gleason評分<7分和無淋巴轉移患者明顯更低，其中Gleason評分是前列腺癌分級的常用方法，其分數越高，提示前列腺癌的病情程度越嚴重。由此可見，鈣黏蛋白E的低表達與前列腺癌的發生發展密切相關。本研究結果還發現，鈣黏蛋白E陰性是前列腺癌患者術后復發的重要影響因素，提示其低陽性表達率可能對于臨床上評估患者術后復發具有較好的參考價值。由于鈣黏蛋白E表達降低導致其黏附性降低，增加腫瘤細胞之間的解離，進而缺乏接觸抑制并開始無線增殖，局部脫落，從而導致其浸潤和轉移，增加患者復發或轉移風險[13]。

Stathmin-1蛋白屬于一種微管不穩定蛋白，已被研究報道在胃癌、乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌組織中具有較高陽性表達率，與多種惡性腫瘤的發生密切相關[14]。本研究中結果顯示，108例前列腺癌患者中Stathmin-1蛋白陽性表達率為73.15%，Stathmin-1蛋白在TNM分期T3期-T4期、Gleason評分≥7分和術前有淋巴結轉移的前列腺癌患者組織中具有較高的陽性表達率，并與鈣黏蛋白E呈負相關關系。目前對于Stathmin-1蛋白參與腫瘤惡性轉變過程的機制尚不十分清楚，但已有多項研究發現其高表達陽性率與腫瘤的較高增殖活性有關，并能參與惡性腫瘤的轉移。本研究還發現Stathmin-1蛋白陽性表達是前列腺癌患者術后復發的獨立預測因素，其對前列腺癌復發患者的影響機制可能與Stathmin-1蛋白的高表達影響微管動力和紡錘體的形成，進而影響有絲分裂，使細胞周期分布改變，并影響細胞的生物學行為有關[15]。臨床上可將其與前列腺癌鈣黏蛋白E一起檢測用于指導和預測前列腺癌患者的復發或轉移，以盡早采取干預措施，改善患者預后。

綜上所述，鈣黏蛋白E在經尿道等離子前列腺剜除術后復發患者的組織中呈低表達，Stathmin-1蛋白則呈高表達，鈣黏蛋白E表達陰性和Stathmin-1蛋白表達陽性均是前列腺癌患者術后復發的重要影響因素，對于臨床上前列腺癌患者術后復發的風險評估具有一定的應用價值。