茯苓水提物UPLC指紋圖譜的建立及其鎮靜催眠作用的譜效關系研究

王天合 李慧君 張丹丹 羅心遙 夏和元 韓思婕 潘翔 萬明 葉曉川

摘 要 目的：建立茯苓水提物的超高效液相色譜（UPLC）指紋圖譜，并考察其與鎮靜催眠作用的譜效關系。方法：將10批不同產地茯苓經水提后得水提物。采用UPLC法測定該水提物，色譜柱為Waters HSS-C18，流動相為0.1%磷酸溶液-乙腈-甲醇（梯度洗脫），流速為0.4～0.2 mL/min，檢測波長為210、242 nm，柱溫為40 ℃，進樣量為2 μL。采用《中藥指紋圖譜相似度評價系統》（2012A版）建立10批茯苓水提物的指紋圖譜并進行共有峰指認。以小鼠的入睡率、入睡潛伏期和睡眠持續時間為單一藥效指標，考察戊巴比妥鈉協同作用下10批不同產地茯苓水提物的鎮靜催眠作用;將單一藥效指標和總藥效（由單一指標經層次分析法計算而得）進行數據轉化后，采用灰色關聯度分析法分析茯苓水提物指紋圖譜中各共有峰與單一藥效及總藥效的關聯度。結果：10批茯苓水提物共有24個共有峰，指認出11個成分，分別為16-羥基松苓新酸（6號峰）、16α-hydroxytrametendic acid（7號峰）、茯苓酸B（9號峰）、去氫土莫酸（10號峰）、茯苓酸A（12號峰）、豬苓酸C（15號峰）、3-O-乙酰基-16α-羥基松苓新酸（17號峰）、去氫茯苓酸（20號峰）、茯苓酸（21號峰）、松苓新酸（22號峰）、脫氫齒孔酸（24號峰）。經灰色關聯度分析發現，24個峰與睡眠持續時間的關聯度均大于0.6（0.611 5～0.811 8），與入睡潛伏期的關聯度除14、24、2號峰外，其余均大于0.6（0.605 9～0.790 4）;與入睡率的關聯度除23、19、17、5號峰外，其余均大于0.6（0.606 4～0.721 6）;與總藥效的關聯度除2、5、19號峰外，其余均大于0.6（0.619 0～0.781 2）;與總藥效關聯度排名前10位的色譜峰分別為15號峰（豬苓酸C）、16號峰、8號峰、11號峰、12號峰（茯苓酸A）、1號峰、7號峰（16α-hydroxytrametendic acid）、3號峰、9號峰（茯苓酸B）、20號峰（去氫茯苓酸）。結論：本研究建立了茯苓水提物的UPLC指紋圖譜，指認了11個共有峰成分;豬苓酸C等10種成分與鎮靜催眠總藥效關聯較大，初步揭示了茯苓鎮靜催眠作用的藥效物質基礎。

關鍵詞 茯苓;超高效液相色譜;指紋圖譜;鎮靜;催眠;譜效關系;灰色關聯度分析;小鼠

中圖分類號 R284.1;R285.5 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）05-0564-07

ABSTRACT? ?OBJECTIVE：To establish the UPLC fingerprint of Poria cocos aqueous extract， and to investigate its relationship with sedative and hypnotic effect. METHODS： Ten batches of P. cocos from different areas were extracted with water to obtain the aqueous extract. UPLC method was adopted. The determination was performed on Waters HSS-C18 column with mobile phase consisted of 0.1% phosphoric acid solution-acetonitrile-methanol （gradient elution） at the flow rate of 0.4-0.2 mL/min. The detection wavelengths were set at 210 and 242 nm. The column temperature was 40 ℃， and sample size was 2 μL. The fingerprints of 10 batches of P. cocos aqueous extracts were established by using the Similarity Evaluation System of TCM Fingerprint （2012A version）， and the common peaks were identified. The sedative and hypnotic effects of 10 batches of P. cocos aqueous extracts from different areas under the synergistic action of pentobarbital sodium were investigated by taking the sleeping rate， sleep latency and sleep duration of mice as the single efficacy index. After data transformation of single efficacy index and total efficacy （single indexes calculated by analytic hierarchy process）， grey correlation analysis was used to analyze the correlation between the common peaks in fingerprint of P. cocos aqueous extract and the single efficacy index and total efficacy. RESULTS： There were 24 common peaks in 10 batches of aqueous extract of P. cocos， and 11 components were identified， i.e. 16α-hydroxydehydrotrametenolic acid （peak 6）， 16α-hydroxytrametendic acid （peak 7）， poricoic acid B （peak 9）， dehydrotumulosic acid （peak 10）， poricoic acid A （peak 12）， polyporenic acid C （peak 15）， 3-O-acetyl-16α-hydroxydehydrotrametenolic acid （peak 17）， dehydropachymic acid （peak 20）， pachymic acid （peak 21），dehydrotrametenolic acid （peak 22）， dehydroeburicoic acid （peak 24）. Grey correlation analysis showed， the correlation between 24 peaks and sleep duration was greater than 0.6 （0.611 5- 0.811 8）; the correlation between 24 peaks and sleep latency was greater than 0.6 （0.605 9-0.790 4）， except for peaks 14， 24 and 2; the correlation of 24 peaks between sleeping rate was greater than 0.6 （0.606 4-0.721 6）， except for peaks 23， 19， 17 and 5; the correlation of 24 peaks between total efficacy was greater than 0.6 （0.619 0-0.781 2）， except for peaks 2， 5， 19. The top 10 chromatographic peaks related to the total efficacy were peak 15 （polyporenic acid C）， peak 16， peak 8， peak 11， peak 12 （poricoic acid A）， peak 1， peak 7 （16α-hydroxytrametendicacid）， peak 3， peak 9 （poricoic acid B） and peak 20 （dehydropachymic acid）. CONCLUSIONS：UPLC fingerprint of P. cocos aqueous extract was established and 11 components were identified. Ten components such as polyporus acid C are closely related to the total efficacy of sedation and hypnosis， which preliminarily reveal the material basis of the sedative and hypnotic effect of P. cocos.

KEYWORDS? ?Poria cocos; UPLC; Fingerprint; Sedation; Hypnosis; Spectrum-effect relationship; Grey correlation analysis; Mice

茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核，其藥用歷史悠久，始載于《五十二病方》，也收載于歷代版本的《中國藥典》中;其味甘、淡、平，在《神農本草經》中歸為上品，屬藥食同源中藥，久服可安魂養神，為九大仙品藥草之一，具有利水滲濕、健脾、寧心的功效[1]。茯苓在臨床上可單用或與其他中藥組成復方，常用于治療水腫、痰飲、脾虛、便溏泄瀉、心神不安、驚悸失眠[2]。茯苓主要含有多糖類、三萜類、蛋白質類、甾體類等化學成分[1]，已有文獻報道茯苓的多糖部位和乙酸乙酯部位均具有良好的鎮靜催眠作用[3]，但上述部位的成分復雜，具體有哪些成分具有鎮靜催眠活性尚不清楚。

中藥譜效關系研究是將中藥化學成分譜與中藥藥效活性有機結合，采用回歸分析、相關性分析、灰色關聯度分析、主成分分析、人工神經網絡、聚類分析等多種數學分析模型，可更全面、多角度地對中藥進行評價，常用于中藥質量評價、藥效物質基礎研究、質量標志物篩選、中藥組方配伍、中藥有效部位篩選以及提取純化工藝優化等方面[4-5]。基于此，本研究先將10批不同產地茯苓以水煎煮制得水提物，并建立其超高效液相色譜（UPLC）指紋圖譜;同時，以閾上劑量戊巴比妥鈉協同作用下的小鼠入睡潛伏期和睡眠持續時間，以及閾下劑量戊巴比妥鈉協同作用下的小鼠入睡率為鎮靜催眠指標，并結合灰色關聯度法進行譜效相關性分析，以期初步揭示茯苓鎮靜催眠的藥效物質基礎，為完善茯苓的質量評價標準提供依據。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有：Agilent1290型系列四元泵UPLC儀（美國Agilent公司）、Milli-Q型超純水系統（美國Millipore公司）、BT25S型十萬分之一分析天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]、AL204型萬分之一分析天平（瑞士Metter Toledo公司）;SCIENTZ-10ND型真空冷凍干燥機（寧波新芝生物科技股份有限公司）、DZF-6050型真空干燥箱（上海博訊實業有限公司）、KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、JSB6-02型電子計重秤（上海浦春計量儀器有限公司）、RE-6000型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）、5810R型高速冷凍離心機（德國Eppendorf公司）、PC3830A型三排A型秒表計時器（深圳市惠波工貿有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的10批不同產地茯苓藥材由本課題組前期在茯苓種植區收集，經湖北中醫藥大學藥學院葉曉川教授鑒定均為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos （Schw.）Wolf的菌核（10批茯苓藥材來源信息見表1）。其它藥品與試劑有：16-羥基松苓新酸、16α-hydroxytrametenolic acid、茯苓酸B、去氫土莫酸、茯苓酸A、豬苓酸C、3-O-乙酰基-16α-羥基松苓新酸、去氫茯苓酸、茯苓酸、脫氫齒孔酸對照品（成都普思生物科技股份有限公司，批號分別為PS010073、PS011188、PS010102、PS19092902、PS010109、PS011211、PS010088、PS010110、PS010086、PS010087），松苓新酸對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號Y08J7H8750），氯化鈉注射液（武漢濱湖雙鶴藥業有限責任公司，批號1901070801，規格100 mL ∶ 0.9 g），戊巴比妥鈉（天津天力化學試劑有限公司，批號20130307），艾司唑侖片（華中藥業股份有限公司，批號20190303，規格1 mg/片），安神膠囊（長春海外制藥集團有限公司，批號20190401，規格0.25 g/粒）;甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，水為超純水。

1.3 動物

本研究所用動物為SPF級雄性C57BL/6小鼠，體質量為18～22 g，由遼寧省實驗動物資源中心提供，實驗動物生產許可證號為SCXK（遼）2015-0001。小鼠飼養于湖北中醫藥大學實驗動物中心，環境溫度為20～25 ℃，相對濕度為40%～60%，每日光照與黑暗時間各12 h。本文涉及的動物實驗經湖北中醫藥大學倫理委員會批準，批準號為HUCMS201910010。

2 方法與結果

2.1 茯苓水提物UPLC指紋圖譜的建立

2.1.1 茯苓水提物的制備 10批不同產地茯苓藥材打粉，過三號篩后，稱取藥材粉末500 g，置于10 L圓底燒瓶中，加入10倍量（按mL/g計，下同）水浸泡過夜，加熱回流2 h，用300目濾布趁熱濾過，收集濾液;殘渣繼續加10倍量水回流提取1 h，用300目濾布趁熱濾過;合并2次濾液，于100 ℃水浴條件下濃縮為浸膏，再于真空條件下冷凍干燥，粉碎，即得茯苓水提物粉末。按茯苓生藥量計，S1～S10號茯苓水提物的得率分別為2.77%、3.11%、6.43%、4.33%、3.16%、3.77%、3.04%、3.45%、4.25%、3.64%。

2.1.2 色譜條件 色譜柱為Waters HSS-C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）;流動相為0.1%磷酸溶液（A）-乙腈（B）-甲醇（C），梯度洗脫（0～4 min，42%A→12%A，55%B→85%B，流速為0.4～0.2 mL/min;4～8 min，12%A→? ?0%A，85%B→97%B，流速為0.2 mL/min;8～10 min，97%B→100%B，3%C→0%C，流速為0.2～0.4 mL/min;10～15 min，100%B，流速為0.4 mL/min）;進樣量為2? ? μL;柱溫為40 ℃;檢測波長為210、242 nm[采用二極管陣列檢測器（DAD）]。

2.1.3 供試品溶液制備 取“2.1.1”項下10批不同產地茯苓水提物粉末各約1 g，精密稱定，分別置于50 mL錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲（功率500 W，頻率40 kHz）提取60 min，放冷后加甲醇補足丟失質量;以3 500 r/min離心15 min，取上清液5 mL于試管中，置于真空干燥箱中于60 ℃揮干溶劑，再加入1 mL甲醇復溶，用0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.1.4 對照品溶液制備 分別精密稱取16-羥基松苓新酸1.14 mg、16α-hydroxytrametenolic acid 1.08 mg、茯苓酸B 1.32 mg、去氫土莫酸1.02 mg、茯苓酸A 1.01 mg、豬苓酸C 0.49 mg、3-O-乙酰基-16α-羥基松苓新酸1.30 mg、去氫茯苓酸1.92 mg、茯苓酸2.18 mg、松苓新酸0.48 mg、脫氫齒孔酸0.88 mg分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得單一對照品溶液。精密吸取各對照品溶液2 mL于同一25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，以0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得混合對照品溶液。

2.1.5 精密度試驗 取“2.1.3”項下供試品溶液（S7號樣品水提物）適量，按“2.1.2”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄色譜圖，以20號峰（因其出峰時間適中、峰形良好，下同）為參照，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積。結果，各共有峰相對保留時間的RSD均小于0.6%（n=6），相對峰面積的RSD均小于2.2%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復性試驗 取“2.1.1”項下S7號樣品水提物粉末6份，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以20號峰為參照，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積。結果，各共有峰相對保留時間的RSD均小于0.4%（n=6），相對峰面積的RSD均小于3.0%（n=6），表明該方法重復性良好。

2.1.7 穩定性試驗 取“2.1.3”項下供試品溶液（S7號樣品水提物），分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h后，按“2.1.2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以20號峰為參照，計算各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積。結果，各共有峰相對保留時間的RSD均小于1.0%（n=6），相對峰面積的RSD均小于2.5%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內穩定性良好。

2.1.8 10批茯苓水提物樣品UPLC指紋圖譜的生成 取“2.1.1”項下S1～S10號樣品水提物粉末，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1.2”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。采用《中藥指紋圖譜相似度評價系統》（2012A版），以S7號樣品水提物圖譜為參照（因其色譜峰峰形較明顯，峰信號強度適中），設置時間窗寬度為0.1 s，采用全譜峰匹配法[6]進行色譜峰匹配，生成10批茯苓水提物的UPLC疊加指紋圖譜，詳見圖1;采用中位數法[6]生成對照圖譜（R），詳見圖2。

2.1.9 共有峰指認 取“2.1.4”項下混合對照品溶液按“2.1.2”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，詳見圖3。由圖1和圖2可見，10批茯苓水提物共含24個共有峰;通過與圖3比對，指認其中的6號峰為16-羥基松苓新酸，7號峰為16α-hydroxytrametendic acid，9號峰為茯苓酸B，10號峰為去氫土莫酸，12號峰為茯苓酸A，15號峰為豬苓酸C，17號峰為3-O-乙酰基-16α-羥基松苓新酸，20號峰為去氫茯苓酸，21號峰為茯苓酸，22號峰為松苓新酸，24號峰為脫氫齒孔酸。

2.1.10 相似度評價 將10批不同產地茯苓水提物的指紋圖譜導入《中藥指紋圖譜相似度評價系統》（2012A版）進行相似度評價。結果，242 nm波長下10批茯苓水提物的相似度在0.304～0.988范圍內;210 nm波長下10批茯苓水提物的相似度在0.264～0.991范圍內，詳見表2、表3。

2.2 戊巴比妥鈉協同作用下茯苓水提物的鎮靜催眠作用考察

茯苓藥性緩和，對小鼠的鎮靜催眠力緩，故本研究參考文獻[7-9]方法，考察閾上劑量戊巴比妥鈉協同作用下茯苓水提物對小鼠的入睡潛伏期（小鼠翻正反射消失到翻正反射出現的時間）和睡眠持續時間（注射戊巴比妥鈉開始到小鼠翻正反射消失的時間）的影響，以及閾下劑量戊巴比妥鈉協同作用下茯苓水提物對小鼠的入睡率（小鼠翻正反射消失達1 min以上即為入睡）的影響，以此來評價其鎮靜催眠的效果。

2.2.1 閾下劑量戊巴比妥鈉協同作用下茯苓水提物的鎮靜催眠作用 將130只小鼠隨機分為空白組（水）、艾司唑侖組（陽性西藥對照，0.26 mg/kg，劑量根據臨床等效劑量換算而得）、安神膠囊組（陽性中藥對照，0.315? ? g/kg，劑量根據臨床等效劑量換算而得）和茯苓S1～S10水提物組[27.3 g/kg（以生藥量計），劑量根據文獻[3]而得]，每組10只。各藥物用水制成灌胃混懸液。各組小鼠每天灌胃1次，灌胃體積為20 mL/kg，連續7天。末次給藥30 min后，各組小鼠分別腹腔注射閾下劑量的戊巴比妥鈉（28.5 mg/kg，參考文獻[7-9]和預實驗結果），觀察各組小鼠入睡的數量，計算入睡率（入睡率=小鼠入睡只數/小鼠總數×100%）。采用SPSS 24.0軟件對數據進行統計分析，計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義，結果見表4。

由表4可知，與空白組比較，艾司唑侖組和茯苓S4、S5、S8水提物組小鼠入睡率顯著升高（P<0.05或P<0.01），表明云南大理、河南商城、湖北羅田產地的茯苓水提物促進小鼠入睡的作用較強。

2.2.2 閾上劑量戊巴比妥鈉協同作用下茯苓水提物的鎮靜催眠作用 將130只小鼠按“2.2.1”項下方法分組及給藥。末次給藥30 min后，各組小鼠分別腹腔注射閾上劑量的戊巴比妥鈉（36 mg/kg，參考文獻[7-9]和預實驗結果），記錄小鼠的入睡潛伏期及睡眠持續時間。采用SPSS 24.0軟件對數據進行統計分析，計量資料均以x±s表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義，結果見表5。

由表5可知，與空白組比較，艾司唑侖組、安神膠囊組和茯苓S1～S7、S9～S10水提物組小鼠入睡潛伏期均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;艾司唑侖組、安神膠囊組和茯苓S1～S10水提物組睡眠持續時間均顯著升高（P<0.05或P<0.01），表明大部分產地的茯苓水提物對小鼠的入睡潛伏期和睡眠持續時間均具有較好的改善作用。

2.3 譜效關系分析

2.3.1 單一藥效和總藥效的數據轉化 參考文獻[10]方法，將“2.2”項下小鼠入睡率、入睡潛伏期、睡眠持續時間采用升高率或降低率進行藥效數據轉化，其中，升高率或降低率計算公式為Y′（k）=[Y0（k）-Y 0（k）]/Y 0（k），k為10批茯苓水提物的編號（k=1，2，3……10），Y0表示給藥組各單一藥效的原始數據，Y 0表示空白組各單一藥效的原始數據;采用層次分析法[10]計算小鼠入睡率、入睡潛伏期和睡眠持續時間對總藥效的權重系數，并計算鎮靜催眠總藥效（總藥效=入睡率權重系數×入睡率升高率+入睡潛伏期權重系數×入睡潛伏期降低率+睡眠持續時間權重系數×睡眠持續時間升高率）。結果，入睡率、入睡潛伏期、睡眠持續時間的權重系數分別為0.142、0.429、0.429，鎮靜催眠單一藥效及總藥效的轉化數據詳見表6。

2.3.2 數據處理 由于茯苓水提物的UPLC指紋圖譜共有峰數據與轉化后的藥效數據的量綱不一致，因此筆者參考文獻[11]方法，將轉化后的藥效數據（入睡率升高率、入睡潛伏期降低率、睡眠持續時間升高率、總藥效）與10批茯苓水提物共有峰數據采用均值法進行數據歸一化處理。將歸一化后的藥效數據作為參考序列[記為Y（k），將共有峰數據作為比較序列，記為Xi（k），計算參考序列與比較序列的灰色關聯系數[Ai（k）][12-13]，計算公式為Ai（k）=[Δi（k）min+ρ×Δi（k）max]/[Δi（k）+ρ×Δi（k）max]，其中ρ表示分辨系數，通常取0.5;Δi（k）=|Y（k）-Xi（k）|，i表示茯苓水提物UPLC指紋圖譜中的共有峰編號（i=1，2，3……24）。

2.3.3 灰色關聯度分析 基于“2.3.2”項下數據處理結果，分別計算各參考序列與比較序列之間灰色關聯系數Ai（k）的平均值，即為灰色關聯度。將關聯度按大小排序后的關聯序，可直觀反映茯苓水提物UPLC指紋圖譜中各共有峰對其鎮靜催眠作用的貢獻大小，揭示其主要藥效物質：當關聯度大于0.6時，表示該色譜峰代表的化學成分與藥效指標有關聯性;當關聯度大于0.8時，表示該色譜峰代表的化學成分與藥效指標有較大關聯性[10]。結果顯示，茯苓水提物UPLC指紋圖譜中24個色譜峰與睡眠持續時間的關聯度均大于0.6（0.611 5～0.811 8）;與入睡潛伏期的關聯度，除14、24、2號峰外，其余色譜峰均大于0.6（0.605 9～0.790 4）;與入睡率的關聯度，除23、19、17、5號峰外，其余色譜峰均大于0.6（0.606 4～0.721 6）;與總藥效的關聯度，除2、5、19號峰外，其余色譜峰均大于0.6（0.619 0～0.781 2）。這說明茯苓水提物對小鼠的鎮靜催眠作用是由多組分共同作用的結果。其中，與總藥效關聯度較大的前10位峰分別為15號峰（豬苓酸C）、16號峰、8號峰、11號峰、12號峰（茯苓酸A）、1號峰、7號峰（16α-hydroxytrametendic acid）、3號峰、9號峰（茯苓酸B）、20號峰（去氫茯苓酸），詳見表7。

3 討論

本研究基于茯苓的傳統用法，將茯苓進行煎煮后獲取其水提物，并建立其水提物的UPLC指紋圖譜，以期研究茯苓水提物鎮靜催眠作用的藥效物質基礎。筆者在建立10批不同產地茯苓水提物的UPLC指紋圖譜時，對S7號樣品水提物（湖北英山）進行全波長掃描，發現其色譜圖中大多數色譜峰在242 nm有最大吸收，少部分色譜峰在210 nm有最大吸收，故本試驗于242、210 nm雙波長下進行掃描并建立UPLC指紋圖譜。此外，在建立UPLC條件時發現，茯苓水提物的9、10號峰不易分離，后采取梯度流速的方法進行改善，可達到有效分離的目的。另由于茯苓藥材的產地差異和各色譜峰成分的含量高低差異，使得在進行10批不同產地茯苓水提物的制備時，部分色譜峰成分的含量發生變化，或某些小峰成分丟失，從而造成不同產地茯苓水提物的UPLC指紋圖譜的相似度偏低;也正是由于這些變化造成了這10批不同產地茯苓水提物鎮靜催眠的藥效差異，因此更有利于進行后續的譜效相關分析。

茯苓藥用歷史悠久，常作為大宗中成藥原料用于臨床，其用于治療精神類疾病或寧心安神時劑量宜大，臨床常用劑量為60 g/d，有時用量為30～100 g/d[14-16]。本課題組在前期研究基礎上，結合臨床寧心安神常用劑量，確定用于小鼠鎮靜催眠的生藥劑量為27.3 g/kg（約為臨床等效劑量的3倍）。

興奮性神經遞質及抑制性神經遞質的失調可引起失眠、焦慮、抑郁等諸多精神及心理疾病;戊巴比妥鈉是中樞神經系統的抑制劑，可通過抑制興奮性神經遞質谷氨酸、乙酰膽堿、去甲腎上腺素的釋放，發揮中樞抑制作用[17]。因此，本研究在閾上/閾下劑量戊巴比妥鈉協同作用下考察茯苓水提物的鎮靜催眠作用，結果發現，在戊巴比妥鈉協同作用下，茯苓水提物表現出一定的鎮靜催眠作用。

通過灰色關聯度分析發現，茯苓水提物24個共有峰與小鼠睡眠持續時間的關聯度均大于0.6，其中8、16號峰的關聯度大于0.8;而只有21個共有峰與小鼠入睡潛伏期的關聯度大于0.6、20個共有峰與入睡率的關聯度大于0.6，表明茯苓水提物中有更多的成分與睡眠持續時間相關聯，且從藥效結果（表4、表5）也可以看出茯苓水提物對睡眠持續時間的影響強于對入睡潛伏期和入睡率的影響。茯苓水提物各共有峰與總藥效的關聯度，除2、5、19號峰外，其余各峰的關聯度均在0.6～0.8之間（與鎮靜催眠總藥效有關聯），說明茯苓水提物發揮鎮靜催眠作用是其各色譜峰代表物質共同作用的結果。其中，與總藥效關聯度較大的前10位共有峰分別為15號峰（豬苓酸C）、16號峰、8號峰、11號峰、12號峰（茯苓酸A）、1號峰、7號峰（16α-hydroxytrametendic acid）、3號峰、9號峰（茯苓酸B）、20號峰（去氫茯苓酸）。

綜上所述，本研究建立了茯苓水提物的UPLC指紋圖譜，指認了11個共有峰成分;豬苓酸C，16號峰、8號峰、11號峰代表的成分，茯苓酸A，1號峰代表的成分， 16α-hydroxytrametendic acid，3號峰代表的成分，茯苓酸B，去氫茯苓酸等10種成分與鎮靜催眠總藥效關聯較大，茯苓水提物的鎮靜催眠作用是由多組分共同作用的結果。本研究初步揭示了茯苓鎮靜催眠作用的藥效物質基礎，可為茯苓質量標志物篩選以及茯苓飲片的質量控制提供參考。

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（收稿日期：2020-12-10 修回日期：2020-12-30）

（編輯：唐曉蓮）