頂空氣相色譜法測定鹽酸尼卡地平原料中殘留溶劑含量*

羅 晶，柳小秦，安學霞，戴 涌，李 霞，魏亞寧

（陜西省食品藥品監督檢驗研究院，陜西 西安 710065）

鹽酸尼卡地平臨床用于手術時異常高血壓的急救和高血壓性急癥等，通常采用一步Hantzch 合成法［1］或改良的兩步合成法［2］合成。人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）指導原則［3］Q3c“溶劑殘留量的要求”和2015 年版《中國藥典（四部）》通則0861“殘留溶劑測定法”［4］均要求，原料藥合成中使用的有機溶劑應按危害程度對殘留溶劑分級，并建立相應的分析控制方法。鹽酸尼卡地平的合成過程中使用了2015 年版《中國藥典（二部）》規定應限制使用的3 種第二類溶劑，包括甲苯、三氯甲烷和甲醇，以及原料藥重結晶所使用的第三類有機溶劑丙酮，而現行《中國藥典》在鹽酸尼卡地平原料國家標準方面，并未設置有機溶劑檢查項，故在原料藥質量控制方面存在缺陷與不足。本研究中建立的甲苯、三氯甲烷、甲醇和丙酮的溶劑殘留毛細管色譜柱氣相色譜（GC）頂空測定方法［5］，操作簡便，結果準確，為提升鹽酸尼卡地平原料有機溶劑的國家標準提供了依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B 型氣相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；SPB - 3 型全自動空氣源（北京中惠普分析技術研究所）；XS205DU 型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸尼卡地平原料藥（陜西興邦藥業有限公司，批號分別為 150801，120301）；甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯和二甲基亞砜均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷為固定液的 DB-624 型毛細管柱（30 m ×0.32 mm，1.8 μm）；程序升溫：45 ℃ 恒溫 6 min，以 5 ℃ ／ min 的速率升至50 ℃，再以 10 ℃ ／min 的速率升至 120 ℃并保持 3 min；檢測器：火焰離子化檢測器（FID），溫度為230 ℃；進樣口溫度：200 ℃；流速：2 mL ／min；進樣方式：分流進樣（分流比為 10 ∶1）；載氣：氮氣。

2.2 溶液制備

稱取甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯適量，精密稱定，置同一容量瓶中，加二甲基亞砜稀釋成質量濃度分別為100，100，10，30 mg ／mL 的混合對照品貯備液；取適量，用二甲基亞砜稀釋成質量濃度分別為 1.0，1.0，0.1，0.3 mg ／mL 的混合對照品溶液。取樣品 0.2 g，精密稱定，置20 mL 頂空進樣瓶中，精密加入二甲基亞砜4 mL，密封，超聲（200 W，40 kHz）10 min 使溶解，作為供試品溶液。以二甲基亞砜適量作空白溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取 2.2 項下 3 種溶液各適量，按 2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果二甲基亞砜（溶劑）、甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯均能有效分離，專屬性良好。色譜圖見圖1。

線性關系考察：精密量取2.2 項下混合對照品溶液適量，加二甲基亞砜溶解并稀釋，制成甲醇和丙酮質量濃度均為 10，50，150，250，400 μg ／mL，三氯甲烷質量濃度為 10，15，30，60，90 μg／mL，甲苯質量濃度為 3，15，45，75，120 μg ／mL 的系列單一對照品溶液，按 2.1 項下色譜條件進樣測定，以甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯的峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X）為橫坐標進行線性回歸。結果見表1。

檢測限及定量限確定：取2.2 項下混合對照品溶液，用二甲基亞砜倍比稀釋，按2.1 項下色譜條件進樣測定，以信噪比 3 ∶1 和 10 ∶1 分別計算檢測限及定量限。結果甲醇、丙醇、三氯甲烷、甲苯的檢測限分別為2.08，0.50，1.00，0.30 μg／mL，定量限分別為 10.41，10.01，9.88，3.02 μg ／mL。

表1 線性關系考察結果（n ＝5）Tab.1 The linear relationship of each component（n ＝ 5）

精密度試驗：取線性關系考察項下甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯質量濃度分別為 150，150，30，45 μg ／mL 的單一對照品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣6 次，記錄峰面積。結果的 RSD 分別為 0.66% ，0.54% ，2.74% ，0.54%（n ＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密稱取同一樣品（批號150801），依法制備供試品溶液，分別在室溫下放置 0，2，4，8，12，24 h 時按2.1 項下色譜條件進樣測定。結果甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯含量的 RSD 分別為0.93%，1.19%，2.74% ，1.12% （ n ＝ 6），表明供試品溶液室溫下在 24 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯含量的樣品（批號 150801）9 份，按 2.2 項下方法制備供試品溶液，取適量已知含量的供試品溶液，每3 份1 組，加入適量低、中、高質量濃度的單一對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表2。

2.4 樣品含量測定

分別取不同批號（150801，120301）樣品，平行 2 份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算甲醇、丙酮、三氯甲烷和甲苯的含量。結果2 批樣品中均未檢出三氯甲烷及甲苯，甲醇的含量均在定量限以下，丙酮的含量均為0.2%。

3 討論

隨著GC 毛細管色譜技術的迅速發展，2015 年版《中國藥典（四部）》中也首選毛細管柱測定殘留溶劑的含量；2015 年版《中國藥典（四部）》通則0861 收錄的殘留溶劑測定法中對第二類溶劑（甲苯、三氯甲烷和甲醇）及原料藥重結晶所用的第三類有機溶劑（丙酮）均明確了含量限值。

表2 加樣回收試驗結果（n ＝9）Tab.2 Results of the recovery tests（n ＝ 9）

《中國藥典》作為藥品質量技術法典，應及時對原料藥合成中采用的殘留溶劑進行全面、系統地考察，并建立質量控制方法，以切實提高和確保國產產品的質量。經查詢國家藥品監督管理局官網，截至發稿時，其批準的國內生產企業鹽酸尼卡地平原料批準文號共3 個，生產工藝基本一致，故本方涉及殘留溶劑適合各企業開展原料生產的殘留溶劑控制，也為企業對自身產品進行進一步的質量考察，并提升相關標準提供了依據。

二氫吡啶類藥物合成中使用的溶劑不同會導致不同的副產物雜質產生，如尼群地平的副產物雜質為溶劑乙醇產生［6］，尼莫地平雜質B 和雜質C 為合成過程中使用乙醇產生［7］，雜質 D［8］為與國外合成路線中不同的有機溶劑乙醇產生［9-10］。再如非洛地平雜質A，其結構雖也包含二氫吡啶結構，但副產物的毒性［11］并不比無活性降解雜質低［12］，因此同樣應被嚴格控制，從雜質產生的條件來看，研究主藥合成路線中的殘留溶劑對于主成分雜質分析同樣具有積極意義。

鹽酸尼卡地平熔點為179 ～185 ℃，在水中幾乎不溶解，二甲基亞砜能較好地溶解樣品，且其殘留溶劑能充分釋出在頂空測定時，同時二甲基亞砜出峰時間較晚，能和文中4 種待測成分完全分離，確保了不同企業選用溶劑有差異時殘留溶劑測定結果的準確性。