HPVL1和EGFR在宮頸癌及癌前病變中的表達(dá)及意義研究

鐘輝，劉錦鈺，龍璐雯，化金金，馬靜

（安徽省淮北市婦幼保健院病理科，安徽 淮北 235000）

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤疾病，該病占居女性惡性腫瘤發(fā)病率第二位，嚴(yán)重威脅女性生命安全[1]。關(guān)于宮頸癌的發(fā)病，相關(guān)研究表明人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）為宮頸癌與癌前病變的重要致病因子，當(dāng)前對HPV研究已深入到對各亞型分子中，其中主要的亞型分子為衣殼蛋白L1（HPVL1），通常而言，HPVL1蛋白若陽性表達(dá)可提示為低級別上皮內(nèi)瘤變，陰性表達(dá)則提示為高級別上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌，因此，認(rèn)為HPVL1 對判定宮頸癌及癌前病變具有一定的價值[2]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）則是表皮生長因子（EGF）細(xì)胞增殖及信號傳導(dǎo)受體，在很多的實體瘤中存在EGFR 高表達(dá)或異常表達(dá)情況，這與腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成及腫瘤侵襲相關(guān)，分析EGFR 對判斷宮頸癌及癌前病變具有一定價值[3]。本研究旨在探討HPVL1與EGFR在宮頸癌及癌前病變中的表達(dá)與意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2009年1月至2015年5月于本院門診及住院的40例宮頸癌、300例宮頸癌前病變患者、10例子宮頸HPV感染及20例尖銳濕疣患者作為研究對象，所有宮頸癌病例均經(jīng)過病例組織活檢確診，且均為初發(fā)病例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)同意。

1.2 檢測方法 對獲取的病理標(biāo)本，采取原位雜交技術(shù)對宮頸癌、癌前病變做HPV-DNA分型檢測，HPV檢測陽性的病例則開展HPVL1、EGFR檢測，其中EGFR采用免疫組織化學(xué)標(biāo)記，HPV-L1 采用核酸分子雜交技術(shù)和免疫組化技術(shù)，EGFR 檢測試劑盒購自福州買新公司，HPV-L1 美國哀帝旺斯醫(yī)療科技有限公司，相關(guān)檢測操作步驟嚴(yán)格參照試劑盒說明書進(jìn)行，在光鏡下進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo) 宮頸癌的分期參照國際產(chǎn)科協(xié)會制定的標(biāo)準(zhǔn)：原位癌或者上皮內(nèi)癌為0 期；癌癥發(fā)生局限于宮頸部位為Ⅰ期；癌癥病變已經(jīng)超出宮頸組織，但并未達(dá)到盆壁或者陰道下1/3 位置為Ⅱ期；癌癥浸潤至盆壁或者累及陰道下1/3 位置，存在腎盂積水為Ⅲ期；癌癥擴(kuò)散超過真骨盆或者侵犯膀胱或者直腸黏膜部位為Ⅳ期。

宮頸癌前病變的標(biāo)準(zhǔn)參照世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的標(biāo)準(zhǔn)（頸不典型增生依據(jù)細(xì)胞異型程度、上皮累及范圍）：①輕度不典型增生（CINⅠ級），細(xì)胞異型程度較輕，異型細(xì)胞僅占到上皮層的下1/3；②中度不典型增生（CINⅡ級），細(xì)胞出現(xiàn)明顯的異型，局限在上皮層下2/3 的位置；③重度不典型增生（CINⅢ級），細(xì)胞明顯異型，幾乎累及全部上皮層。宮頸原位癌的特點(diǎn)是癌細(xì)胞僅局限于上皮內(nèi)，基底膜完整無間質(zhì)浸潤。宮頸浸潤癌依據(jù)分化程度分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級，其中Ⅰ級為高分化癌，表現(xiàn)為癌巢的中部多數(shù)角化并可見癌珠；Ⅱ級為中度分化癌，分化達(dá)到宮頸上皮中層細(xì)胞，細(xì)胞大小不一且癌巢無明顯角化；Ⅲ級為未分化的小細(xì)胞。

陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核出現(xiàn)黃色/棕黃色顆粒，陽性強(qiáng)度判斷借助綜合陽性細(xì)胞百分比、染色強(qiáng)度半定量積分法。對患者進(jìn)行隨訪，在每年3～6 個月進(jìn)行1 次供應(yīng)細(xì)胞復(fù)查，必要時進(jìn)行活檢，隨訪5年，分析HPVL1、EGFR 在宮頸癌與宮頸癌前病變中的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，計量資料以“±s”表示，行t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基礎(chǔ)資料 40例宮頸癌患者年齡29～80歲，平均年齡（56.1±2.4）歲；病理分期：Ⅰ～Ⅱ期26例（65.00%），Ⅲ～Ⅳ期14例（35.00%）；癌細(xì)胞分化：高分化5例（12.50%），中分化22例（55.00%），低分化13例（32.50%）；隨訪5年，隨訪率100%，5年期生存率為80.00%（32/40），死亡率為20.00%（8/40）。300例宮頸癌前病變患者年齡20～80歲，平均年齡（56.2±2.3）歲；病變增生情況上CIN Ⅰ～Ⅱ級235例（78.33%），CINⅢ級65例（21.67%）。10例子宮頸HPV 感染年齡21～50歲，平均（33.2±2.1）歲。20例尖銳濕疣年齡20～42歲，平均（29.1±1.5）歲。

2.2 HPVL1 在宮頸癌與癌前病變中的表達(dá)情況 宮頸癌HPVL1 陽性表達(dá)率明顯低于其他患者（P＜0.05），尖銳濕疣與癌前病變的陽性表達(dá)率高于子宮頸HPV 感染（P＜0.05），但尖銳濕疣與癌前病變的陽性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1，圖1～3。隨訪宮頸癌患者，5年期生存的患者HPVL1蛋白表達(dá)顯著高于死亡患者。

2.3 EGFR 在宮頸癌及癌前病變中的表達(dá)情況 在子宮頸HPV感染中無EGFR陽性表達(dá)，宮頸癌患者陽性表達(dá)率高于其他患者，癌前病變的EGFR陽性表達(dá)率高于尖銳濕疣，見表2。宮頸癌患者隨著病理的分期的增加EGFR 陽性表達(dá)率也增高，EGFR 陽性表達(dá)隨分化程度的降低而增強(qiáng)。癌前病變者隨CIN分級提高EGFR陽性表達(dá)也提高。

表1 不同患者HPVL1蛋白陽性表達(dá)情況Table 1 The positive expression of HPVL1 protein in different patients

圖1 尖銳濕疣中挖空細(xì)胞HPVL1陽性表達(dá)Figure 1 Positive expression of HPVL1 in knockout cells in condyloma acuminatum

圖2 低級別上皮內(nèi)病變增生鱗狀上皮HPVL1陽性表達(dá)Figure 2 The positive expression of HPVL1 in low-grade intraepithelial lesions and squamous epithelium

圖3 高級別上皮內(nèi)病變少量細(xì)胞HPVL1陽性表達(dá)Figure 3 HPVL1 was positively expressed in a few cells of high grade intraepithelial lesion

3 討論

表2 EGFR在不同患者中的陽性表達(dá)情況Table 2 The positive expression of EGFR in different patients

HPV是宮頸癌發(fā)生的主要病因，HPV包含很多亞型，其中HPVL1亞型同病變發(fā)生存在關(guān)聯(lián)[4-6]。本研究中顯示，在宮頸癌患者中HPVL1陽性表達(dá)率低，癌前病變、尖銳濕疣及HPV陽性率高，提示可以將其作為檢測宮頸癌的一項重要指標(biāo)，主要是HPV-L1蛋白是HPV的主要衣殼蛋白，包裹病毒DNA于球心，防止病毒基因組不受核酸酶的破壞，實現(xiàn)病毒致病活性，是HPV感染復(fù)制早期的結(jié)構(gòu)蛋白。對機(jī)體而言，HPV-L1蛋白作為外來抗原類物質(zhì)，可以識別和侵襲宿主細(xì)胞的特定部位，HPVL1 表達(dá)在HPV復(fù)制早期階段呈陽性表達(dá)，當(dāng)HPV DNA整合到宿主細(xì)胞DNA后則呈陰性表達(dá)。但研究發(fā)現(xiàn)大部分的HPV并不一定會引起宮頸癌，需要其他因子協(xié)同，而EGFR就被認(rèn)為是一種重要的協(xié)同因子[7]。EGFR是體內(nèi)細(xì)胞表面的一種蛋白質(zhì)，可與EGF結(jié)合，參與細(xì)胞正常生長及分離，而當(dāng)EGFR基因發(fā)生突變則會使基因瘋狂表達(dá)EGFR蛋白并組裝于細(xì)胞膜表面，導(dǎo)致細(xì)胞膜表面EGFR受體過多，加速細(xì)胞異常生長及分裂，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生及發(fā)展[8]。本研究結(jié)果顯示，在EGFR的陽性表達(dá)率上，宮頸癌高于癌前病變，而癌前病變又高于尖銳濕疣與宮頸HPV感染，表明EGFR對預(yù)測宮頸癌及癌前病變有重要價值。此外，本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌患者中，EGFR陽性表達(dá)率上均是隨著病理分期增加而增加，隨分化程度降低增加，癌前病變患者隨CIN分級提高而增加，以上結(jié)果提示HPVL1與EGFR可作為監(jiān)測宮頸癌與癌前病變的重要指標(biāo)。

綜上所述，宮頸癌與癌前病變患者通過監(jiān)測HPVL1、EGFR 可為腫瘤的發(fā)生發(fā)展提供參考，進(jìn)而為早期治療疾病提供有利幫助。