融合“通路-靶點-活性成分”探討藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的網絡藥理學機制與初證＊

趙凰宏，詹向紅，馬 振，關東升，韓冠先，楊 柳，雷勵飛，曹鈺珂

（1. 山東中醫藥大學中醫學院 濟南 250355；2. 河南中醫藥大學基礎醫學院 鄭州 450000；3. 山東中醫藥大學中醫文獻與文化研究院 濟南 250355；4. 河南省中醫院 鄭州 450000；5. 洛陽市中醫院 洛陽 471000）

新型冠狀病毒肺炎（2019-nCoV），簡稱新冠肺炎，于2019 年12 月在武漢被首次報道,之后200 多個國家相繼發現確診病例，截至到2020年4月4日，世界累計報告的確診病例超過1195969 例，死亡人數大于64445，其傳播力之強、致死率之高引發了全世界的關注。根據現有的臨床研究，發熱、咳嗽、疲勞、呼吸急促和胸部CT 異常是該病的常見癥狀，但是部分患者在感染病毒的中后期會因免疫細胞、細胞因子、趨化因子等急劇增多而引發炎癥風暴，可在短時間內造成組織水腫、高熱、充血或損傷，進一步導致急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）及多器官功能衰竭等危重癥，甚至導致死亡[1,2]。目前根據中國國家統計局的數據，2019-nCoV 的病死率約為4%。因此，亟需尋求治療新冠肺炎炎癥風暴思路和方法。

中醫將該病歸于“濕毒疫”范疇，并結合重癥肺炎的高熱喘促、譫語神昏、惡心不食、發斑吐血等熱證病理表現，認為濕熱證為新冠肺炎炎癥風暴期的主要證型。藿樸夏苓湯始載于《醫原·濕氣論》，全方苦溫與辛溫相配、化濕、利濕、燥濕并用，注重調肺并兼顧它臟。故根據葉天士“濕去熱孤”的理念，該方可作為治療“濕熱證”的有效方劑[3]。現代藥理研究證實，藿樸夏苓湯能夠通過抑制TNF-α、IL-6 等炎癥因子顯示出良好的抗炎、調節免疫效果[4,5]，而根據最新的文獻報道TNF-α、IL-6 等可能是參與此次新冠肺炎炎癥風暴的關鍵環節[6-7]。此外，近年來臨床研究結果顯示，藿樸夏苓湯除了治療治療胃炎、急性眼結膜炎[8]、乙型腦炎[9]等炎癥疾病外，也被廣泛用于感冒[10]、肺部感染[11]、咳嗽[11]、間質性肺病[12]等肺系疾病得治療，在改善炎癥風暴期常見的高熱[9]、譫語神昏[9]、水腫[3]、嘔吐不食[13]等癥狀以及皮膚紅腫、發疹的病變[14]方面療效確切。自疫情暴發以來，上海、河南、廣東、四川、甘肅等地將藿樸夏苓湯用于新冠肺炎的治療，并取得了良好的效果[15,16]。

網絡藥理學是在生物信息學、計算生物學及高通量組學等多學科融合的基礎上，通過構建“網絡靶標”[17-18]，直觀的揭示中藥成分、靶點、疾病之間復雜的生物學關系[19]，促進了中藥研究從“單一靶標、單一藥物”向“網絡靶標、多成分藥物”模式的轉變[20]，這不僅為中醫學從基于經驗的醫學轉變為基于證據的醫學提供新的途徑，也為當前的藥效物質、作用機制探查以及方劑配伍規律改進等藥物研究提供了策略[21,22]。因此，本研究旨在通過網絡藥理學和分子對接技術對藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的潛在關鍵靶點和主要化合物成分進行探尋，并闡述其作用機制，為拓展中醫藥防治2019-nCoV以及新藥開發提供思路和指導。

1 材料與方法

1.1 藿樸夏苓湯的四氣五味與藥物歸經

歷代有關藿樸夏苓湯的出處、組成等問題頗有爭議，本研究通過“中國知網”、“萬方”等數據庫檢索到2001年以來有關藿樸夏苓湯的157篇參考文獻，其中，有88 篇認為該方出自《醫原·濕氣論》，占比高達56.1%，然后依次是《感證揖要》《濕溫時疫治療法》《重訂廣溫熱論》等，這與近現代的研究成果相似[14]。故根據《醫原·濕氣論》“濕氣彌漫，本無形質，宜用體輕而味辛淡者治之，辛如杏仁、蔻仁、半夏、厚樸、藿梗，淡如薏苡仁、通草、茯苓、豬苓、澤瀉之類”的記載，將該方涉及的10味藥物按照《中華藥典》進行藥名校正（校正后：廣藿香、厚樸、半夏、茯苓、苦杏仁、薏苡仁、豆蔻、豬苓、通草、澤瀉），然后從《中藥大辭典》中獲取藿樸夏苓湯各味藥的藥性與歸經，并通過網絡圖展現。

1.2 藿樸夏苓湯有效成分篩選及“藥物組成-活性成分-對應靶點”網絡構建

中藥飲片須通過吸收、分布、生物轉化、儲存以及排泄等一系列的ADME 過程才能對靶器官和組織發揮作用，口服生物利用度（OB）、類藥性（DL）、藥物半衰期（HL）和藥物對小腸細胞的穿透性（Caco-2）等是中藥成分ADME 的可靠檢測指標[23]。本研究通過TCMSP 數據庫進行藿樸夏苓湯藥物成分查詢，并按照OB ≥ 30%、DL ≥ 0.18、Caco-2 ≥ -0.4 以及 HL ≥ 4 h 為標準進行篩選[24]，獲取該復方的有效化合物成分，對于未檢索到的中藥，則通過BATMAN-TCM、TCMID 進行補充，并按照上述標準納入。然后在Uniprot 數據庫中，將所有有效化合物成分中涉及與人相關靶點蛋白的官方名稱檢索出來，并將靶蛋白、相應的效化合物成分以及藥物組成輸入Cytoscape 3.7.1，構建“藥物組成-活性成分-對應靶點”網絡。

1.3 藿樸夏苓湯“關鍵靶標-器官組織”網絡構建

利用STRING 平臺獲得藿樸夏苓湯靶蛋白的相互作用文件，借助Cytoscape3.7.1 中的CytoNCN 插件進行網絡拓撲分析，篩選出關鍵靶標，并通過BioGPS 數據庫查詢，獲取關鍵靶標的臟器組織分布，構建“關鍵靶標-器官組織”網絡。

1.4 新冠肺炎炎癥風暴靶蛋白獲取及“藥物-疾病”靶標的PPI網絡構建

利用在線數據平臺GeneCards 收集與“novel coronavirus pneumonia”、“inflammatory storm”相關的靶點蛋白，獲取二者的靶點交集基因—新冠肺炎炎癥風暴的靶蛋白。然后將獲得的交集蛋白與1.2 得到的藿樸夏苓湯的靶基因再次取交集，得到藿樸夏苓湯干預新冠肺炎免疫炎癥的“藥物-疾病”基因。將得到的“藥物-疾病”基因輸入STRING，獲取基因相互作用PPI網絡圖。

1.5 GO富集分析與KEGG通路分析

運用 R3.6.2 的 BiocManager、DOSE、ClusterProfiler、Enrichplot 等插件對1.4 得到的“藥物-疾病”基因進行GO 富集和 KEGG 通路分析，并以P＜ 0.05 作為篩選條件。

1.6 構建藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的“通路-靶點-活性成分”網絡

將富集到的藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的KEGG 通路及涉及的關鍵基因、有效化合物成分一并輸入Cytoscape3.7.1 軟件，構建“通路-靶點-活性成分”網絡。

1.7 運用分子對接對1.6得到的主要有效成分進行初步驗證

從PDB 數據下載血管緊張素轉化酶（ACE2：1R42）、2019-nCoV spike glycoprotein（PDB:6VSB）的3D 結構*PDB 格式。運用 ChemOffice 軟件、PyMOL 軟件、Auto Dock 軟件完成化合物3D 結構轉化、化合物及靶蛋白格式轉換、配體（NAG）提取與格式轉換、蛋白質進行去水、加氫等預處理操作。然后運用Vina 進行對接，獲取藿樸夏苓湯主要有效成分治療新冠肺炎炎癥風暴的證據支持。

2 結果

2.1 構建藿樸夏苓湯復方藥性與歸經網絡圖

性味歸經是中藥理論的核心內容,四氣五味乃“藥之本”，臟腑歸經為“藥之用”，在此基礎上形成了中藥復方的君、臣、佐、使的配伍原則，即通過藥性之四氣五味糾正機體陰陽失衡狀態，借助藥物歸經發揮其對特有臟腑的靶向治療作用，形成整體聯動性、靶向性的調節機制。中醫認為濕為陰邪，熱為陽邪，濕熱互結，如油入面，兩者難解難分，故治療濕熱之病當以分解濕熱為宜，使濕去熱孤，熱勢自愈。從該復方各味藥的藥性統計結果來看（圖1），五味涉及苦、甘、辛、淡；四氣以寒、涼、溫、平為主，即本方借助藥性將祛濕解熱寓于樞轉氣機升降之中，苦溫燥濕以啟脾陽、合辛香溫散以醒運濕濁，甘淡微寒則能滲濕以通陽，配以甘味之和緩，使苦辛之味并行而不悖、溫涼之氣相反而繼相承，從而達到氣通則濕散、氣行則濕化、氣暢則濕除的目的。從歸經來看（圖1），主要涉及肺、脾、胃等臟腑,并與心、腎、大腸、三焦、膀胱等多個臟腑關系密切，表明人體“水精四布，五經并行”的津液有序代謝環境是由多臟腑共同參與完成的，其中“肺主治節”和“脾主運化”的調節作用最為突出。

圖1 藿樸夏苓湯的藥物藥性和歸經網絡圖（參照《中藥大辭典》）

2.2 構建藿樸夏苓湯的“藥物組成-活性成分-對應靶點”網絡

TCMSP[25]、BATMAN-TCM[26]和 TCMID[27]數據庫等均是基于國內外多個數據庫間的共享資源（包括動物實驗、細胞實驗、臨床試驗等）來預測中藥分子藥理機制的1 個重要且常用工具，在篩選多個中藥及相關成分靶點或疾病通路等信息方面具有一定的可靠性（表1）。本研究按照OB ≥ 30%、DL ≥ 0.18、Caco-2 ≥ -0.4、HL ≥4 h 的ADME 主要標準，共檢索出藿樸夏苓湯的有效化合物成分共53個（圖2），包括半夏9個，豆蔻10個，茯苓 5 個，廣藿香 6 個，厚樸 1 個，苦杏仁 10 個，通草 2 個，薏苡仁 6 個，澤瀉 7 個，豬苓 7 個。其中，植物甾醇（Stigmastero）為半夏、苦杏仁、薏苡仁所共有，豆甾醇（Sitosterol）為苦杏仁、通草、薏苡仁、澤瀉所共有,槲皮素（Quercetin）為豆蔻、廣藿香所共有，（E）-11-二十烯酸（Gondoic acid）為半夏、苦杏仁所共有，麥角甾--7,22E-二烯-3-酮（Ergosta-7，22E-dien-3beta-ol）為豬苓和茯苓所共有成分，化合物CLR為苦杏仁和薏苡仁的共有成分，啤酒甾醇(Cerevisterol）為茯苓和豬苓的共有成分，體現了中藥復方多成分的協同治療作用。通過Uniprot 數據庫，共檢索出與上述53 個有效成分對應的210個靶基因，通過統計我們發現，這些有效化合物成分和靶基因共發生606 個相互作用關系，即每個化合物成分平均作用11.4 個靶基因，每個靶基因平均聯系2.88 個化合物，體現了中醫藥治療疾病多成分、多靶點的作用機制。

表1 藿樸夏苓湯“有效成分—靶點”信息表

續表

續表

續表

2.3 構建藿樸夏苓湯“關鍵靶標-器官組織”網絡

將藿樸夏苓湯作用的靶點蛋白輸入STRING，物種限定為“Homo sapiens”，探尋靶基因相互間的作用關系。除去TDRD7、DCAF5、DIO1、LYZL1等游離基因后，將STRING 生成的靶標相互作用文件通過Cytoscape3.7.1 中的CytoNCN 插件進行網絡拓撲分析，發現有79 個基因滿足度（Degree，DC）、接近中心度（Betweeness，BC）、介度中心度（Closeness，CC）等拓撲參數值大于中位數（參考值：degree=26，betweeness=75.063，closeness=0.5），這些基因可能是藿樸夏苓湯發揮藥效的關鍵靶點[28]（表1）。BioGPS 是一個聚集分布式基因注釋資源的中心基因入口，是當前研究者常用于基因信息表達的可靠定位工具[29]。現將上述獲得關鍵基因導入導入BioGPS，以獲取每個基因表達最多的前6 個器官組織。然后將結果輸入Cytoscape 3.7.1 構建“關鍵靶點-器官組織”網絡圖，并參照Degree 值設定器官組織圖形大小，即器官組織圖形越大則涉及表達的關鍵基因數量就越多。由圖可見，藿樸夏苓湯主要通過作用肺臟、心臟、胰臟、支氣管上皮細胞、心肌細胞、肝臟等臟器的關鍵基因發揮治療作用，這與前面通過藥物歸經獲得的藿樸夏苓湯“整體觀念”指導下多臟腑調控防治疾病的結論相符。此外，值得注意的是，BioGPS 關鍵基因信息定位雖未涉及脾臟，但卻在與脾臟密切相關的CD33+Myeloid、CD34+、CD14+Monocytes、CD56+NKCells 等免疫細胞中高頻表達，這不僅從免疫角度驗證了該復方“調脾”作用下“培土生金”治療新冠肺炎的理念，更重要的是表明了藿樸夏苓湯參與免疫調節的重要作用，從而為治療炎癥風暴可行性提供生物學證據。

圖2 藿樸夏苓湯的“藥物-有效成分-靶點”網絡

圖3 藿樸夏苓湯“關鍵靶標-器官組織”網絡

圖4 “藿樸夏苓湯-新冠肺炎-炎癥風暴”韋恩圖 圖5 藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的靶蛋白PPI網絡

2.4 構建藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的靶蛋白PPI網絡

通 過 GeneCards 收 集 與“novel coronavirus pneumonia”“inflammatory storm”相關的 259 個、251 個靶點蛋白，將二者取交集得到50 個靶點，然后將交集靶點與藿樸夏苓湯的關鍵基因再次取交集，得到該復方治療新冠肺炎炎癥風暴的基因14個。將得到的“藥物-疾病”基因輸入STING，限定物種為“Homo sapiens”，得到藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴14個靶基因相互間的作用關系文件，然后輸入Cytoscape3.7.1，使其可視化，如圖5 所示，該網絡共有有14個節點、51條邊。

2.5 GO富集分析和KEGG通路分析

將 2.4 得到的“藥物-疾病”基因，按照P＜ 0.05 篩選條件，GO 功能富集到938 個條目(暫無富集到細胞組成部分)，包括細胞對脂多糖的反應、細胞對細菌起源分子的反應、白細胞與細胞粘附的正調控、炎癥反應的正調控、單核細胞趨化性等908 條生物過程以及細胞因子活性、細胞因子受體結合、受體配體活性、蛋白質絲氨酸、蘇氨酸激酶活性、趨化因子活性等30 條分子功能。KEGG 通路分析富集到130 條通路，主要有糖尿病并發癥中的AGE-RAGE信號通路、人巨細胞病毒感染、甲型流感、IL-17 信號通路、炎性腸病（IBD）、PI3K-Akt 信號通路、Th17 細胞分化、非小細胞肺癌、細胞因子與細胞因子受體的相互作用等通路關系密切。現按照P值選取與藿樸夏苓湯藥物成分作用靶點最為密切的 GO 富集分析（BP、MF 各 20 條）和KEGG通路結果（20條），并使其可視化（圖6、圖7）。

2.6 構建藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的“通路-靶點-活性成分”網絡

按照P值從小到大的順序，從富集到的藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的KEGG 通路中選取前20條，并將其與涉及的關鍵基因、有效化合物成分一并輸入Cytoscape3.7.1軟件，構建“通路-靶點-活性成分”網絡（圖5）。所有通路、靶標、成分的圖形大小參照Degree 值設置，即圖形越大則在網絡中的地位越重要。因此，Quercetin、Luteolin、Irisolidone 以及 RELA、CALM1、IL6、IL1B 等可能是藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的核心成分與靶標。

2.7 藿樸夏苓湯活性化合物成分治療新冠肺炎炎癥風暴的分子對接結果

圖6 GO富集結果

圖7 KEGG通路富集結果

血管緊張素轉化酶Ⅱ（ACE2）受體是SARS-CoV（2002）宿主細胞進入體內并進行病毒復制所必須的關鍵環節，可作為S 蛋白的功能性受體[30]。研究發現，SARS-CoV-2（2019）與SARS-CoV（2002）相比，具有更強的與ACE2 受體相互結合的作用力[31]。近期的研究結果也表明ACE2可能參與是新冠肺炎炎癥風暴發生的關鍵環節[32]。因此，本研究將藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的主要化合物成分與ACE2 受體（PDB:1R42）、2019-nCoV 尖 峰 糖 蛋 白（2019-nCoV spike glycoprotein，基于Jason S.McLellan 團隊提供的新型冠狀病毒表面S蛋白的近原子結構PDB：6VSB）[33]進行對接，評價并驗證其臨床應用的可行性。一般認為配體與受體的結合能越低則構象越穩定，發生作用的可能性越大。有文獻報道，結合能小于0 則預示著配體和受體可以自由結合[34]。將2.5 中前20 條通路涉及的藿樸夏苓湯治療新型冠狀肺炎炎癥風暴的有效活性化合物與 ACE2 受體、2019-nCoV spike glycoprotein 進行分子對接，其結果如下表2、圖9。其均能夠與ACE2受體自由結合，且具有與相關文獻報道新冠肺炎常用的藥物如利巴韋林（-7.4 kcal·mol-1）、利托那韋（-6.1 kcal·mol-1）、法匹拉韋（-5.5 kcal·mol-1）相近或更好的結合能，這表明藿樸夏苓湯活性成分對治療新冠肺炎炎癥風暴有效，為新藥的開發提供了思路。

3 結語

中醫認為濕毒外邪入侵首傷肺衛，繼而損及脾土，致使中焦脾胃氣機升降失調、津液代謝異常。病至中后期，或病及子臟加重肺失宣肅而水道失調，或傷及腎臟而損其主水的功能，最終導致內外濕邪膠濁而熱毒驟生，漫灼臟腑、筋肉，出現熱、痰、喘以及神智異常等典型癥狀，正如清代王士雄云:“熱得濕而愈熾，濕得熱而愈橫……濕熱兩合，其病重而速”。調查研究顯示，新冠肺炎中后期，免疫功能失調下細胞因子的異常升高和免疫細胞的過度活化，除導致高熱外，肺泡上皮細胞及毛細血管內皮細胞彌漫性損傷也能產生大量滲出液的聚集而阻塞氣道[35]。影像學調查也發現重癥期患者雙肺呈彌漫性病變，雙側胸腔開始出現積液[36]。因此，針對新冠肺炎炎癥風暴期的濕熱膠著之證，葉天士提出的“濕去熱孤”之法[3]，強調濕熱證治療應以“治濕為本”。從藿樸夏苓湯組方的藥性和規律來看，該方在治肺的同時，兼顧心氣布散于表、腎之氣化與膀胱蒸化水液等功能，并重視運用化濕、燥濕、利濕以健運脾胃、補益正氣，體現了整體觀念指導下“驅濕邪而不傷正”的方藥辨治思路。從藿樸夏苓湯“關鍵靶點—器官組織”網絡結果顯示來看，藿樸夏苓湯有效成分除主要作用肺、支氣管上皮細胞等臟腑組織外，其在脾參與調節的CD33+Myeloid、CD34+、CD14+Monocytes、CD56+NKCells 等免疫細胞中也呈現高頻表達，而這些細胞在此次新冠肺炎的炎癥風暴中是產生IL-6和其他炎癥因子的主要部位[37]。

圖8 藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的“通路-靶點-活性成分”網絡

表2 藿樸夏苓湯活性化合物成分治療新冠肺炎炎癥風暴的分子與ACE2、2019-nCoV spike glycoprotein 對接結果

圖9 基于“通路-靶點-活性成分”的“核心成分與ACE2、與2019-nCoV spike glycoprotein 對接結果圖

本研究融合“通路-靶點-活性成分”后，發現藿樸夏苓湯中潛在治療新冠肺炎炎癥風暴的核心基因包括 RELA、CALM1、IL6、IL4、IL2、PRKCB、PRKCA 、IL1B、CDK4、CCL2、CXCL10、EGFR 等。其中，RELA調控抗中性粒細胞的凋亡，該蛋白活化不僅可導致促炎因子IL-17 上調，還能削弱KLF-2 的抑制促炎因子表達[38]。近期臨床報告顯示新冠肺炎危重癥感染者易患的ARDS，其機制可能與炎癥風暴密切相關[39]，而在肺血管內皮上高度表達的鈣調蛋白CALMI 和上皮生長因子受體EFGR 則可能影響人的肺內皮Ca2+信號小體-對肺動脈高壓的影響而引發ARDS[40]。IL6、IL4、IL2 是作用于白細胞和免疫細胞之間的細胞因子，CCL2 和CXCL10 為常見的炎癥趨化因子，其在傳遞信息、介導和調節免疫細胞的活化、增殖和分化以及炎癥反應中均具有重要作用。有報道顯示，與輕癥患者相比，重癥新冠肺炎患者的血漿中IL2，IL6，IL4 升高，炎癥反應更劇烈[41,42]。動物實驗發現CXCL10 被抗體中和后，肺水腫、炎性介質釋放以及炎癥細胞聚集明顯緩解，預示著CXCL10 在炎癥風暴中的促進作用[43]。ROSE 等人的研究也證實CCL2 能夠募集炎癥細胞，并刺激其產生炎癥因子，誘導成纖維細胞轉化和Th2 極化而促炎[44]。此外，現代研究還發現CDK4 和PKC 家族的PRKCB、PRKCA 可通過影響細胞周期、蛋白質運輸以及磷酸化過程的重要環節，為病毒復制和炎癥物質轉運提供條件[45-47]。綜上，藿樸夏苓湯可能通過細胞對細菌起源分子的反應、白細胞與細胞粘附的正調控、炎癥反應的正調控、單核細胞趨化性等多途徑、多靶點，實現治療新冠肺炎炎癥風暴的目的，這與我們富集的結果相合。

現研究發現，SARS-CoV-2 通過與器官組織的ACE2 受體結合而侵入人體，并且除了增加患者的病毒載量外，被病原體標記的內皮細胞（如肺毛細血管內皮細胞、腸上皮細胞等）也會成為宿主免疫系統識別和攻擊的目標，從而引發促炎反應甚至更嚴重的器官水腫，這似乎意味著ACE2 可能是新冠肺炎炎癥風暴機制中的重要環節之一[32]。事實上，ACE2已被證實不僅可以促進血管平滑肌細胞的生長反應，而且可以直接促進血管重構和預防與肺損傷有關的肺炎和分流，補充重組ACE2 可改善炎癥細胞浸潤和肺功能受損，對炎癥風暴期急性肺損傷具有保護作用[48,49]。因此，尋求干預ACE2 介導SARS-CoV-2 的有效藥物，是新冠肺炎炎癥風暴研究的方向。本研究將藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的核心成分槲皮素、木犀草素、黃芩素、利卡靈A 以及卡維丁等與ACE2受體以及ACE2 主要結合的2019-nCoV 尖峰糖蛋白進行分子對接，其結果顯示，這些核心成分均具有較強的穩定性。其次，相繼有研究發現ADAM17 能夠對ACE2 的細胞質尾部予以調控[50]；TMPRSS2 具有誘導 ACE2 的進行胞內裂解[51]；Cathepsin 可以激活 SARS-S 進而發生與ACE2 作用[52]，因此，我們認為這些靶標與 ACE2 協同介導了病毒進入宿主細胞過程。而現代藥理學研究結果證實，基于通路-靶點-活性成分得到的核心化合物成分，如槲皮素[53]、木犀草素[54]、黃芩素[55]、beta-谷甾醇[56]等可在一定程度上干預TMPRSS2、ADAM17、Cathepsin B/L 等蛋白酶的表達，進而利于發揮抗炎作用。此外，研究還發現ACE2 受體除了在肺上皮細胞表達外，心、腎、內皮、腸道器官組織也可表達[57,58]。從關鍵靶點作用的器官組織來看，藿樸夏苓湯涉及肺、支氣管上皮細胞、心、腎以及與免疫系統密切相關的脾臟等多個臟器組織，可有效作用ACE2 受體，也為該方治療新冠肺炎炎癥風暴可行性提供支持。

綜上所述，本研究基于網絡藥理學和分子對接技術分析了藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的分子基礎，揭示了藿樸夏苓湯抑制炎癥因子風暴多成分、多個靶點、多條通路的潛在作用機制，并對主要化合物成分進行預測，為后續深入研究和新藥開發提供思路。但因TCMSP、BATMAN-TCM、TCMID 等數據庫中提供大部分活性化合物及作用靶點往往源于不同實驗條件，并且受到研究熱點傾向性、資源共享受限的影響，使其準確性、完整性等受到限制[59,60]。此外，中藥湯劑主要是口服給藥形式，那么藥物成分在體內要經過吸收、分布、代謝、排泄等生物過程才能發生作用，故需將中藥網絡藥理與藥物動力學、藥效學進行結合[61]。但當前數據庫中活性化合物ADME 性質以及類藥性等指標預測所基于的數據庫資源不僅有體內實驗也有體外實驗，而體外研究并不能全面反應藥物的各種作用，缺乏整體藥物動力學過程，難以全面的對藥效進行評價[62]。因此，藿樸夏苓湯治療新冠肺炎炎癥風暴的作用機制和藥效評價需要進一步的體內實驗研究與臨床驗證。