微柱凝膠技術在ABO血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗中的應用

李紅霞 湯景霖

1 河南省南陽市第二人民醫院輸血科 473000； 2 新鄉醫學院三全學院檢驗系

新生兒溶血病(Hemolytic disease of newborn，HDN)是因母子血型不合導致的疾病，會導致貧血、黃疸等癥狀，影響患兒健康[1]。ABO血型不合HDN(ABO-HDN)的發病率較高，母親為O型血、患兒為A、B型血，輸血前需進行血型檢測、溶血試驗，避免使溶血反應加重。微柱凝膠技術是較為先進的紅細胞血型血清學技術，對ABO-HDN的診斷較準確[2]。本文主要分析微柱凝膠技術在ABO血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗中的應用。具體內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年4月—2019年5月就診于我院的60例ABO-HDN患兒，經我院醫學倫理委員會批準，按隨機數字表法分為2組，各30例。對照組男17例，女13例；體重2.85～3.73kg，平均體重(3.25±0.48)kg；日齡1～12d，平均日齡(5.27±1.50)d；根據《兒科急診醫學》[3]中HDN分型標準，重型5例，中型19例，輕型6例。研究組男16例，女14例；體重2.90～3.75kg，平均體重(3.55±0.45)kg；日齡1～11d，平均日齡(5.50±1.45)d；重型HDN為6例，中型18例，輕型6例。2組一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可對比性。

1.2 入選標準 (1)納入標準：①符合《實用新生兒學》[4]中相關HDN診斷標準；②均進行輸血治療；③患兒家長已簽知情同意書。(2)排除標準：①合并心臟病者；②存在藥敏過敏反應；③存在其他遺傳性疾病者；④合并血液系統疾病者；⑤精神病家族史者。

1.3 方法 2組均使用微柱凝膠卡式專用離心機(長春博迅生物技術有限責任公司，TD-3A 型)、抗人球蛋白溶血三項檢測卡、酸放散試劑、FYQ 型孵育器均由長春博迅生物技術有限責任公司提供。

1.3.1 血型檢測：對照組行試管法檢驗：抽取3ml靜脈血，制作1管紅細胞(濃度0.8%)懸液，再離心10min，離心速度3 000r/min后作1管血清，以鹽水試管法鑒定血型。研究組行微柱凝膠技術檢驗：按照ABO血型抗原檢測卡(長春博迅生物技術有限責任公司)說明書鑒定。抽取患兒2ml靜脈血，抗凝使用乙二胺四乙酸，離心3min，離心速度3 500r/min，再在1ml達亞美2號稀釋液中加入10μl壓積紅細胞制成紅細胞懸液(濃度1%)，無血塊、絮狀，于各孔中加入50μl懸液，常溫離心2min，離心速度900r/min，再離心5min，速度為1 500r/min，觀察檢測結果。

1.3.2 溶血試驗：(1)游離抗體試驗：對照組于A、B、O試管中加入2滴血清及對應的1滴紅細胞懸液，于37℃水浴1h，如發生凝集，則有抗體，如無凝集發生，用生理鹽水洗滌后加入1滴廣譜抗IgG的抗人球蛋白血清，離心后如凝集，抗體則為陽性。研究組在A、B、O試管中加入50μl紅細胞懸液(濃度0.8%)，25μl血清，于孵育器中處理15min后離心10min。(2)抗球蛋白試驗：對照組在標記的試管中加入1滴紅細胞懸液(濃度2%～5%)、1滴特異性抗人球蛋白血清，混勻后離心1min，查看離心結果。研究組在一張抗人球蛋白卡上標記A、B、O三孔，并于其中加入紅細胞懸液50μl(濃度0.8%)，離心1min觀察結果。(3)抗體釋放試驗：對照組于標記A、B、O的試管中加入紅細胞懸液(3%～5%)和酶，水浴1h，溫度37℃，再用氯化鈉(0.9%)溶液洗滌3次，加入抗人球蛋白血清，離心處理后查看試驗結果。研究組在一張抗人球蛋白卡上標出A、B、O三孔，均注入紅細胞懸液(0.8%)，滴入放散液，孵育15min，離心處理。

1.4 評價指標 (1)參考《輸血治療學》[5]對ABO血型進行診斷，比較2組的血型檢出率。(2)比較2組患兒的游離抗體試驗、抗球蛋白試驗、抗體釋放試驗的陽性率。若紅細胞凝聚則為陽性，反之為陰性。

1.5 統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行數據處理，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 血型檢出率 對照組30例中有5例弱B抗原，3例弱A抗原未檢出；研究組30例中有1例弱B抗原未檢出。研究組的血型檢出率(96.67%)比對照組(73.33%)高，差異有統計學意義(χ2=4.706，P=0.030<0.05)。

2.2 陽性率 研究組游離抗體試驗、抗球蛋白試驗、抗體釋放試驗的陽性率均比對照組高，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患兒溶血試驗陽性率對比[n(%)]

3 討論

HDN的病因在于胎兒遺傳了父方的血型抗原且母體中不存在此抗原，母體免疫球蛋白(IgG)抗體從胎盤進入胎兒血液中破壞其紅細胞，進而使患者出現貧血、水腫、溶血、高膽紅素血癥等病癥，危害患兒健康[6-7]。治療ABO-HDN患兒多采用輸血方式，在輸血前需加強對患兒的相關血清學檢驗。HDN患兒存在母源溶血性IgG抗體，游離于患兒的紅細胞及血清中，因此在對ABO-HDN患兒進行早期診斷時需進行游離抗體試驗、抗球蛋白試驗、抗體釋放試驗，以便提高檢驗準確度，降低誤診的發生率[8-9]。

本文結果顯示，研究組的血型檢出率較高，且游離抗體試驗、抗球蛋白試驗、抗體釋放試驗的陽性率均比對照組高，說明微柱凝膠技術對ABO-HDN的血型檢出率較高，可有效提高溶血三項試驗陽性率，促進輸血治療的安全性。分析原因在于對照組使用的試管法應用限制太多，如操作復制、耗時長、需洗滌紅細胞、受操作者主觀影響、受離心時間、速度和重懸紅細胞濃度大小影響，容易出現漏診、誤診的情況，目前已逐漸被淘汰。而微柱凝膠技術具有標本少、操作簡單、快捷、準確度高的優勢，受到醫護人員的青睞，被廣泛應用于輸血前的血清學篩查中[10-11]。微柱凝膠技術是將符合檢測條件的稀釋液配成凝膠，灌注微管柱，利用其凝膠顆粒的分子篩作用，使紅細胞在離心時截留單個紅細胞，從而獲得凝集反應結果。微柱凝膠技術的結果無須利用顯微鏡觀察，可直觀獲得，離心后處于凝膠底部為陰性，凝膠上中層為陽性，且可重復操作，結果較準確、穩定。覃日吉等[12]也在相關研究中表明，微柱凝膠技術可準確檢測ABO-HDN患兒的IgG抗體，尤其在游離抗體和抗體釋放試驗中，更加標準化，檢測結果較穩定，血型檢出率較高，保障了輸血治療安全性。但該種檢測方法也存在無法識別紅細胞不完全抗體、耗時較長的缺點，具體有待進一步研究。

綜上所述，微柱凝膠技術對ABO-HDN的血型檢出率較高，可有效提高溶血三項試驗陽性率，促進輸血治療的安全性。