19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑高效液相色譜分析

李廣澤，王 芳，戴蘭芳，李歐燕*，段麗芳

(1.深圳諾普信農化股份有限公司，廣東 深圳 518102；2.農業農村部農藥檢定所，北京 100125)

1 前言

三氟苯嘧啶(Triflumezopyrim)是由美國杜邦公司開發的一種新型介離子類殺蟲劑，作用于煙堿型乙酰膽堿受體正構結合位點，抑制乙酰膽堿受體。與現有藥劑不存在交互抗性，安全性好、選擇性強，對稻飛虱特效且持效期長，是吡蚜酮之后防治稻飛虱的最佳藥劑品種。

氯蟲苯甲酰胺(Chlorantraniliprole) 也是由美國杜邦公司開發的一種魚尼丁受體抑制劑類殺蟲劑，通過選擇性激活害蟲肌肉中的魚尼丁受體，過度釋放細胞內鈣離子，導致害蟲癱瘓死亡，對稻縱卷葉螟與二化螟等鱗翅目害蟲效果好，安全性好、用藥量低，是當前最優秀的水稻鱗翅目害蟲防治藥劑，對飛虱也具有一定活性。

19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑作為氯蟲苯甲酰胺和三氟苯嘧啶的混配制劑，兼防水稻上飛虱與鱗翅目害蟲兩大類害蟲，具有降低用工成本、方便省事等優點，符合國家環保減量要求，是一種廣譜高效綠色殺蟲劑。

目前，氯蟲苯甲酰胺分析測試的相關研究比較明確[1-3]，10%三氟苯嘧啶懸浮劑[4]和20%三氟苯嘧啶水分散粒劑的高效液相色譜分析方法也有報道[5]，但關于氯蟲苯甲酰胺和三氟苯嘧啶混配制劑的分析方法尚未公開報道。本文采用反相高效液相色譜，使用ODS-BP反相柱和可變波長紫外檢測器，對氯蟲苯甲酰胺和三氟苯嘧啶同時進行分析和定量，該方法簡便快速，分離效果好，準確度和精密度均達到定量分析的要求，適用于產品的質量分析。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 甲醇:色譜純；磷酸:分析純；水:超純水(電阻率18.2MΩ·cm)；氯蟲苯甲酰胺標準品:已知質量分數100%；三氟苯嘧啶標準品:已知質量分數98.8%；19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑。

2.2 儀器 高效液相色譜儀:戴安U3000 具有可變波長紫外檢測器和自動進樣器；變色龍色譜工作站；色譜柱:200mm×4.6mm(id) 不銹鋼柱，內裝SinoChrom ODS-BP、5μm填充物；微量進樣器:100μL；過濾器：濾膜孔徑0.22μm。

2.3 高效液相色譜操作條件 流動相:Ψ(甲醇：0.05%磷酸水)=65+35(V/V)；流速:1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：230nm；進樣體積：5μL；保留時間:三氟苯嘧啶約5.0min，氯蟲苯甲酰胺約8.0min。

典型的氯蟲苯甲酰胺、三氟苯嘧啶標樣液相色譜圖和19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣液相色譜圖(圖1、圖2)。

圖1 氯蟲苯甲酰胺和三氟苯嘧啶混合標樣的高效液相色譜圖圖2 19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣的高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標樣溶液的制備 分別稱取0.05g(精確至0.000 2g)三氟苯嘧啶標樣和氯蟲苯甲酰胺標樣各于同一50mL容量瓶中，加入30mL甲醇超聲溶解，冷至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻。用移液管移取上述溶液5mL于25mL容量瓶中，甲醇定容，過濾備用。

2.4.2 試樣溶液的制備 稱取0.10g(精確至0.000 2g)試樣于50mL容量瓶中，加入30mL甲醇超聲溶解，冷至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻，過濾備用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，待相鄰針三氟苯嘧啶和氯蟲苯甲酰胺標樣溶液的峰面積相對變化<1.5%時，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.4 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中三氟苯嘧啶和氯蟲苯甲酰胺的峰面積，分別進行平均。三氟苯嘧啶和氯蟲苯甲酰胺的質量分數ω(%)，按式(1)計算：

(1)

式中：

A1-兩針標樣溶液中三氟苯嘧啶或氯蟲苯甲酰胺峰面積的平均值；

A2-兩針試樣溶液中三氟苯嘧啶或氯蟲苯甲酰胺峰面積的平均值；

m1-三氟苯嘧啶或氯蟲苯甲酰胺標樣的質量，g；

m2-試樣的質量，g；

P-標樣中三氟苯嘧啶或氯蟲苯甲酰胺的質量分數，%；

5-標樣溶液的稀釋倍數。

3 結果與討論

3.1 色譜條件的選擇 氯蟲苯甲酰胺和三氟苯嘧啶的紫外波長掃描圖(圖3、圖4)。從圖中可以看出氯蟲苯甲酰胺的最大吸收波長為200nm，三氟苯嘧啶的最大吸收波長在205nm附近，次吸收波長在233nm附近，考慮到200nm附近溶劑吸收可能會對分析造成影響，因此將檢測波長定位230nm。

圖3 氯蟲苯甲酰胺紫外光譜圖

圖4 三氟苯嘧啶紫外光譜圖

選用SinoChrom ODS-BP 200mm×4.6mm(id)反相柱作為分析色譜柱。分別使用甲醇(乙腈)+水、甲醇(乙腈)+磷酸水作為流動相對試樣進行檢測分析，結果發現，用甲醇(乙腈)+磷酸水作為流動相比甲醇(乙腈)+水作為流動相時被試物的峰型對稱性要好，而用0.05%磷酸水和0.1%磷酸水對分析檢測區別不大，從經濟以及對色譜柱的保護角度選擇甲醇+0.05%磷酸水作為流動相。通過系列比例試驗，最終確定流動相為Ψ(甲醇：0.05%磷酸水)=65+35，流速1.0mL/min。該條件下，有效成分可以得到很好的分離，基線平穩，峰型對稱，分析時間適當。

3.2 分析方法的線性相關性試驗 分別稱取氯蟲苯甲酰胺標準品0.052 0g、三氟苯嘧啶標準品0.051 5g于同一50mL容量瓶中，甲醇超聲溶解定容作為母液。分別移取5mL母液至10、25、50、100mL容量瓶中，甲醇溶解定容。將5個容量瓶中的混合標樣溶液在上述色譜操作條件下進樣5μL進行分析，分別以三氟苯嘧啶、氯蟲苯甲酰胺質量濃度(mg/mL)為橫坐標，相對應峰面積(mAU)為縱坐標繪制標準曲線，得到三氟苯嘧啶線性方程為y=354.141 7x+1.174 0，線性相關系數為0.999 9，氯蟲苯甲酰胺線性方程為y=207.168 4x+0.645 2，線性相關系數為0.999 9。

3.3 分析方法的精密度試驗 在相同的色譜條件下，從同一產品中準確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進行分析并求平均值、標準偏差和變異系數，結果表明:三氟苯嘧啶的標準偏差為0.065 3、變異系數為0.76%；氯蟲苯甲酰胺的標準偏差為0.070 7，變異系數為0.63%(表1)。

3.4 分析方法的準確度試驗 取適量已知質量分數的19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑試樣5份于5個50mL容量瓶中，分別加入3.2中混合標準溶液母液各5mL，在上述色譜操作條件下進行分析，結果表明：氯蟲苯甲酰胺的平均回收率為98.8%，三氟苯嘧啶的平均回收率為98.4%(表2)。

表1 分析方法的精密度試驗結果

表2 分析方法的準確度試驗結果

4 結論

本試驗建立一種簡單快捷的分析方法對19%氯蟲苯甲酰胺·三氟苯嘧啶懸浮劑產品進行質量檢測。試驗結果表明，本方法具有較高的準確度和精密度，線性關系良好，并且操作簡便、快速，是產品質量控制較理想的分析方法。