酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊生長性能、血清生化指標(biāo)、瘤胃細(xì)菌多樣性及KEGG通路的影響

姜碧薇 周玉香 王 甜 李 斐

(1.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，銀川750021；2.寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，銀川750021)

苜蓿干草粗蛋白質(zhì)含量高，適口性好，是反芻動(dòng)物優(yōu)質(zhì)的粗飼料來源和重要的飼草作物[1]。但我國優(yōu)質(zhì)苜蓿干草缺乏，若以苜蓿干草作為單一粗飼料，不能滿足養(yǎng)殖業(yè)的需要。我國是農(nóng)業(yè)大國，秸稈產(chǎn)量每年約為9.0億t[2]，但利用率較低且大規(guī)模的焚燒造成了環(huán)境污染。如何有效利用秸稈，降解其纖維素含量并與苜蓿干草配合使用，使其成為反芻動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)粗飼料，一直是動(dòng)物營養(yǎng)研究的熱點(diǎn)。通過飼用酶制劑的添加降解植物細(xì)胞壁的纖維素和半纖維素已是生物技術(shù)在動(dòng)物營養(yǎng)和飼料工業(yè)中應(yīng)用最成功的例子[3]，在粗飼料的發(fā)酵中已運(yùn)用純熟。益生菌發(fā)酵粗飼料能夠提高其營養(yǎng)價(jià)值，促進(jìn)動(dòng)物生長，提高生產(chǎn)性能[4-8]。稻草和苜蓿干草均為肉羊養(yǎng)殖中的常見粗飼料，目前，通過酶菌混合處理稻草和苜蓿干草尚未見報(bào)道。鑒于此，本試驗(yàn)采用纖維素酶與復(fù)合益生菌(主要成分為乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌等)混合處理寧夏地區(qū)常見的2種粗飼料稻草和苜蓿干草，參考課題組成員王萌[9]的試驗(yàn)結(jié)果，將飼糧精粗比設(shè)為30∶70，并將稻草與苜蓿干草以60∶40組合作為粗飼料，研究酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊?qū)ζ渖L性能、血清生化指標(biāo)、瘤胃細(xì)菌多樣性及KEGG通路的影響，以期為粗飼料資源的開發(fā)及其在灘羊生產(chǎn)實(shí)踐中的科學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草的制備

準(zhǔn)備適量的稻草和苜蓿干草，用粉碎機(jī)粉碎至3～5 cm備用。參照文獻(xiàn)[10]確定纖維素酶與復(fù)合益生菌的添加量，按照配制比例準(zhǔn)確稱取纖維素酶[活性≥10000U/g；添加量為0.1%]、復(fù)合益生菌[主要成分為酵母菌(活菌數(shù)≥1.0×108CFU/g)、乳酸菌(活菌數(shù)≥1.0×107CFU/g)和枯草芽孢桿菌(活菌數(shù)≥5.0×107CFU/g)，添加量為2 kg/t]和麥麩(按照待處理粗飼料的1%稱取)后，加入適量的水，充分?jǐn)嚢瑁旌暇鶆蚝蟛扇娏艿姆绞剑厙姙⑦厰嚢瑁顾芤号c待處理粗飼料充分混合并將含水量調(diào)至70%左右，最后利用青貯裹包機(jī)直接進(jìn)行打捆包膜后，密封保存30 d。稻草和苜蓿干草處理前后分別測定其營養(yǎng)物質(zhì)含量，其中干物質(zhì)含量參照《飼料水分的測定方法》(GB/T 6435—2006)測定，粗蛋白質(zhì)(CP)含量參照《飼料中粗蛋白測定方法》(GB/T 6435—2006)測定，中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量參照Van Soest等[11]的方法進(jìn)行測定，粗灰分含量參照《飼料中粗灰分的測定方法》(GB/T 6435—2006)測定，鈣(Ca)含量采用高錳酸鉀法測定，磷(P)含量采用鉬黃比色法(UV-1780紫外分光光度計(jì)，島津，日本)測定。處理前后稻草和苜蓿干草營養(yǎng)成分含量見表1。

表1 處理前后稻草和苜蓿干草營養(yǎng)成分含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

飼養(yǎng)試驗(yàn)于2019年7—9月在寧夏農(nóng)墾寧羊農(nóng)牧有限公司有機(jī)牧場進(jìn)行。選擇體重[(31.03±1.00) kg]相近、健康狀況良好的3月齡斷奶寧夏灘羊(公羊)20只，隨機(jī)分為2組(對(duì)照組和試驗(yàn)組)，每組10只。對(duì)照組飼喂以未經(jīng)處理的稻草和苜蓿干草為粗飼料的試驗(yàn)飼糧，試驗(yàn)組飼喂以酶菌混合處理的稻草和苜蓿干草為粗飼料的試驗(yàn)飼糧。

1.3 試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)飼糧參照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 816—2004)和生產(chǎn)實(shí)踐配制，其組成及營養(yǎng)水平見表2。試驗(yàn)飼糧精粗比為30∶70，粗飼料由稻草與苜蓿干草按照60∶40的比例進(jìn)行配制，對(duì)照組飼糧中稻草與苜蓿干草未經(jīng)處理，試驗(yàn)組飼糧中稻草與苜蓿干草經(jīng)酶菌混合處理。參試羊在試驗(yàn)前進(jìn)行驅(qū)蟲等常規(guī)防疫，定期對(duì)圈舍進(jìn)行消毒與清掃。預(yù)試期15 d，正試期60 d，每日早晚(06:30和18:00)分2次等量飼喂，自由飲水。

表2 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表2項(xiàng)目 Items對(duì)照組 Control group試驗(yàn)組 Trial group玉米 Corn1515豆粕 Soybean meal1010麥麩 Wheat bran11胡麻餅 Jute cake22食鹽 NaCl11預(yù)混料 Premix1)11合計(jì) Total100100營養(yǎng)水平 Nutrient levels2)代謝能 ME/(MJ/kg)8.768.98粗蛋白質(zhì) CP10.0811.63鈣 Ca0.560.79磷 P0.170.17

1.4 樣品收集與指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能測定

從正試期開始，每日準(zhǔn)確記錄羊只的給料量與剩料量，計(jì)算干物質(zhì)采食量。分別在試驗(yàn)開始當(dāng)天和試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早晨空腹稱取2組參試羊的體重，分別作為初始體重和終末體重，計(jì)算每只羊的總增重、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血液樣品采集與血清生化指標(biāo)測定

血液樣品采集：分別于正試期的第1天、第30天和第60天晨飼前對(duì)2組參試羊進(jìn)行靜脈采血，采集的血樣在離心管內(nèi)放置40 min，之后用離心機(jī)于3 800 r/min離心10 min，離心結(jié)束后吸取血清(每個(gè)樣品取1 mL血清2份)，置于-20 ℃保存。試驗(yàn)結(jié)束后，使用邁瑞B(yǎng)S-180全自動(dòng)生化分析儀，利用試劑盒(購于深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素(URE)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、球蛋白(GLB)含量，計(jì)算白蛋白/球蛋白(A/G)。

1.4.3 瘤胃液的采集與DNA提取及建庫測序

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天清晨空腹采集瘤胃液，每組選擇3只參試羊，采用負(fù)壓采集器，經(jīng)導(dǎo)管通過口腔食道，深入到瘤胃中部采集瘤胃液約100 mL，每個(gè)瘤胃液樣品經(jīng)4層薄紗布過濾后液氮保存。將瘤胃液樣品送至廣州基迪奧生物科技有限公司進(jìn)行V3+V4區(qū)擴(kuò)增并進(jìn)行Illumina HiSeq平臺(tái)測序。通過原始控制程序過濾原始Tags，以97%以上匹配度為標(biāo)準(zhǔn)，將有效的Tags分配到操作分類單元(OTU)。采用MetaProdigal (V2.6.3)預(yù)測宏基因組蛋白質(zhì)編碼基因，CH-HIT (V4.6.5)構(gòu)建非冗余集合預(yù)測基因模型。采用序列同源性搜索工具DIAMOND (V0.8.24)以及BLASTX (V2.2.31+)完成蛋白質(zhì)功能的序列注釋。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

生長性能、血清生化指標(biāo)及瘤胃細(xì)菌多樣性等數(shù)據(jù)用Excel 2007記錄并作簡單處理后，采用SAS 8.2軟件進(jìn)行方差分析，并采用LSD法進(jìn)行多重比較，以P<0.05和P<0.01分別作為差異顯著和極顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。宏基因組數(shù)據(jù)Unigenes通過DIAMOND軟件(閾值E值≤1e-5)比對(duì)到KEGG數(shù)據(jù)庫，集合基因豐度表格計(jì)算不同數(shù)據(jù)庫比對(duì)結(jié)果的豐度信息，以進(jìn)行系統(tǒng)豐富的組間功能差異分析和比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊生長性能和經(jīng)濟(jì)效益的影響

2.1.1 對(duì)灘羊生長性能的影響

由表3可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組的初始體重?zé)o顯著差異(P>0.05)，而試驗(yàn)組的終末體重較對(duì)照組有所增加，但差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)組的干物質(zhì)采食量比對(duì)照組降低了1.63%，但差異不顯著(P>0.05)；試驗(yàn)組的總增重、平均日增重極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，料重比極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，其中試驗(yàn)組總增重比對(duì)照組提高了44.36%，平均日增重比對(duì)照組提高了44.37%，料重比比對(duì)照組降低了31.89%。上述結(jié)果表明，用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，可以提高灘羊的增重，降低料重比。

2.1.2 對(duì)灘羊經(jīng)濟(jì)效益的影響

由表4可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組灘羊每日飼料成本差異不大，但試驗(yàn)組1只羊的日平均純利潤為3.39元，比對(duì)照組提高了1.33元。該結(jié)果表明，用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，能夠提高灘羊養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益。

表3 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊生長性能的影響

表4 經(jīng)濟(jì)效益分析

2.2 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，第1天時(shí)，試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，各項(xiàng)血清生化指標(biāo)均無顯著差異(P>0.05)。第30天時(shí)，試驗(yàn)組血清尿素含量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其他各項(xiàng)指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)。第60天時(shí)，試驗(yàn)組血清總蛋白、球蛋白含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血清尿素含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。該結(jié)果表明，用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，可以顯著提高灘羊血清總蛋白、球蛋白含量，極顯著降低灘羊血清尿素含量。

表5 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊血清生化指標(biāo)的影響

2.3 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性的影響

2.3.1 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌OTU數(shù)量的影響

經(jīng)測定，對(duì)照組共獲得reads 113 515 252個(gè)，試驗(yàn)組共獲得reads 126 324 584個(gè)。由表6可知，對(duì)照組與試驗(yàn)組的覆蓋度均大于0.98，說明測序量和測序深度合理，能夠準(zhǔn)確反映灘羊瘤胃內(nèi)的細(xì)菌組成情況；試驗(yàn)組的OTU數(shù)量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，說明用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了其瘤胃細(xì)菌的OTU數(shù)量。

表6 各組瘤胃細(xì)菌OTU數(shù)量

2.3.2 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌Alpha多樣性的影響

由表7可知，試驗(yàn)組Chao指數(shù)、ACE指數(shù)和Simpson指數(shù)與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)，Shannon指數(shù)極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理后的稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了其瘤胃細(xì)菌的Shannon指數(shù)。

表7 16S rDNA檢測Alpha多樣性

2.3.3 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌Beta多樣性的影響

圖1為基于瘤胃細(xì)菌OTU的主坐標(biāo)分析(PCoA)。由圖1可知，主坐標(biāo)成分1(PCo1)和主坐標(biāo)成分2(PCo2)對(duì)樣本間變異的貢獻(xiàn)度分別為33.43%和20.04%，能夠充分解釋樣本間的變異；且PCoA顯示，同組內(nèi)樣本距離較近，說明同組內(nèi)物種多樣性差異較小，對(duì)照組與試驗(yàn)組之間樣本距離較遠(yuǎn)，說明對(duì)照組與試驗(yàn)組之間細(xì)菌多樣性存在差異。該結(jié)果表明，用酶菌混合處理后的稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，影響了其瘤胃細(xì)菌的多樣性。

藍(lán)色圓點(diǎn)為對(duì)照組的3個(gè)平行樣本，橙色圓點(diǎn)為試驗(yàn)組的3個(gè)平行樣本。圖2同。

2.3.4 對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌優(yōu)勢菌門及門水平差異物種的影響

由表8可知，對(duì)照組與試驗(yàn)組的優(yōu)勢菌門均為變形菌門、厚壁菌門和擬桿菌門，三者總量占總菌門的90%以上。其中，試驗(yàn)組變形菌門的豐度極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，擬桿菌門的豐度極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，厚壁菌門的豐度較對(duì)照組提高了4.58%，但差異不顯著(P>0.05)。由圖2可知，試驗(yàn)組與對(duì)照組存在顯著差異的菌門分別為變形菌門、Patescibacteria、擬桿菌門、Kiritimatiellaeota、浮霉菌門、藍(lán)藻門、螺旋體門和互養(yǎng)菌門，其中試驗(yàn)組變形菌門、Patescibacteria的比例顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，擬桿菌門、Kiritimatiellaeota、浮霉菌門、藍(lán)藻門、螺旋體門、互養(yǎng)菌門的比例顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。上述結(jié)果說明用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，其瘤胃內(nèi)的差異菌門多達(dá)8個(gè)，影響了其瘤胃內(nèi)環(huán)境。

2.4 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌KEGG通路的影響

本試驗(yàn)中，對(duì)照組共獲得基因5 121 024個(gè)，試驗(yàn)組共獲得基因6 461 155個(gè)。與KEGG數(shù)據(jù)庫對(duì)比可得各樣品KEGG注釋圖(圖3)。由圖3可知，在A層級(jí)中，富集到新陳代謝(metabolism)層級(jí)的基因數(shù)量最多，其次是遺傳信息處理(genetic information processing)、環(huán)境信息處理(environmental information processing)、細(xì)胞過程(cellular processing)以及人類疾病(human disease)層級(jí)。該結(jié)果表明，以酶菌混合處理稻草和苜蓿干草作為粗飼料飼喂灘羊，其瘤胃內(nèi)主要功能酶是參與新陳代謝、遺傳信息處理和環(huán)境信息處理。在B層級(jí)中，豐度排名前25的通路見表9。由表9可知，試驗(yàn)組嘌呤代謝(purine metabolism)、雙組分系統(tǒng)(two-component system)和ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ABC transporters)等22條通路的基因數(shù)量與對(duì)照組無顯著差異(P>0.05)，而嘧啶代謝(pyrimidine metabolism)、氨基糖和核苷酸糖代謝(amino sugar and nucleotide sugar metabolism)、二羧酸代謝(glyoxylate and dicarboxylate metabolism)這3條通路的基因數(shù)量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。

表8 全樣本優(yōu)勢菌門豐度

Proteobacteria：變形菌門；Bacteriodetes：擬桿菌門；Planctomycetes：浮霉菌門；Cyanobactria：藍(lán)藻門；Spirochaetes：螺旋體門；Synergistetes：互養(yǎng)菌門。

3 討 論

3.1 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊生長性能和經(jīng)濟(jì)效益的影響

反映反芻動(dòng)物生長性能的主要指標(biāo)有采食量、日增重、料重比等。有研究表明，適宜的苜蓿補(bǔ)飼可以提高稻草纖維物質(zhì)的消化率[12]。本試驗(yàn)選用稻草與苜蓿干草以60∶40比例組合作為粗飼料，增重效果較為理想。研究表明，在畜禽養(yǎng)殖過程中添加一些維生素制劑、微量元素制劑、酶制劑、微生物制劑等可以提高畜禽的生長性能和肉品質(zhì)[13]。邱玉朗等[14]研究發(fā)現(xiàn)，用混合微生物發(fā)酵秸稈飼喂肉羊，其平均日增重提高36%，料重比降低28.68%。王平等[15]研究表明，在育肥綿羊基礎(chǔ)飼糧中添加纖維素酶后，日增重可提高43.98%。李軍[16]的研究結(jié)果顯示，益生菌劑的添加可以提高肉羊的生長性能。申春紅[17]的研究結(jié)果顯示，在基礎(chǔ)飼糧中添加2.0%復(fù)合微生物制劑可以提高肉牛的生長性能。本試驗(yàn)運(yùn)用纖維素酶和復(fù)合益生菌混合處理稻草和苜蓿干草。以其作為粗飼料飼喂灘羊，顯著提高了灘羊的總增重和平均日增重，并降低了料重比，說明該處理方式提高了灘羊的生長性能。

Metabolism：新陳代謝；Carbohydrate metabolism：碳水化合物代謝；Amino acid metabolism：氨基酸代謝；Nucleotide metabolism：核苷酸代謝；Metabolism of cofactors and vitamins：輔助因子和維生素代謝；Energy metabolism：能量代謝；Lipid metabolism：脂質(zhì)代謝；Glycan biosynthesis and metabolism：聚糖生物合成代謝；Metabolism of other amino acids：其他氨基酸代謝；Biosynthesis of other secondary metabolites：其他次生代謝產(chǎn)物的生物合成；metabolism of terpenoids and polyketides：萜類化合物和聚酮的代謝；Xenobiotics biodegradation and metabolism：外源生物的生物降解與代謝；Genetic Information Processing：遺傳信息處理；Replication and repair：復(fù)制和修復(fù)；Translation：翻譯；Folding, sorting and degradation：折疊、排序和退化；Transcription：謄寫；Environmental Information Processing：環(huán)境信息處理；Membrane transport：膜運(yùn)輸；Signal transduction：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；Cellular Processes：細(xì)胞過程；Cellular community-prokaryotes：原核微生物的細(xì)胞通訊；Human Diseases：人類疾病；Drug resistance：抗藥性。

表9 KEGG通路較高豐度基因數(shù)量(B層級(jí))

續(xù)表9通路 Pathways對(duì)照組 Control group試驗(yàn)組 Trial group錯(cuò)配修復(fù) Mismatch repair7 450.39±116.147 389.15±126.02半乳糖代謝 Galactose metabolism7 019.39±166.407 140.79±85.82DNA復(fù)制 DNA replication6 983.21±81.216 727.74±116.81半胱氨酸和蛋氨酸代謝 Cysteine and methionine metabolism6 900.86±188.466 872.82±112.98肽聚糖類生物合成 Peptidoglycan biosynthesis6 553.50±219.817 031.20±120.82丙酮酸代謝 Pyruvate metabolism5 992.15±238.946 218.89±180.47甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝 Glycine, serine and threonine metabolism5 784.30±82.586 081.66±69.13果糖和甘露糖代謝 Fructose and mannose metabolism5 405.37±21.145 447.33±90.28氧化磷酸化作用 Qxidative phosphorylation5 262.32±44.575 368.43±37.51苯丙氨酸、絡(luò)氨酸和色氨酸的生物合成 Phenylalanine, tyrosine and tryptophan biosynthesis5 127.29±160.875 318.04±43.51磷酸戊糖途徑 Pentose phosphate pathway5 020.90±125.125 176.13±69.83二羧酸代謝 Glyoxylate and dicarboxylate metabolism4 705.13±64.82B4 854.40±43.49A甲烷代謝 Methane metabolism4 299.57±102.034 587.22±117.95

有研究表明，飼糧中添加酶制劑能夠顯著提高養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益。藺國文[18]在枯黃玉米秸稈中添加不同比例的復(fù)合酶制劑飼喂肉牛，結(jié)果表明，0.10%的酶制劑效果最佳，日增重達(dá)到1.192 kg，比對(duì)照組提高了23.49%，經(jīng)濟(jì)效益顯著增加。本試驗(yàn)用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，1只羊的日平均純利潤提高了1.3元，說明該處理方式的經(jīng)濟(jì)效益較為理想。

3.2 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊血清生化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)反映了機(jī)體新陳代謝的變化情況[19]。其中，血清總蛋白不但承載了運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)、調(diào)節(jié)運(yùn)輸物質(zhì)等重要生理功能，還與組織蛋白質(zhì)合成有密切聯(lián)系，其含量能夠反映機(jī)體的營養(yǎng)狀況和蛋白質(zhì)消化率[20]。血清球蛋白又稱為免疫球蛋白，能夠反映機(jī)體的抗病能力。良好的營養(yǎng)狀況可使血清總蛋白和球蛋白含量維持在一個(gè)較高水平，二者含量的升高表明機(jī)體代謝活動(dòng)增強(qiáng)[21]。血清尿素是機(jī)體蛋白質(zhì)分解代謝的重要產(chǎn)物之一，體現(xiàn)了蛋白質(zhì)的代謝情況。機(jī)體血清尿素含量降低，說明機(jī)體對(duì)氮的利用效率升高[22]。康懷艷[23]研究了益生菌發(fā)酵飼料對(duì)奶山羊血清生化指標(biāo)和產(chǎn)奶性能的影響，結(jié)果表明，益生菌發(fā)酵飼料能夠提高奶山羊血清總蛋白和球蛋白含量，降低血清尿素氮含量。余淼等[24]用芽孢桿菌、乳酸菌和酵母菌發(fā)酵飼料飼喂肉牛，結(jié)果顯示，肉牛的血清總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A和免疫球蛋白M含量顯著提高。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)結(jié)果表明，用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，可以提高灘羊血清總蛋白、球蛋白含量，降低血清尿素含量，有益于灘羊的健康養(yǎng)殖。

3.3 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性的影響

目前隨著宏基因組學(xué)的興起，學(xué)者們針對(duì)瘤胃生態(tài)環(huán)境的研究越來越趨向于微觀的分子。在瘤胃微生態(tài)系統(tǒng)當(dāng)中，微生物區(qū)系的結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，瘤胃微生物種群的數(shù)量以及區(qū)系組成受多種因素的影響。近年來，有關(guān)飼用纖維素酶或益生菌作為飼料添加劑對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃消化代謝影響的研究較多。有研究表明，在飼糧中添加分解纖維素酶制劑可以顯著提高奶牛瘤胃微生物數(shù)量[25]。黃慶生等[26]研究表明，酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高瘤胃總細(xì)菌數(shù)量，而對(duì)其他指標(biāo)沒有顯著影響。Kong等[27]研究了飼喂不同粗飼料對(duì)奶牛瘤胃細(xì)菌多樣性及結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果顯示，在門水平上，厚壁菌門和擬桿菌門占整個(gè)瘤胃細(xì)菌的比例較大，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。

3.4 酶菌混合處理稻草和苜蓿干草對(duì)灘羊瘤胃KEGG通路的影響

KEGG能夠從分子水平上系統(tǒng)研究差異基因的功能，因此是代謝通路研究的核心[28]。它涵蓋了基因組、疾病和信號(hào)通路等數(shù)據(jù)庫，整合了相關(guān)蛋白質(zhì)、基因、代謝等多種信息，通過比對(duì)已知通路，按照不同功能分級(jí)。褚毅[29]通過在豬的基礎(chǔ)飼糧中添加脂肪和糖研究代謝通路的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)功能基因進(jìn)行KEGG富集時(shí)集中在代謝通路上，進(jìn)一步研究注釋在代謝通路上的差異功能基因，發(fā)現(xiàn)添加脂肪和糖造成的差異主要表現(xiàn)在脂肪酸代謝方面。多項(xiàng)研究表明，二羧酸代謝與脂肪酸代謝有關(guān)。有研究表明，尿嘧啶參與了某些B族維生素的合成，其含量變化可能會(huì)引起B(yǎng)族維生素的變化[30]。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組嘧啶代謝、氨基糖和核苷酸糖代謝、二羧酸代謝3條通路的基因數(shù)量極顯著高于對(duì)照組，說明用酶菌混合處理稻草和苜蓿干草飼喂灘羊，提高了灘羊嘧啶代謝、氨基糖和核苷酸糖代謝、二羧酸代謝的基因數(shù)量，有可能會(huì)增強(qiáng)B族維生素的合成和脂肪酸的代謝功能。

4 結(jié) 論

酶菌混合處理稻草和苜蓿干草可以提高灘羊的增重和養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)，該處理方式提高了灘羊血清總蛋白、血清球蛋白含量，降低了血清尿素含量，改變了灘羊瘤胃細(xì)菌多樣性和部分功能基因的數(shù)量。在本試驗(yàn)條件下，用酶菌混合處理的稻草和苜蓿干草飼喂灘羊的效果較優(yōu)，有益于灘羊的健康養(yǎng)殖，可在生產(chǎn)中推廣使用。