2014-2018年江蘇省禽類外環(huán)境禽流感病毒監(jiān)測結(jié)果分析

余慧燕，許 可，黃昊頔，祁 賢，鮑倡俊

禽流感是由禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)在各種家禽及野生禽類中引起疫病的傳染性疾病[1]。目前主要有H5、H7、H9三類亞型禽流感病毒可以感染人類。近年來，全球多個(gè)國家或地區(qū)發(fā)生各種不同亞型的禽流感疫情，波及范圍很廣，對養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。同時(shí)某些亞型禽流感病毒可以跨越宿主屏障對人類造成感染，這對人類健康及公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。江蘇省地處我國長三角區(qū)域，水網(wǎng)密布，湖泊眾多，養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)，是受禽流感病毒影響較大的省份之一。科學(xué)研究表明，禽類接觸史是人感染禽流感病毒的重要因素[2]。通過對活禽市場、家禽養(yǎng)殖場等高危場所的監(jiān)控，可以對禽流感的流行規(guī)律及防控措施提供重要的參考意義。因此，本文旨在分析2014-2018年江蘇省禽類市場外環(huán)境禽流感病毒時(shí)空流行病學(xué)特征的研究，對于開展江蘇省禽流感的防控工作具有重要的指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本采集 在全省13個(gè)市設(shè)立城鄉(xiāng)活禽市場、家禽屠宰加工廠、家禽散養(yǎng)戶集中地區(qū)、家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(戶)、野生候鳥棲息地5類監(jiān)測場所；根據(jù)監(jiān)測方案要求，隨機(jī)選取籠具表面擦拭標(biāo)本、糞便標(biāo)本、宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本、禽類飲水、清晰禽類的污水、其他等6類不同類型外環(huán)境涂抹拭子標(biāo)本，共采集禽流感外環(huán)境標(biāo)本27 942份。按照《人感染H7N9禽流感疫情防控方案(第3版)》的要求，所有采集的標(biāo)本在4 ℃環(huán)境下保存，并保證在24 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室于-80 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2標(biāo)本檢測 從外環(huán)境標(biāo)本中提取病毒 RNA后(ABI 全自動(dòng)核酸提取儀，磁珠法核酸提取試劑盒購自ABI公司，貨號(hào)為AMB1836-5)，采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 方法對所有標(biāo)本進(jìn)行流感病毒A通用(FluA) 的核酸檢測，其中陽性標(biāo)本再進(jìn)行 H5、H7、H9 禽流感亞型的分型檢測，甲型流感病毒及禽流感病毒 H5/H7/H9 亞型核酸檢測試劑盒購自江蘇碩世公司，貨號(hào)分別是 JC10103 和 JC10301)。

1.3方法 利用描述性流行病學(xué)方法分析江蘇省禽流感病毒的流行特征，利用Excel及ArcGIS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，利用Matlab軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，地圖繪制及結(jié)果可視化利用ArcGIS軟件完成。

2 結(jié) 果

2.1基本情況 2014-2018年累計(jì)檢測覆蓋江蘇省13個(gè)行政區(qū)域內(nèi)禽流感外環(huán)境標(biāo)本27 942份(圖1)，檢測出A型通用陽性標(biāo)本3 867份，陽性率為13.84%。其中，H5亞型陽性標(biāo)本330份，H9亞型陽性標(biāo)本1 905份，H7亞型陽性標(biāo)本986份， H5和H9混合亞型標(biāo)本157份，H9和H7混合亞型陽性標(biāo)本293份，H5和H7混合亞型陽性標(biāo)本116份，H5、H9、H7混合亞型陽性標(biāo)本61份。

圖1 江蘇省各大市樣本采集情況Fig.1 Sample collection in each city of Jiangsu Province

不同檢測場所的外環(huán)境檢測標(biāo)本陽性率(表1)表明：城鄉(xiāng)活禽市場是A型禽流感病毒高發(fā)場所，禽流感病毒陽性率為19.18%。不同檢測場所禽流感病毒檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.405 8，P<0.05)。

不同標(biāo)本類型禽流感病毒檢測結(jié)果(表2)表明：宰殺或擺放禽肉案板表面和清洗禽類的污水的禽流感病毒檢出率較高，陽性率分別為23.30%和20.61%。不同檢測標(biāo)本類型的禽流感病毒檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.527 7，P<0.05)。

表1 不同檢測場所禽流感病毒檢測結(jié)果Tab.1 Positivity rate of the bird flu samples in the external environment in different areas in Jiangsu province from 2014 to 2018

表2 不同標(biāo)本類型禽流感病毒檢測結(jié)果Tab.2 Positivity rate of different types of bird flu samples in the external environment in Jiangsu Province from 2014 to 2018

2.2時(shí)間分布情況 2014-2018年外環(huán)境禽流感A型通用檢出率分別為12.46%、10.81%、20.41%、13.00%、12.55%，不同年份禽流感病毒檢出率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.18，P>0.05)。

不同月份外環(huán)境禽流感病毒檢測情況見表3所示。各月份禽流感A型通用陽性率在0～26.68%之間，其中，2014年8月份陽性檢出率最低(0.43%)，2016年3月份陽性檢出率最高(26.68%)。

表3 2014-2018年不同月份外環(huán)境禽流感病毒陽性率檢出情況(%)Tab.3 Positivity rate of the bird flu samples in the external environment in Jiangsu Province in each month from 2014 to 2018 (%)

2014-2018年月平均外環(huán)境禽流感病毒陽性率檢出情況及變化趨勢如圖2所示。1月份和12月份禽流感外環(huán)境樣本A型禽流感病毒陽性檢出率最高，6-8月份禽流感外環(huán)境樣本A型禽流感病毒陽性檢出率最最低，全年各月份平均禽流感外環(huán)境樣本A型病毒檢出率呈“U”型分布，不同月份外環(huán)境禽流感A通用型檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.39，P<0.05)。

圖2 2014-2018年月平均外環(huán)境禽流感病毒陽性率檢出情況及變化趨勢Fig.2 Average positivity rate of the bird flu samples in the external environment in Jiangsu Province in each month from 2014 to 2018

2.3地域分布情況 各行政區(qū)域外環(huán)境禽流感病毒標(biāo)本檢測情況如圖3所示，江蘇省13個(gè)地級(jí)市行政區(qū)劃均有通用A型禽流感病毒核酸陽性檢出，陽性率在3.58%～22.37%之間。其中，淮安市禽流感A通用型陽性檢出率最低(3.58%)，鎮(zhèn)江市禽流感A通用型陽性檢出率最高(22.37%)其次是常州市(21.98%)和南京市(21.96%)，不同行政區(qū)域外環(huán)境禽流感A通用型檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=26.61，P<0.05)。

圖3 各行政區(qū)域禽流感標(biāo)本檢測情況Fig.3 Cases with avian influenza virus infection in each region of Jiangsu Province

3 討 論

自2013年中國發(fā)生人感染H7N9禽流感疫情以來，各地禽流感外環(huán)境監(jiān)測工作被作為禽流感防控體系建設(shè)中的一項(xiàng)重要內(nèi)容正逐漸得到重視[3]，相關(guān)研究證實(shí)禽流感病毒在外環(huán)境中大量存在，同時(shí)，人感染禽流感病毒與活禽市場和禽類暴露有關(guān)[4-5]。加強(qiáng)禽流感外環(huán)境病毒監(jiān)測，對于動(dòng)態(tài)跟蹤外環(huán)境中禽流感病毒的污染情況及指導(dǎo)相關(guān)部門有針對性的采取防控措施具有重要的指導(dǎo)意義。

研究結(jié)果表明，2014-2018年全年均有陽性禽流感病毒檢出，其中以12月(18.39%)和次年1月(20.58%)為較高，與季節(jié)性流感相似，呈現(xiàn)出明顯的冬季和春季的外環(huán)境禽流感病毒高發(fā)模式，該研究結(jié)果與以往研究結(jié)果一致[5-7]。因此，我們應(yīng)加大每年春季和冬季的禽流感病毒監(jiān)測力度，做好高發(fā)季節(jié)人感染禽流感病毒的防控工作。

通過對禽流感亞型進(jìn)行分型發(fā)現(xiàn)，H9亞型是江蘇省禽流感外環(huán)境中主要存在的類型，與國內(nèi)其他地區(qū)的相關(guān)研究報(bào)道一致[8-9]。

從地區(qū)分布上看，江蘇省不同行政區(qū)禽流感外環(huán)境樣本陽性檢出率具有顯著性差異，位居前3的分別為鎮(zhèn)江市(22.37%)、常州市(21.98%)和南京市(21.96%)。究其原因，主要是這些地區(qū)人口密度較大，活禽市場及交易攤位多，人員復(fù)雜，市場存在著監(jiān)管不到位現(xiàn)象[10-11]。因此，應(yīng)加強(qiáng)對陽性高發(fā)區(qū)的活禽交易市場的監(jiān)管和指導(dǎo)。

活禽市場是人感染禽流感病毒的主要來源地[12-13]。本文通過比較不同監(jiān)測場所的禽流感外環(huán)境標(biāo)本發(fā)現(xiàn)城鄉(xiāng)活禽市場的禽流感病毒檢出陽性率最高，同時(shí)，不同類型標(biāo)本的比較表明宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本以及清洗禽類的污水的禽流感病毒陽性檢出率最高。提示在禽類的宰殺和清洗環(huán)節(jié)中，暴露人員存在感染的風(fēng)險(xiǎn)，因此在禽流感防控工作中，要加強(qiáng)對城鄉(xiāng)活禽市場的管控，對宰殺或擺放禽肉的案板及清洗禽類的污水要及時(shí)進(jìn)行消毒。同時(shí)，要通過各種媒體宣傳的形式，加強(qiáng)對大眾的健康教育宣傳，提醒禽流感病毒的傳播方式，預(yù)防措施和治療方法等，盡可能減少人感染禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)。關(guān)閉活禽交易市場能有效降低人感染禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)[14]，但是，單個(gè)城市的短期關(guān)閉活禽市場只能作為一種應(yīng)急措施，短時(shí)期內(nèi)降低市場環(huán)境對禽流感病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)，想要最大程度降低人感染禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)采取區(qū)域性多個(gè)城市同步關(guān)閉活禽交易市場的措施[15]。此外，采用集中交易和宰殺的禽類交易模式是對政府和相關(guān)部門的一個(gè)考驗(yàn)，政府應(yīng)出臺(tái)相應(yīng)的政策，對市場進(jìn)行全方位監(jiān)管，建立高效的應(yīng)急響應(yīng)機(jī)制，提高資源調(diào)度和利用水平。

利益沖突：無