不同離心條件對血清指數和生化免疫檢測TAT的影響

李 瑞，覃俊龍，張秀明

廣東省深圳市羅湖區人民醫院檢驗科，廣東深圳 518001

隨著國家醫療衛生體制改革的深入，為整合醫療資源，提升檢驗質量，實現檢驗結果互認互通，區域檢驗中心建設備受重視。本實驗室為深圳市羅湖區成立的區域性醫學檢驗中心，承擔著全區6家醫院和31家社區康復中心的臨床檢驗任務。實驗室配備了羅氏全自動的生化免疫分析流水線，前處理系統配備2個離心機，可同時離心120個標本，大量標本集中于12：00-16：00到達實驗室，前處理系統需要完成絕大部分標本的離心和分揀任務，嚴重影響了實驗室內標本流轉時間(TAT)。因此需要探討如何優化離心條件、縮短TAT，同時保證標本質量不受影響。

世界衛生組織推薦血清標本需在(1 300～2 500)×g下離心至少10 min[1-2]。研究表明縮短離心時間對大部分血清或血漿中生化和免疫分析物結果并無影響，但乳酸脫氫酶除外[3-6]。因此本研究的目的是在保證血清質量的條件下，尋找本實驗室最佳離心條件的組合，使實驗室內TAT達到最短。

1 資料與方法

1.1標本處理 實驗室內標本來自羅湖醫院集團旗下6家醫院和31家社區康復中心，所有生化免疫項目均使用廣州陽普分離膠-促凝管的真空采血管采血，標本送達實驗室核收后，在羅氏前處理離心機模塊(Cobas P671)進行離心，隨后去帽，前處理系統(Cobas P612)按照檢測項目進行分揀，上機檢測。

1.2離心條件的設置 在50 d內，分別對羅氏前處理離心機模塊的離心力、離心時間、離心溫度進行設置，每組參數使用10 d。離心條件設置見表1。

表1 5組不同離心條件設置

1.3TAT統計 以標本送達實驗室到結果發送作為實驗室內TAT，通過LIS系統統計實驗室內標本高峰時間段(12：00-14：00、14：00-16：00)生化標本的TAT中位數。比較離心時間分別為5、7、10 min的TAT中位數變化。生化項目目標TAT以3 h計算，統計各組生化項目TAT達標率。

1.4血清指數檢測 所有進行生化分析的標本均采用羅氏配套試劑盒進行血清指數檢測，可以半定量測定血清中脂血指數、溶血指數、黃疸指數。對稀釋后標本進行雙波長檢測(溶血指數檢測主波長570 nm，副波長600 nm；脂血指數檢測主波長660 nm，副波長700 nm；黃疸指數檢測主波長480 nm，副波長505 nm)。根據廠家聲明，溶血指數的報告數值與血紅蛋白水平大約一致，黃疸指數的報告數值與膽紅素水平大約一致，脂血指數與血清濁度有關，與三酰甘油水平相關性很差。本實驗室設定的脂血指數參考范圍為0～30 mg/dL；溶血指數參考范圍為0～60 mg/dL；黃疸指數參考范圍為0～4 mg/dL。當溶血指數數值介于120～240 mg/dL時可判斷為中度溶血，此時會對鉀、羥丁酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、乳酸脫氫酶-1、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶檢測結果產生較大影響，這些項目結果不能發送；當溶血指數數值>240 mg/dL時判斷為重度溶血，此時對更多檢測項目結果產生較大影響，標本需直接拒收。

1.5統計學處理 采用SPSS19.0統計軟件進行數據處理分析，計數資料以例數和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以中位數表示，數據分布差異分析的小提琴圖采用Graphpad Prism 8.0繪制。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1不同離心時間對實驗室內TAT和TAT達標率的影響 離心時間從10 min降至7、5 min，實驗室內TAT中位數總體呈下降趨勢。離心時間從10 min降至7 min，實驗室內TAT中位數節省了5～27 min不等；離心時間從10 min降至5 min，實驗室內TAT節省了8～63 min不等。生化檢測項目3 h，Ⅰ組TAT達標率為95.85%，Ⅱ組TAT達標率為97.62%，Ⅲ組TAT達標率為97.63%，Ⅳ組TAT達標率為97.80%，Ⅴ組TAT達標率為98.50%。

表2 不同離心時間的TAT中位數(min)

2.2不同離心力對血清指數的影響 保持離心溫度和離心時間相同的條件下，離心力2 000×g時溶血指數中位數是4 mg/dL，離心力3 000×g時溶血指數中位數是5 mg/dL，差異有統計學意義(P<0.05)。黃疸指數和脂血指數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。溶血指數的小提琴圖分析結果顯示，2組數據均存在較多離群值，溶血指數主要分布在0～10 mg/dL，在此范圍內，離心力較高時溶血指數數據離散程度更高，溶血程度更明顯，見圖1。

圖1 Ⅰ組和Ⅲ組溶血指數的小提琴分布圖

2.3不同離心時間對血清指數的影響 保持離心溫度和離心力相同的條件下，離心時間10 min時溶血指數中位數是5 mg/dL，離心時間5 min時溶血指數中位數是4 mg/dL，差異有統計學意義(P<0.05)。黃疸指數和脂血指數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。溶血指數的小提琴圖分析結果顯示，2組數據均存在較多離群值，溶血指數主要分布在0～10 mg/dL，在此范圍內，離心時間較長時溶血指數分布更加集中，但溶血程度更高一些，見圖2。

圖2 Ⅲ組和Ⅳ組溶血指數的小提琴分布圖

2.4不同離心溫度對血清指數的影響 保持離心時間和離心力相同的條件下，離心溫度15 ℃時溶血指數的中位數是4 mg/dL，離心溫度25 ℃時溶血指數中位數是3 mg/dL，差異有統計學意義(P<0.05)。黃疸指數和脂血指數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。溶血指數的小提琴圖分析結果顯示，2組數據均存在較多離群值,溶血指數主要分布在0～10 mg/dL，在此范圍內，離心時溫度較低時溶血指數分布更加集中，但溶血程度更高，見圖3。

圖3 Ⅰ組和Ⅱ組溶血指數的小提琴分布圖

2.5提高離心力，降低離心時間對血清指數的影響 離心力從2 000×g增加到3 000×g，離心時間從10 min縮短到5 min，溶血程度比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見圖4。

圖4 Ⅰ組和Ⅳ組溶血指數的小提琴分布圖

2.6不同離心條件溶血指數超過實驗室接受標準的標本分布差異比較 以溶血指數≥120 mg/dL為判斷標準，統計5組不同離心條件下溶血標本的分布差異，5種離心條件下溶血標本分布差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同離心條件下的溶血標本構成差異比較(n)

3 討 論

已有研究表明，不同離心條件對檢測結果準確性有影響，CADAMURO等[4]研究了不同離心條件對包括離子、酶類、蛋白、血糖、激素、腫瘤標志物等在內的77種常用生化項目檢測結果的影響，該研究納入41例體檢健康者，離心條件分別設置為2 000×g、10 min，3 000×g、7 min，3 000×g、5 min，結果顯示除了游離血紅蛋白外，其他項目檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。MOLLER等[3]將40份標本提高離心力、降低離心時間，比較常規生化檢測結果，結果顯示，提高離心力降低離心時間后除乳酸脫氫酶水平輕度升高外，對其他常規項目檢測結果無影響。MONNERET等[5]比較了離心10 min和15 min對27種常見生化免疫分析物檢測結果的影響，結果表明縮短離心時間后，乳酸脫氫酶水平會輕度升高，對其他項目檢測結果無影響。基于上述研究，本實驗室主要探討了不同離心條件對血清質量的影響。

標本檢驗前階段是整個檢驗過程中很重要的一部分，決定了標本質量是否能夠滿足臨床檢測的需要[7-8]。相關研究已經證實檢驗分析前階段誤差占檢驗過程所有誤差的60%～70%，而溶血又占分析前階段誤差的40%左右[9-10]。

血清指數檢測結果可提示溶血、黃疸和脂血程度對檢測結果的干擾。其中溶血往往與不恰當的采血方法，采血容器和采血管運輸及離心條件有關，對檢驗結果的干擾也最大，可造成多種細胞內檢測物結果偏高或結果錯誤[11-12]。從肉眼可見的顏色來講，溶血是指血清中的游離血紅蛋白水平超過30 mg/dL,離心速度過高和離心時間過長都會導致體外溶血的發生。目前，常規生化免疫檢測技術相對成熟，標本前處理通常只需要離心即可。不少實驗室為了縮短實驗室內TAT而改變離心時間或離心條件，但并不清楚不同離心條件對血清質量的影響。

本研究顯示，離心力從2 000×g提高到3 000×g，標本總體溶血程度也相應升高；離心時間從5 min延長到10 min，標本總體溶血程度也相應升高，但溶血指數的中位數均≤5 mg/dL，在臨床可接受范圍內。本研究顯示，提高離心力同時降低離心時間，溶血指數中位數不變，發生溶血的標本比例也基本一致，因此提高離心力至3 000×g，降低離心時間到5 min是可行的，實驗室內離心條件的輕微改變，對溶血不會產生明顯的影響，造成溶血的主要因素可能與標本采集環節和轉運環節相關性更高[13-14]。

本實驗室12：00-14：00是標本高峰時間，離心5 min的TAT中位數長于離心7 min的TAT中位數，幾乎和離心10 min的TAT中位數相當，原因可能是雖然縮短了離心時間，但前處理分揀和分杯系統運行速度有限，高峰時段標本雖然已在離心機模塊完成離心，但P612前處理系統還要進一步分揀、分杯一些非流水線項目標本，導致標本離心完成后不能及時進入儀器內，造成實驗室內TAT的延長。

綜上所述,14:00-16:00離心5 min時實驗室內TAT最短，其他時間段離心7min TAT最短。增大離心力，延長離心時間，降低離心溫度，溶血程度會升高,但在臨床可接受范圍內。考慮到在同一天的不同時間內改變離心條件難以實現，綜合以上因素，在臨床可接受的溶血指數范圍內結合實驗室內TAT，5個離心條件組合中，3 000×g、7 min、25 ℃為最佳離心條件。雖然脂血和黃疸均會對檢測結果產生干擾，但溶血指數和黃疸指數與患者的病理狀態相關性更高，如病理性黃疸和高脂血癥，與標本前處理過程相關性不大，因此在文章中不做討論。