高效液相色譜-串聯質譜法測定牛奶中青霉素類藥物殘留量

◎董雪玲（北京東方縱橫產品檢測有限公司（有機實驗室），北京 101102）

高效液相色譜-串聯質譜法測定牛奶中青霉素類藥物殘留量

◎董雪玲
（北京東方縱橫產品檢測有限公司（有機實驗室），北京 101102）

為測定牛奶中青霉素類藥物殘留量，將牛奶樣品采用乙腈沉淀蛋白，通過正己烷液萃取除脂，經高效液相色譜C18柱分離，選用乙腈+0.1%甲酸-水為流動相進行梯度洗脫，采用高效液相色譜-串聯質譜法在正離子多反應監測模式下測定。結果表明，采用高效液相色譜-串聯質譜法測定牛奶中青霉素類藥物殘留量在國家規定的限量范圍內，該方法可以簡便、快速、準確地測定牛奶中青霉素類藥物殘留量。

牛奶；青霉素；高效液相色譜-串聯質譜法

目前，測定牛奶中青霉素類藥物殘留的分析方法主要有微生物法、高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯質譜法[1，2]。其中，高效液相色譜-串聯質譜法具有較高的準確性、高特異性，同時不受化學基質的影響，并且應用簡便快速。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑

Agilent 6460三重四級桿液相色譜串聯質譜儀（安捷倫公司）；甲醇、乙睛和正己烷均為色譜純；標準品：萘夫西林（純度≥94.0%）、青霉素G（純度≥97.2%）、哌拉西林（純度≥98.2%）、青霉素V（純度≥97.9%）、苯唑西林（純度≥95.9%）、阿莫西林（純度≥99.5%）、氨芐西林（純度≥98.8%）、氯唑西林（純度≥98.9%）和雙氯西林（純度≥97.5 %)，Sigma公司產品。

1.2方法

1.2.1樣品處理

牛奶樣品處理方法參照GB/T 20755-2006方法。

1.2.2色譜條件

色譜條件參照GB/T 20755-2006方法。

1.2.3青霉素類標準系列溶液

分別量取1 μ g/mL青霉素類混合標準儲備5、10、20、40、80 μ L和100 μ L到1 mL容量瓶中，用乙腈溶液定容。得到濃度為5、10、20、40、80 ng/mL 和100 ng/mL的青霉素類系列標準工作液[3]。以含量為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制工作曲線。

2　結果

2.19種青霉素類藥物標準曲線及線性相關系數

按照1.2.3進行配制，并按照1.2.2色譜條件進行分析，9種青霉素類藥物在5～100 μ g/L時具有良好的線性關系，相關系數（r）為0.999 2～0.999 8。其中：

2.2牛奶中青霉素的含量

依據1.2.1樣品處理過程對樣品進行處理，經0.22 μ m濾膜過濾，上機測試。本批次測定的牛奶樣品得到的結果為萘夫西林、青霉素G、哌拉西林、青霉素V、苯唑西林、阿莫西林、氨芐西林、氯唑西林和雙氯西林均沒有檢測到。牛奶中這些指標的含量均符合國標限定的含量。

3　結論

青霉素類抗生素屬于β-內酞胺類抗生素，是一類重要的抗菌藥物，在獸醫臨床上廣泛應用。此類藥物不規范的使用會導致青霉素殘留在牛奶中，如果長期飲用會使青霉素在人體內不斷積累從而造成人體生理功能紊亂。許多國家對青霉素殘留牛奶都進行了嚴格管制。采用高效液相色譜-串聯質譜法可以測定牛奶中青霉素類藥物殘留量，本批次的牛奶中的青霉素含量均在國家規定的范圍內，對人體不會造成傷害。

[1]王惠嬌，黃方取，周鴻艷，等.高效液相色譜一串聯質譜法測定牛奶中8種青霉素類藥物[J].中國衛生檢驗雜志，2015，25（17）：2881-2883.

[2]趙維，杜鋼，李向榮.高效液相色譜一串聯質譜法測定牛奶中9種青霉素類藥物的殘留量[J].浙江大學學報，2012，41（2）：171-176.

[3]肖惠貞，劉紅河，甄珍，等.高效液相色譜一串聯質譜法測定乳制品中7種青霉素類抗生素殘留[J].中國衛生檢驗雜志，2014，24（11）：1546-1552.

Penicillin Drugs Residues in Milk with High Performance Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry Determination

Dong Xueling
（Beijing Oriental and Product Testing Co. LTD.，Beijing 101102，China）

For the determination of penicillin drugs residues in milk，the milk samples were determinated by using protein precipitation by n-hexane extraction liquid grease，by using high performance liquid chromatography C18 column，using acetonitrile +0.1% formic acid and water as mobile phase in gradient elution，using high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry in positive ion multiple reaction monitoring mode. The results showed that HPLC-MS/MS determinating the penicillin drugs residues in milk was in the limited within the scope stipulated by the state，the method was simple，rapid and accurate for determination of penicillin drugs residues in milk.

Milk； Penicillin； HPLC-MS/MS

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.04.030

TS252.7；O657.63