畜間布魯氏菌病的血清學檢測方法

白 翠，馬曉媛，王 楠，曹東陽，胡澤宇，李海燕，鄭 聰，刁鵬翔

1.吉林省動物疫病預防控制中心，吉林長春 130062；2.吉林省通化市二道江區畜牧獸醫總站，吉林通化 134000；3.吉林省吉林市龍潭區江北鄉畜牧獸醫站，吉林吉林市 132000；4.吉林省吉林市昌邑區兩家子鄉畜牧獸醫站，吉林吉林市 132000

布魯氏菌病（簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬娜诵蠊不嫉膫魅?、變態反應性疾病。病原體可以通過體表皮膚黏膜、呼吸道、消化道進入機體。人感染布病主要是與職業、飲食和生活習慣有關。

由于布魯氏菌感染一周后可出現特異性血清抗體，因此，國內外均用血清學試驗檢測該病。方法主要有虎紅平板凝集、試管凝集試驗、膠體金免疫層析試驗和酶聯免疫吸附試驗。

1 虎紅平板凝集試驗

虎紅平板凝集試驗操作簡單，價格便宜，但有時會產生假陽性和假陰性，適合大量樣品的初篩。

1.1 材料準備

1.1.1 虎紅平板凝集抗原、標準的陽性和陰性血清，按說明書使用。

1.1.2 被檢血清應新鮮，無明顯蛋白凝塊，無溶血和無腐敗氣味。

1.1.3 潔凈的玻璃板，其上劃分成4 cm2的方格。

1.2 操作方法

1.2.1 試驗前，將血清和抗原在室溫恢復30 min。

1.2.2 在玻璃板上加入25 μL 的被檢血清。

1.2.3 被檢血清旁加入等量的抗原。

1.2.4 用牙簽類小棒混合均勻，在4 min 內觀察結果。

1.3 結果判定

1.3.1 在陰陽對照成立的條件下，試驗成立。

1.3.2 被檢血清在4 min 內出現肉眼可見凝集現象，為陽性（+）， 無凝集現象，呈均勻粉紅為陰性（-）。

2 試管凝集試驗

操作時間比虎紅凝集試驗長，比較繁瑣，但特異性較好，實用性也比較強，多用于復核。

2.1 操作過程

2.1.1 血清的稀釋

牛、馬、駱駝一般從1:50 開始，稀釋4 個滴度；豬、狗和羊從1:25 開始稀釋，同樣是4 個稀釋度。

2.1.2 抗原

將稀釋好的抗原(按照抗原說明書稀釋)加入到稀釋好的血清管中，混勻，豬、羊或狗的血清稀釋則依次變為1:25,1:50,1:100,1:200，牛、 馬和駱駝的血清稀釋度則依次變為1:50,1:100,1:200,1:400。

2.1.3 設置陰性、陽性對照。實驗還要設置比濁管。

2.1.4 置37 ℃溫箱24 h，取出檢查并記錄結果。

2.2 結果判定

牛、馬、鹿和駱駝出現“++”以上凝集現象時，受檢血清判定為陽性。豬、山羊、綿羊、狗出現“++”以上凝集現象時，受檢血清判定為可疑反應；可疑反應家畜進行復檢。

3 膠體金免疫層析試驗

3.1 操作方法

用一次性滴管，緩慢吸取樣品滴加1 滴于試劑圓孔中。然后滴加1 滴樣品稀釋液。

2 min 后肉眼觀察結果。

3.2 結果判定

對照線（C線）處出現紅線時試驗成立，檢測線（T線）處出現紅線時即為陽性，否則為陰性。

4 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗有間接ELISA 抗體檢測試驗和競爭性ELISA 抗體檢測試驗。有試驗證明，競爭性ELISA 比間接性ELISA 的敏感性稍高一些，本文主要介紹競爭性ELISA（c ELISA）方法。c ELISA檢測敏感性和特異性好，用機器判定結果，避免了人為觀察的干擾和誤差，相比較其他方法結果更準確；但該試劑盒昂貴，檢測成本高，不適用于基層大規模樣品的檢測，目前多適用于實驗室大量的血清學檢測以及珍貴動物的布病確診。

c ELISA 是將布魯氏桿菌抗原連接到ELISA 板上，樣品中待檢抗體和酶標抗體競爭性地與抗原結合，形成抗原抗體復合物。復合物中的酶標抗體與顯色液發生反應，用分光光度計或酶標儀定量測定加樣后的顯色程度，顯色程度越低，待檢抗體的含量越高。具體的操作步驟詳見試劑盒說明書。