羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染及診斷方法研究現(xiàn)狀

薄震宇，劉欣超，周金星，靳二輝，李文超，胡忠澤，顧有方*

(1. 動物營養(yǎng)調(diào)控與健康安徽省重點實驗室，安徽 鳳陽 233100；2. 安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100)

目前，羊在養(yǎng)殖業(yè)中占較大的比重，其飼養(yǎng)模式已從傳統(tǒng)的農(nóng)戶散養(yǎng)發(fā)展到大規(guī)模集約化飼養(yǎng)，這有利于統(tǒng)一管理，改善養(yǎng)殖場周圍的生態(tài)環(huán)境，能有效提高生態(tài)資源的利用率[1-2]。羊胃腸道線蟲病是危害羊健康的主要動物寄生蟲病，是不斷影響?zhàn)B羊業(yè)持續(xù)下降之一，大量感染導(dǎo)致羔羊死亡，對全球養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生巨大威脅[3-5]。

養(yǎng)殖戶大量使用驅(qū)蟲藥以減少羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染。然而，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲對常用的驅(qū)蟲藥具有耐藥性。所以，研發(fā)出預(yù)防捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染藥物迫在眉睫[6]。此外，肉、奶和其他產(chǎn)品中的驅(qū)蟲藥殘留影響人體健康，并引起公眾極大關(guān)注[7]。本文對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染情況及診斷方法作一簡要綜述。

1 羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染現(xiàn)狀

1.1 總體感染

Raza等[8]和 Singh等[9]分別報道巴基斯坦旁遮普南部和印度馬圖拉地區(qū)山羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染率為 31.10%和 53.34%。黃占欣等[10]研究中發(fā)現(xiàn)羊胃腸道中存在大量的蠕蟲，其中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染率達到了36.4%，并確定了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲為邯鄲地區(qū)羊胃腸道蠕蟲中的優(yōu)勢蟲種，與許開云等[11]報道的結(jié)果相一致。陳亮等[12]使用飽和鹽水漂浮法對蘭州地區(qū)進行羊寄生蟲感染研究調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染為50%。林琳等[13]對山羊采取完全剖檢法進行調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染率為65.61%，福建省各地均有發(fā)生。萬繼成[14]對新蔡縣的初步研究中共調(diào)查了360份糞便樣品，其中感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲共有302份，感染率為83.89%，高于魏彩艷等[15]對榆林市的調(diào)查結(jié)果。可能因為榆林市在2003年的時候就已經(jīng)開始禁止對羊進行放牧散養(yǎng)，而且也在養(yǎng)殖規(guī)模中設(shè)置了不少的限制。

1.2 不同地區(qū)羊的感染

在我國，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲廣泛分布，不同省份之間的感染率各不相同[16]。張玉仙等[17]對北京地區(qū)(平谷、房山、通州、順義、大興)5個不同區(qū)縣的不同規(guī)模的羊養(yǎng)殖場進行了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該蟲的感染具有顯著的地區(qū)差異性，其中通州的感染率竟然高達100%，且與通州養(yǎng)殖戶的放牧?xí)r間以及放牧的形式有關(guān)。通州主要是早晚放牧，而且是散養(yǎng)，而平谷、房山和順義羊場集約化程度高，防治措施相對完善。

1.3 不同飼養(yǎng)模式羊的感染

黃占欣等[10]研究發(fā)現(xiàn)集約化飼養(yǎng)的羊群(11.7%)遠遠比放牧散養(yǎng)的羊群(90.5%)蠕蟲的感染率低。其中放牧散養(yǎng)中羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率為66.1%，而集約化飼養(yǎng)的羊群胃腸道捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率只有5%。關(guān)于集約化和放牧之間的差異極顯著，與王永利[18]在北京地區(qū)進行的相關(guān)的調(diào)查研究的結(jié)果是一致的。說明集約化飼養(yǎng)更有利于羊群的身體健康，降低捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染，提高機體的生產(chǎn)性能。萬繼成[14]在調(diào)查河南新蔡縣山羊寄生蟲感染情況發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲為優(yōu)勢蟲種，克井鎮(zhèn)、大浴鎮(zhèn)、坡頭鎮(zhèn)和王屋鎮(zhèn)的4個不同地區(qū)的4個規(guī)模化養(yǎng)殖場分的感染率分別為71.11%、91.11%、73.33%和62.22%，而4個放牧散養(yǎng)戶的感染率分別為82.22%、97.78%、93.33%和100%，新蔡縣地區(qū)放牧散養(yǎng)戶捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的平均感染率(93.33%)明顯高于規(guī)模化養(yǎng)殖戶(74.44%)，其中王屋鎮(zhèn)的散養(yǎng)戶感染率竟然達到了100%。

1.4 不同品種羊的感染

研究表明，一些綿羊品種對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲具有天然抵抗力[19]。由于感染引起免疫應(yīng)答的相對能力不同，不同品種之間的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲易感性差異更大，阿薩姆邦山羊的最低感染率可能是由于土著動物有更強的抗病能力[20]。González等[21]比較了加納利群島上2個綿羊品種對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的易感性，綿羊試驗感染了20 000個幼蟲，感染后第7天和28天剖檢動物，對未成熟的蠕蟲計數(shù)中沒有發(fā)現(xiàn)綿羊品種之間的差異。但是，與綿羊品種相比，絨毛綿羊的平均糞便卵數(shù)比其他品種綿羊的低，子宮內(nèi)卵數(shù)和雌蟲發(fā)育不良的數(shù)量也較低。表明絨毛綿羊品種對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染有更強的抵抗力，而且這種抵抗力可能在成蟲水平上起作用。魏彩艷等[15]對榆林市榆陽區(qū)4個不同羊品種進行了寄生蠕蟲的初步調(diào)查，結(jié)果表明不同羊品種的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染率和感染強度各不相同，其中陜北絨山羊的感染率為57.5%，小尾寒羊感染率為37.5%；當(dāng)?shù)厣窖蚝屯练N綿羊感染率分別為37.5%和27.5%。土種山羊和綿羊?qū)υ撓x的感染率普遍低于其他地區(qū)引進來的山羊和綿羊，可能是因為當(dāng)?shù)匮驅(qū)Ρ就恋哪磙D(zhuǎn)血矛線蟲感染具有一定適應(yīng)性，習(xí)慣了本地的飼養(yǎng)模式與環(huán)境，而引進來的羊?qū)Ρ镜厮敛环瑢?dǎo)致身體機能下降，抗病能力降低，感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的程度較高。

1.5 不同季節(jié)羊的感染

岳建偉等[22]研究發(fā)現(xiàn)臨河地區(qū)舍飼羔羊消化道線蟲排卵的季節(jié)動態(tài)，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲全年呈現(xiàn)1個高峰期，為9月份、 6月份出生的夏羔，在9月齡前并沒有觀察到捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染，而3月份生的春羔在翌年的9月份首次檢出捻轉(zhuǎn)血矛線蟲，由此推斷，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的感染時間為6到10月份，夏季感染較為嚴(yán)重。Durani 等[23]也報道了7到8月份捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的最高感染率，水分的存在有利于幼蟲的發(fā)育，這與早期觀察到感染情況相似。秦建華等[24]報告河北省壩上高原地區(qū)綿羊主要胃腸道線蟲的季節(jié)性發(fā)病情況。結(jié)果表明，年內(nèi)有2個高峰期(3至6月份；9至次年1月份)感染，并且捻轉(zhuǎn)血矛線蟲有明顯的春季上升現(xiàn)象。宋銘忻等[25]報道中國黑龍江省松花江地區(qū)綿羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲的卵產(chǎn)量和蠕蟲感染的季節(jié)性發(fā)生率，發(fā)現(xiàn)年內(nèi)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲成蟲的卵產(chǎn)量和蠕蟲感染達到2個高峰，從 4 月下旬到 5 月下旬，卵的產(chǎn)量和蠕蟲感染增加，并在 5 月下旬達到峰值，然后立即下降，直到 7 月下旬，在8 月初達到第2個高峰再次下降，然后一直保持較低水平，直到明年4月份。7月份最熱，松花江地區(qū)冬季寒冷多雨，夏季炎熱多雨，平均氣溫在 20～25 ℃，而1月最冷，平均溫度低于-20 ℃，且年降水量約500 mm。顯然，夏季的溫暖天氣將促進這兩個地區(qū)的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的發(fā)展，而冬季的寒冷天氣會抑制其發(fā)展，從而導(dǎo)致季節(jié)動態(tài)。

羅拉體等[26]對涼山州高寒山區(qū)和二半山區(qū)進行調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲是羊的優(yōu)勢蟲種，危害最大，感染率分別為24%和45%。而且在高寒山區(qū)和二半山區(qū)的羊感染最高峰都是在當(dāng)?shù)貧鉁乇容^高的5月份和9月份，二半山區(qū)的氣溫普遍高于高寒山區(qū)，致使前者的感染率也高于后者。周才瑛等[27]對瀏陽黑山羊進行捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染調(diào)查，發(fā)現(xiàn)不同季度的感染情況不同，春、夏、秋、冬四季分別感染39.1%、46.7%、81.3%、53.3%。感染呈上升趨勢。說明氣溫是影響寄生蟲感染的主要因素。

2 診斷方法

到目前為止，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染的臨床診斷取決于臨床體征和體外培養(yǎng)幼蟲的鑒定。死后診斷是調(diào)查過程中最常用的方法。此外，近年來也采用了基于蟲體核酸的分子診斷方法。

2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

根據(jù)形態(tài)學(xué)鑒定血矛線蟲卵。對比進行幼蟲體外培養(yǎng)和L3幼蟲的鑒定是一種較好的方法[28]。體外培養(yǎng)是通過收集的新鮮糞便中加入適量的鋸末或蛭石進行直接培養(yǎng)，然后利用貝爾曼氏收集并鑒定。該方法存在檢測靈敏度較低的缺點，尤其是在樣本中蟲體數(shù)量較少時，檢測效果更差。

2.2 血清學(xué)檢測

替代診斷包括ELISA在內(nèi)的血清學(xué)技術(shù)，在短時間內(nèi)更具準(zhǔn)確性和更有診斷能力[29]。主要是基于不同抗原(如體細胞和排泄分泌(ES)抗原)的免疫分析，已經(jīng)被應(yīng)用來檢測特定抗體，主要缺點是共享抗原組成而產(chǎn)生交叉反應(yīng)[30-31]。ESPs由于具有良好的敏感性和特異性而被廣泛用作抗原診斷，發(fā)揮重要的免疫作用。肌球蛋白(TpMy)也可檢測山羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲早期(感染后14 d)感染；潛在的早期免疫診斷抗原，以肌球蛋白為基礎(chǔ)的間接ELISA對山羊感染捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的診斷具有較高的敏感性和特異性，這也是一種血清學(xué)診斷方法，比常規(guī)顯微鏡檢查更靈敏可靠[32]。免疫印跡在靶蛋白的選擇中也起著初步的作用，免疫印跡法和優(yōu)化酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測山羊早期感染過程中的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲[33]。一些發(fā)現(xiàn)證明，與常規(guī)顯微鏡檢查相比，基于rHc-TpMy的血清診斷是更準(zhǔn)確的檢測捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染的工具。據(jù)報道，ELISA和免疫印跡分析是檢測山羊感染捻轉(zhuǎn)血毛線蟲的潛在診斷工具[34]，Naqvi等[35]以重組肝細胞癌相關(guān)抗原59為基礎(chǔ)，聯(lián)合間接ELISA和免疫印跡建立了診斷羊捻轉(zhuǎn)血矛線蟲感染方法。

2.3 PCR檢測

PCR具有靈敏度高、特異性強、適用于低感染率動物的檢測等突出優(yōu)點，比顯微鏡和血清學(xué)更快速和準(zhǔn)確。Elmahalawy等[36]開發(fā)了用于檢測反芻動物中的毛圓線蟲感染的PCR方法。該檢測由4個基因特異性的引物/探針組成，能夠在多重感染的情況下對目標(biāo)DNA進行敏感和特異的擴增。在過去的10年里，已開發(fā)出多種基于PCR(基于hmcp 3和 hmcp 6半胱氨酸蛋白酶基因、ITS1序列、Hcher-1基因等)的檢測方法作為輔助診斷。

3 展望

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病傳播危害極大，要對其危害有充分的認(rèn)識。目前，各地羊胃腸道線蟲感染依然嚴(yán)重，無論是急性還是慢性，都對飼養(yǎng)戶帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟損失，為了減少養(yǎng)殖戶的損失，需要加強捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的宣傳和學(xué)習(xí)，讓養(yǎng)殖者具備基礎(chǔ)診斷和治療能力。除此尚需開展更多相關(guān)研究工作，以實施更具成本效益的控制策略。諸如為了盡早發(fā)現(xiàn)耐藥性的緊急情況并監(jiān)測其發(fā)展以減少耐藥性的不利影響，應(yīng)評估更高效、更準(zhǔn)確的現(xiàn)場檢測耐藥性方法的效果，在全國范圍內(nèi)調(diào)查耐藥性的嚴(yán)重程度；開發(fā)出更靈敏、更具體的方法，以便在現(xiàn)場使用和檢測混合感染。進一步開展與該寄生蟲的生物學(xué)及其與宿主相互作用有關(guān)的基礎(chǔ)研究，以建立更有用的診斷方法，開發(fā)有效的藥物和治療方法。

捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病防控單靠藥物治療是遠遠不夠的，為了加快我國羊養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，必須加大捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的防控力度，加強飼養(yǎng)管理，通過補充蛋白質(zhì)、微量元素、維生素等方法提高羊的免疫力。