牛病毒性腹瀉病診斷技術研究進展

周登鵬

甘肅省靈臺縣星火鄉畜牧開發服務站,甘肅靈臺 744411

近年來，隨著中國畜牧業的持續發展，中國牛病毒性腹瀉的流行正在增加,嚴重阻礙了中國畜牧業的健康發展，造成了巨大的經濟損失，同時這種病廣泛分布在鹿的養殖場，牛病毒性腹瀉病毒是鹿難治性腹瀉的主要病原體。

1 BVDV的傳播和現狀

1.1 BVDV的傳播

分離和判斷BVDV的方法有很多，一般來說，BVDV是由牛內腔、血液、腎臟淋巴結以及腸間膜淋巴結的分泌來傳達的，分離是由胎兒牛腎臟細胞和小牛精巢細胞的接種決定的。

1.2 BVDV的現狀

自從發現牛病毒性腹瀉黏膜病以來，在世界上廣泛傳播。基因型多，病原性復雜，它可以產生永久性的感染癥和免疫耐受。近年來，國內外很多研究人員都關注著牛病毒性腹瀉性黏膜病病毒，尤其是主要防御抗原E0和E2的分子結構和蛋白質功能，為轉換診斷技術和開發新疫苗打下了堅實的基礎。

2 血清學診斷

2.1 中和試驗

這個經常被研究所的研究人員使用，這可以用來診斷牛的病毒性腹瀉和黏膜疾病。1～3周內采集兩次血液樣品，稀釋血清。如果第二個渦輪增壓器是最初的兩倍大小，則可以認為是被懷疑的疾病，可以確定是4倍以上的陽性。但是，這種方法的診斷是有限的。如果檢測出的感染牛是陰性的話，牛就可以免疫耐受。因此，為了準確有效地診斷牛的病毒性腹瀉，需要結合其他有用的方法。

2.2 免疫瓊脂擴散法

這種方法簡單實用，實驗室人員操作簡單，通常潰瘍或炎癥組織的黏膜與BVDV陽性血清直接反應來檢測抗原。標準陽性抗原可以用來檢測疾病動物的血清，但其靈敏度低于中和測試。檢測BVDV抗體并與微中和測試進行比較。外國學者也得出了同樣的結論，在檢測牛病毒性腹瀉病免疫瓊脂擴散法不能替代中和試驗方法。

2.3 蛋白A膠體金免疫電鏡法

它可用于直接鑒定病原體或細胞，調查病毒顆粒的形狀。但其特異性和敏感性較低，易被病毒樣顆粒攪擾。很難調查病毒顆粒本身。

2.4 免疫過氧化物酶法

這是正確可靠的診斷牛病毒性腹瀉的方法，這種方法廣泛用于抗體檢測。感染細胞通過單層培養濃縮，BVDV感染細胞無色，可以通過使用結合二磷酸抗生物質蛋白質二氧基激酶檢測系統的單克隆抗體來改善檢測的特異性和準確性。

2.5 免疫熒光技術

這是一種通過將免疫組織的特異性和感受性與顯微鏡技術相結合，能夠檢測病毒粒子，快速檢測感染病理組織的細胞培養的新技術。

2.6 酶聯免疫吸附實驗 (ELISA方法)

良好的檢測方法可以檢測BVDV的抗體水平，基于抗原抗體特異性耦合的原理，ELISA具有高靈敏度，強特異性和高檢測精度的優點。

3 BVDV的分子生物學檢測技術

3.1 核酸擴增技術

由于在牛病毒性腹瀉的診斷中應用了分子生物學的檢測技術，核酸放大在臨床檢查中被廣泛使用。牛的病毒性腹瀉的診斷主要方法是體外循環(LAMP)等溫擴增、一步RT-PLR、雙RT-PLR、嵌套RT-PLR、實時熒光定量RT-PLR下的等溫放大。這些技術識別了不同的BVDV基因類型，并在分子水平上檢測BVDV。

3.2 核酸探針雜交

與傳統方法相比，核酸雜交具有高靈敏度和特異性。初始主要使用放射性同位素探針，輻射障礙和穩定性低。之后，開發了生物標記DNA探針。雖然探針沒有放射性損傷，但是其特異性與放射性同位素不同。