淺析紫外分光光度法快速測定食品中維生素C

陳建鋒

佛山市食品藥品檢驗檢測中心 廣東佛山 528051

維生素C又名抗壞血酸，在食品工業(yè)中應(yīng)用廣泛，常常被用作食品添加劑加入到食品中。

1 試劑

試驗過程中所使用的試劑有維生素C(標(biāo)準(zhǔn)品)、鄰二氮菲、硫酸鐵銨、冰乙酸、三水合乙酸鈉、氫氧化鈉、上述試劑由德國DR、廣州化學(xué)試劑廠企業(yè)生產(chǎn)。在具體試驗過程中，要對溫度進(jìn)行控制，一般情況下是在室溫條件下完成[1]。

2 儀器與設(shè)備

在試驗過程中所使用到的儀器設(shè)備有TU-1901雙光束紫外分光光度計、高速離心機(jī)。

3 試驗方法

3.1 緩沖溶液的配制

稱取13.6g三水合乙酸鈉溶于50mL蒸餾水，注入6mL乙酸攪拌均勻，用1%濃度的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)緩沖溶液PH值到4.75。

3.2 鄰二氮菲的配制

稱取4mg鄰二氮菲，加入l000μL緩沖液，充分溶解。

3.3 硫酸鐵銨的配制

稱取24mg硫酸鐵銨，加入l000μL緩沖液，充分溶解。

3.4 維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取2.5mg維生素C（標(biāo)準(zhǔn)品），加入緩沖溶液定容至1000μL。

4 樣品中維生素C的測定

將樣品研磨均勻后，稱取一定質(zhì)量移入離心管，加入緩沖液體積至1.5mL，充分混勻樣品呈漿狀，隨后用高速離心機(jī)進(jìn)行離心處理，吸取50μL的上清液到比色皿中，依次加入鄰二氮菲150μL、硫酸鐵銨150μL、緩沖溶液2150μL充分混合1分鐘。然后測量其在510nm處的吸光值，并與維生素C標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線進(jìn)行比較分析，計算樣品中維生素C含量。

5 參數(shù)確定與優(yōu)化

5.1 最大吸收波長的確定

在具體試驗過程中，維生素C會與顯色劑有一定的結(jié)合，此時需要對相應(yīng)的光譜特點進(jìn)行分析。對于游離的顯色劑以及維生素C設(shè)計，進(jìn)行相應(yīng)的光譜掃描，圖1為相應(yīng)的掃描結(jié)果。從圖中可以得出，有利于顯色劑溶液在200-900nm之間不存在明顯的吸收峰，可以從曲線1中看出。游離顯色劑在引入維生素的條件下，能夠與維生素C發(fā)生快速的顯色反應(yīng)，從圖中的曲線2可以看出，在波長510nm的位置，光譜曲線有明顯的吸收峰，此時具體的峰值為2.285，該處可以判定為是生成物的特征吸收峰。

5.2 反應(yīng)時間的確定

測量的波長點確定之后，分別移取50μL維生素C標(biāo)準(zhǔn)液、100μL鄰二氮菲、100μL硫酸鐵銨、2150μL緩沖液到比色皿中，充分的混合，在紫外可見分光光度計上進(jìn)行時間掃描，具體的掃描結(jié)果為圖2。由曲線可以看出，結(jié)合反應(yīng)的速度非常快，維生素C與顯色劑再結(jié)合一分鐘之后，吸光值就趨于穩(wěn)定狀態(tài)，由此可以判定反應(yīng)的時間為一分鐘。

5.3 鄰二氮菲用量的優(yōu)化

圖1 光譜掃描曲線

圖2 反應(yīng)的時間掃描曲線

在對鄰二氮菲的用量進(jìn)行優(yōu)化時，維生素C溶液以及硫酸鐵銨溶液的濃度分別為2.5mg/mL、2.4mg/mL，容積分別為50μL、150μL，然后選取4.0mg/mL鄰二氮菲溶液，把這些溶液分為不同的溶劑放到比色皿中，然后反應(yīng)一分鐘的時間，隨后進(jìn)行相應(yīng)的光譜掃描，圖3為具體的掃描結(jié)果，從結(jié)果可以看出，在吸收波長為510nm時，鄰二氮菲的引入量如果增加，那么吸光值也會隨之增大，峰值最大處鄰二氮菲的引入量為150μL，如果引入量繼續(xù)增大，那么峰值會出現(xiàn)下降的現(xiàn)象[2]。

圖3 光譜掃描曲線

5.4 硫酸鐵銨用量的優(yōu)化

在對硫酸鐵銨的用量進(jìn)行優(yōu)化時，維生素C溶液以及鄰二氮菲溶液的濃度分別為2.5mg/mL、4.0mg/mL，容積分別為50μL、150μL，此時所選取的硫酸鐵銨的濃度為4.0mg／mL，把硫酸鐵銨分為容積不同的樣品，把它們放到比色皿中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)一分鐘之后進(jìn)行相應(yīng)的光譜掃描，圖4為具體的掃描結(jié)果。從曲線結(jié)果可以得出，在波長為510nm處，硫酸鐵銨的引入量與吸光值成正比，當(dāng)引入量為150μL時，峰值達(dá)到上限，此時的體系不具有穩(wěn)定性，因此該結(jié)合反應(yīng)需要一定的時間。

圖4 光譜掃描曲線

6 結(jié)語

該文章主要針對維生素C的相關(guān)顯色反應(yīng)進(jìn)行了分析和研究，最終發(fā)現(xiàn)維生素C的質(zhì)量濃度與相應(yīng)的吸光值有一定的關(guān)系，在此基礎(chǔ)之上，應(yīng)用了相應(yīng)的紫外分光光度法分析技術(shù)，由此可以實現(xiàn)維生素C含量的快速測定。