生防菌芽孢桿菌可濕性粉劑的研制及其對油菜菌核病和黑脛病防效評價

孫力，胥劍雯，李慶會,翟永升，楊龍，張靜，吳明德，李國慶

1.湖北省作物病害監測和安全控制重點實驗室/華中農業大學植物科學技術學院，武漢430070； 2.湖北省赤壁市植物保護站，赤壁 437300

油菜是我國重要的油料作物之一，每年種植面積約為700萬hm2，油菜籽產量約為1 300萬t[1]。在油菜生長過程中常常遭到多種病害侵襲，如菌核病(Sclerotiniastem rot)、黑脛病(blackleg)、霜霉病(downy mildew)和根腫病(clubroot)等，造成油菜籽減產，品質下降。菌核病由核盤菌(Sclerotiniasclerotiorum)引起，在我國各油菜產區普遍發生，常年造成油菜籽產量損失達到10%～30%[2]。目前，沒有發現高抗菌核病的油菜品種，因此，防治菌核病主要依靠栽培防治(水旱輪作)和化學防治。近年來，菌核病生物防治取得了長足進展。例如，源于我國本土的生防菌盾殼霉(Coniothriumminitans)已被正式登記為防治作物菌核病的生物農藥(登記證號：PD20190019)。此外，一些枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)菌株對油菜菌核病也有明顯的防治效果[3-5]。

油菜黑脛病(blackleg)也稱為莖點霉莖潰瘍病(Phomastem canker)，由真菌復合種Leptosphaeriamaculans和Leptosphaeriabiglobosa引起[6]。這種病害曾先后在澳大利亞、加拿大、德國、法國和英國等地暴發流行，對油菜產業造成過毀滅性打擊[7]。我國2000年正式報道油菜黑脛病[8]，病原是L.maculans中的B型，該類型后來被確定為L.biglobosa。普查結果顯示：油菜黑脛病在我國各油菜產區普遍發生，在部分地區，油菜黑脛病病株率達到90%以上，病原均為L.biglobosa[9-11]。與健康植株油菜籽產量相比，發病植株油菜籽產量下降10%～50%[12-13]。但是，迄今沒有專門針對L.biglobosa開展防控技術研究，主要原因是：在歐美、英國、加拿大和澳大利亞等油菜產區，同時存在L.maculans和L.biglobosa，但以L.maculans危害較重，因而防治重點放在L.maculans上。然而，在我國油菜產區尚未發現L.maculans，而L.biglobosa危害造成的油菜籽產量損失不可忽視[12-13]。因此，有必要借鑒國外防控L.maculans的經驗，例如Danielsson等[14]利用淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)有效抑制L.maculans、灰葡萄孢(Botrytiscinerea)以及蕓薹鏈格孢(Alternariabrassicae)等病原真菌侵染油菜組織；Abuamsha等[15]用普利茅斯沙雷菌(Serratiaplymuthica)和綠針假單胞菌(Pseudomonaschlororaphis)引發處理油菜種子，降低L.maculans侵染等來開展國內油菜L.biglobosa的防控技術研究。

筆者所在課題組從健康油菜植株中分離到貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)菌株CanL-30，發現該菌株對菌核病菌(S.sclerotiorum)、黑脛病菌(L.biglobosa)、灰霉病菌(Botrytiscinerea)和立枯病菌(Rhizoctoniasolani)等病原真菌均有拮抗作用，且在盆栽試驗中對油菜菌核病顯示出明顯的防治效果[16]。由于菌株CanL-30存在著開發利用的潛力。我們針對菌株CanL-30的規模化發酵、可濕性粉劑制備、可濕性粉劑防治油菜菌核病和黑脛病效果評估等方面開展了專門研究，以期為該菌株的開發利用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 供試菌株及培養基

供試菌株包括貝萊斯芽孢桿菌CanL-30、油菜菌核病菌菌株Ss-1和油菜黑脛病菌菌株W10。菌株CanL-30分離自健康油菜植株[16]，菌株Ss-1分離自油菜菌核病菌菌核[16]，菌株W10分離自油菜黑脛病發病植株[12]。

供試培養基包括以下4種：(1)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基(NA)：牛肉浸膏3 g、胰蛋白胨5 g、NaCl 10 g、蒸餾水1 000 mL，瓊脂粉15 g，pH 7，用于培養菌株CanL-30(作為發酵菌種)；(2)小型罐(10 L)發酵培養基：牛肉浸膏3 g/L、大豆蛋白胨5 g/L、葡萄糖20 g/L，pH 7；(3)大型罐(1 t和10 t)發酵培養基：魚蛋白胨0.8%、酵母粉0.8%、米粉1.5%、小麥粉3%、硫酸鎂0.35%、輕質碳酸鈣0.3%、工業鹽0.25%，pH 7，用于發酵菌株CanL-30；(4)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(potato dextrose agar,PDA):去皮馬鈴薯薯塊200 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL，自然pH值，用于培養油菜菌核病菌和油菜黑脛病菌以及測定CanL-30可濕性粉劑的抗真菌活性。

1.2 菌株CanL-30菌體及芽孢形成動態觀察

將CanL-30菌體懸液接種在10 L發酵罐中，在30 ℃條件下培養。在2～12 h時間段，每隔2 h取1次樣，在12～96 h時間段，每隔12 h取1次樣。用分光光度計測定每份樣品在600 nm處的吸光值(OD600)。同時，將菌液涂布在載玻片上，滴加飽和孔雀藍(7.6%)染色10 min，用無菌水輕輕沖洗至不再褪色為止，用番紅(0.5%)復染1 min，無菌水沖洗后晾干，在光學顯微鏡下觀察CanL-30菌體和芽孢形態，隨機挑選10個視野，統計芽孢(游離芽孢及芽孢囊中的芽孢)所占比例(芽孢形成率)。

在大型發酵罐中接種CanL-30菌體懸浮液，1 t罐發酵的發酵條件是：罐壓0.05 MPa，溫度(30±1) ℃，攪拌裝置常開，無菌空氣流量是：18 m3/h(0～6 h)，30 m3/h(6～10 h)，40 m3/h(10～30 h)，18 m3/h(30 h～放罐)。10 t罐發酵的罐壓和發酵溫度與1 t罐發酵相同，攪拌裝置也保持常開，無菌空氣流量是：180 m3/h(0～6 h)，250 m3/h(6 ～10 h)，360～400 m3/h(10 ～30 h)，180 m3/h(30 h～放罐)。發酵6、12、16、20、24、28和35 h后取發酵液樣品，涂片，染色，觀察芽孢產生動態，在NA培養基上涂布發酵液，測定發酵液中的細菌數量。發酵36 h后(芽孢形成率超過93%)，往發酵罐中添加適量冰醋酸，終止發酵。

1.3 可濕性粉劑制備

將菌株CanL-30發酵菌液離心，并在沉淀的菌漿中添加適量的保護劑，噴霧干燥，得到菌粉。噴霧干燥的條件是：進風溫度180 ℃，出風溫度65 ℃，空氣進泵速度約3 000 mL/h。在菌粉中添加硅藻土(6%,m/m)、木質素磺酸鈉(4.8%,m/m)、糊精(0.1%,m/m)和羥甲基纖維素鈉(2%,m/m)，用霧化粉碎機將混合物加工成顆粒大小為25 μm左右的粉劑。按《GB/T 19136—2003》中的方法測定粉劑熱貯穩定性；按《GB/T 14825—2006》中的方法測定粉劑的懸浮率；按《GB/T 5451—2001》中的方法測定粉劑的潤濕性。同時，將粉劑在室溫下儲存1 a，測定其中的活菌數量，根據菌落形態判斷是否屬于芽孢桿菌。

1.4 可濕性粉劑抗真菌活性測定

1)CanL-30可濕性粉劑對核盤菌菌絲生長和菌核產生的抑制作用。采用帶毒平板法進行測定。用無菌蒸餾水將CanL-30可濕性粉劑稀釋10倍，離心，將上清液吸出，分成2份，1份上清液樣品用細菌過濾器過濾除菌(濾膜孔徑0.22 μm)，另1份上清液樣品在濕熱滅菌鍋中滅菌(121 ℃，25 min)。將2種處理上清液分別添加至PDA培養基中，按粉劑質量折算上清液添加量，將粉劑分別稀釋至100、300、500、1 000、5 000、10 000、50 000、100 000和1 000 000倍，制成平板(直徑6 cm)，以不加粉劑上清液的PDA平板為對照。將核盤菌菌絲塊(直徑5 mm)接種至各平板中央。在20 ℃下培養36 h，測量各平板核盤菌菌落直徑，將各上清液處理菌落直徑與對照處理菌落直徑進行比較，計算抑菌率。再培養15 d，統計各平板產生的菌核數量。

2) CanL-30可濕性粉劑對油菜黑脛病菌W10分生孢子萌發的抑制作用。采用牛津杯擴散法測定。在PDA平板上接種菌株W10，在20 ℃培養15 d，用無菌蒸餾水洗下菌落表面的分生孢子，得到孢子懸浮液(1×108個孢子/mL)。然后，將孢子懸浮液按1∶7體積比添加至PDA培養基中，制成帶菌平板，將滅菌牛津杯(孔徑6 mm)置于平板表面。同時，取CanL-30粉劑10 g，溶于100 mL無菌水中，充分混合，靜置30 min，離心(5 000 r/min)10 min，取200 μL上清液，添加至牛津杯中。此外，試驗設陰性對照和陽性對照。在陰性對照中，取200 μL無菌水，添加至牛津杯中；在陽性對照中，將CanL-30發酵液(48 h)離心，取200 μL上清液，添加至牛津杯中。上述各處理重復6次，并將各處理平板置于20 ℃下培養3 d，觀察牛津杯周圍是否有透明圈產生(指示抗菌作用)。

1.5 可濕性粉劑防病效果評估

1)油菜菌核病和黑脛病的室內防效試驗。在防治油菜菌核病的室內試驗中，將油菜花瓣(病菌易感染器官)置于離體油菜葉片上，將核盤菌子囊孢子懸浮液(4 × 105個孢子/mL)滴加在花瓣上，每個花瓣接種100 μL菌懸液，再將花瓣放在油菜葉片上，每個葉片上放置2個花瓣。試驗分以下4種處理，每種處理6片葉：(1)對照處理，記為Ss，油菜花瓣上僅含有核盤菌子囊孢子；(2)CanL-30發酵液原液(CF)+ 核盤菌，記為CF + Ss。在接種核盤菌子囊孢子的花瓣上滴加CanL-30發酵液原液，每個花瓣100 μL；(3)CanL-30發酵液1 000倍稀釋液+核盤菌，記為 CF1000 + Ss。在接種核盤菌子囊孢子的花瓣上滴加CanL-30發酵液1 000倍稀釋液，每個花瓣100 μL；(4)CanL-30可濕性粉劑100倍稀釋液 + 核盤菌，記為Powder 100 + Ss，在接種核盤菌子囊孢子的花瓣上滴加CanL-30可濕性粉劑100倍稀釋液，每個花瓣100 μL。將所有處理的油菜葉片置于保濕箱中(20 ℃)，培養7 d后測定花瓣周圍病斑直徑。

2)油菜黑脛病室內防效試驗。將CanL-30可濕性粉劑稀釋100倍的稀釋液噴霧至油菜葉片上，以CanL-30發酵液原液(發酵72 h)和水噴霧分別作為陽性對照和陰性對照。待葉片干燥之后，將油菜黑脛病菌W10菌絲塊(直徑為5 mm)接種至油菜葉片上。最后，將3種處理的油菜植株置于保濕箱中(20 ℃)培養，7 d后測定病斑直徑。

3)田間防效試驗。分別在湖北省天門市和赤壁市兩地進行。在每個試驗點選擇長勢旺盛的油菜田，劃分9個小區，小區面積約為50 m2，設3種處理，每處理設3次重復：(1)自來水對照；(2)殺菌劑咪鮮胺，劑型為咪鮮胺水乳劑，有效成分質量濃度為450 g/L，河南廣農農藥廠產品，田間噴霧藥液中有效成分質量濃度為562.5 μg/mL；(3)CanL-30可濕性粉劑，用量為100 g/667 m2。用手動噴霧器將水、咪鮮胺藥液和CanL-30可濕性粉劑稀釋液分別噴霧至各小區油菜植株上，分2次噴霧，第1次噴霧時間為2019年1月22日，油菜處于抽薹期。第2次噴霧時間是2019年3月1日，油菜處于中花期。在油菜成熟期，采用五點取樣的方法調查各處理小區菌核病和黑脛病的發病情況。天門市試驗點的調查時間是2019年4月30日，赤壁試驗點調查時間是2019年5月6日。油菜菌核病的分級標準為0級(健康)至4級(主莖稈枯死或2/3分枝發病)[2]，油菜黑脛病的分級標準為1級(健康)至6級(莖稈自潰瘍處折斷)[17]，根據調查結果計算發病株率和病情指數。同時，在每個小區隨機取3個1 m2面積的油菜植株，帶回實驗室，測定油菜籽產量，折算成畝產量(kg/667 m2)。

1.6 數據統計分析

用SAS軟件(SAS Institute,Cary,NC,USA,v. 8.0,1999)中的方差分析程序(analysis of variance,ANOVA)分析各試驗中不同處理各指標數據之間的顯著性。對于百分率數據(如發病株率)，在ANOVA分析之前，通過反正弦轉換，將百分率變成角度值，分析完成之后，再將平均值轉換成百分率。采用最小顯著差異法檢驗(the least significant difference test,LSD)分析各試驗不同處理之間的差異顯著性(α=0.05)。

2 結果與分析

2.1 菌株CanL-30菌體生長和芽孢發育動態

在10 L發酵罐中，貝萊斯芽孢桿菌CanL-30在牛肉汁蛋白胨培養液中發酵2～12 h(30 ℃)，菌體數量呈對數上升，24 h后菌體數量趨于穩定，48 h后芽孢形成率為74%，72 h后芽孢形成率達到100%(圖1)。在1 t發酵罐中發酵時，2～16 h為菌體對數生長期，24 h開始形成芽孢，32 h后菌體數量進入穩定期，36 h后芽孢形成率達到93%，終止發酵。最終發酵液中活菌濃度為1×1010cfu/mL，噴霧干燥得到7 kg菌粉，活菌含量為6×1011cfu/g。在10 t發酵罐中發酵時，40 h后芽孢形成率達到92%，終止發酵。發酵液中活菌濃度為3.3×109cfu/mL，噴霧干燥得到190 kg菌粉，活菌含量為2×1011cfu/g。

A：菌體增殖和芽孢形成動態；B：菌體和芽孢形態，菌體紫色或紅色，芽孢無色。A:Curves of bacterial growth and endospore formation rates by strain CanL-30; B:Morphology of the peacock blue/safranine O-stained bacterial cells and endospores,purple and red color for bacterial cells and the colorless part inside each bacterial cell for the endospore.圖1 菌株CanL-30在10 L發酵罐中菌體生長及芽孢發育動態Fig.1 Dynamics of growth and endospore development in strain CanL-30 of B. velezensis in a 10 L jar fermenter

2.2 菌株CanL-30可濕性粉劑制備及質量

將發酵得到的干菌粉與硅藻土(6%,m/m)、木質素磺酸鈉(4.8%,m/m)、糊精(0.1%,m/m)以及羥甲基纖維素鈉(2%,m/m)混合，用霧化粉碎機將混合物加工成顆粒大小為25 μm左右的粉劑，平均活菌含量為2.0×1011cfu/g，粉劑熱貯(54 ℃)穩定性為83.3%，懸浮率為98.2%，潤濕時間為105 s，達到了農藥可濕性粉劑的相關國家標準。將可濕性粉劑在室溫下(20±5 ℃)儲存1 a，活菌含量維持在1 000億cfu/g水平。

2.3 菌株CanL-30可濕性粉劑的抗菌活性

對油菜菌核病菌抑制抗性的測定結果顯示：過濾滅菌上清液稀釋100倍的抑菌率為100%，稀釋1 000倍的抑菌率為46%。高溫滅菌處理上清液稀釋100倍的抑菌率為100%，稀釋1 000倍的抑菌率為35%。進一步提高稀釋度，2種滅菌處理的上清液均喪失了抑菌效果。稀釋100～10 000倍的上清液完全抑制菌核形成，稀釋50 000～1 000 000倍上清液的菌核產量為7～10粒/皿，顯著(P<0.05)低于對照處理的菌核產量(13粒/皿)(圖2)。以上結果表明：無論是過濾滅菌還是高溫滅菌，CanL-30粉劑上清液對核盤菌菌核形成都有明顯的抑制作用。

圖2 菌株CanL-30可濕性粉劑對核盤菌抑菌率(A)和菌核形成(B)的抑制作用(顯著性水平:ɑ=0.05)Fig.2 Antifungal activity of the CanL-30 water wettable powder on inhibiotion rate(A) and sclerotial formation(B) by S. sclerotiorum(significant at ɑ = 0.05)

在抑制油菜黑脛病菌的試驗中，CanL-30粉劑提取物上清液和發酵物離心上清液均有抑菌圈產生(圖3)，說明CanL-30可濕性粉劑中含有抑制油菜黑脛病菌分生孢子萌發的抗菌物質。

圖3 菌株CanL-30可濕性粉劑對油菜黑脛病菌分生孢子萌發的抑制作用Fig.3 Inhibition of conidial germination of L. biglobosa by the antifungal substances in the water wettable powder of strain CanL-30 of B. velezensis

2.4 菌株CanL-30可濕性粉劑的防病效果

室內試驗和田間試驗結果均顯示：CanL-30可濕性粉劑對油菜菌核病和黑脛病具有明顯的防治效果。在室內防治油菜菌核病試驗中，對照處理(僅含核盤菌Ss)的花瓣造成的葉片病斑直徑為25.6 mm，CF 1000 + Ss處理(發酵液稀釋1 000倍+核盤菌)的花瓣造成的病斑平均直徑為15.3 mm，較對照處理下降40.2%；CF+Ss處理(發酵液原液+核盤菌)和Powder 100 + Ss(粉劑稀釋100倍+核盤菌)處理花瓣在葉片上沒有病斑產生(圖4)，可見，CanL-30可濕性粉劑對花瓣介導的核盤菌子囊孢子侵染油菜葉片具有明顯的抑制作用。

在室內防治油菜黑脛病試驗中，用油菜黑脛病菌接種不同處理的油菜葉片，在20 ℃下培養7 d，對照處理的葉片造成的病斑平均直徑達8.6 mm，而CanL-30發酵物原液處理和粉劑處理造成的病斑平均直徑分別為1.8 mm和1.0 mm(圖5)，較水處理病斑直徑分別降低79.1%和88.4%。可見，CanL-30可濕性粉劑可有效抑制油菜黑脛病菌的侵染。

室內試驗；水=核盤菌；發酵液1 000=發酵液1 000倍稀釋液+核盤菌；發酵液原液=未稀釋發酵液+核盤菌；粉劑100=粉劑稀釋100倍+核盤菌；顯著性水平：ɑ=0.05。Indoor trial. Water=S. sclerotiorum alone; CF 1000= Cultural filtrate diluted by 1 000 times+S. sclerotiorum; CF=Undiluted cultural filtrate+S. sclerotiorum; Powder 100=Powder diluted by 100 times+S. sclerotiorum. Significant at ɑ= 0.05.圖4 菌株CanL-30可濕性粉劑防治油菜菌核病效果Fig.4 Efficacy of the water wettable powder of CanL-30 on suppression of flower-mediated infection by S. sclerotiorum on oilseed rape leaves

圖5 菌株CanL-30可濕性粉劑防治油菜黑脛病效果(室內試驗，顯著性水平:ɑ= 0.05)Fig.5 Efficacy of the water wettable powder of CanL-30 in suppression of infection by L. biglobosa on leaves of oilseed rape (Indoor trial,significant at ɑ= 0.05)

在田間噴施CanL-30粉劑和咪鮮胺的小區，油菜菌核病和油菜黑脛病發病率及病情指數均顯著(P< 0.05)低于處對照處理(圖6，圖7)。在天門市試驗點，咪鮮胺對油菜菌核病和黑脛病的防效(與對照相比病情指數下降的百分率)分別為51%和40%，CanL-30可濕性粉劑對油菜菌核病和黑脛病的防效分別為58%和51%。在赤壁市試驗點，咪鮮胺對油菜黑脛病和菌核病的防效分別為17%和30%，CanL-30可濕性粉劑對油菜菌核病和黑脛病的防效分別為52%和33%。測產結果顯示：與對照相比，CanL-30可濕性粉劑在天門市試驗點和赤壁市試驗點油菜籽產量分別提高14%和12%。

A,B:油菜菌核病； C,D:油菜黑脛病； 顯著性水平：ɑ=0.05。A and B:Sclerotinia stem rot; C and D:Blackleg; Significant at ɑ=0.05.圖6 菌株CanL-30可濕性粉劑防治油菜黑脛病和菌核病田間小區試驗效果(湖北省天門市試驗點)Fig.6 Efficacy of the water wettable powder of CanL-30 on suppression of Sclerotinia stem rot and blackleg of oilseed rape in the field trial in Tianmen City of Hubei Province

A,B:油菜菌核病； C,D:油菜黑脛病；顯著性水平，ɑ=0.05。A and B:Sclerotinia stem rot; C and D:Blackleg; Significant at ɑ=0.05.圖7 菌株CanL-30可濕性粉劑防治油菜黑脛病和菌核病田間小區試驗效果(湖北省赤壁市試驗點)Fig.7 Efficacy of the water wettable powder of CanL-30 in suppression of Sclerotinia stem rot and blackleg of oilseed rape in the field trial in Chibi City of Hubei Province

A和B分別代表湖北省天門市試驗點和赤壁市試驗點，顯著性水平：ɑ=0.05。A and B for Tianmen and Chibi trials,respectively,significant level at ɑ=0.05.圖8 使用菌株CanL-30可濕性粉劑對油菜籽產量的增產效應Fig.8 The seed yield-incresing effect on oilseed rape upon application of the waterwettable powder

3 討 論

貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)是2005年由Ruiz-Garcia等[18]、Borriss等[19]學者建立的一個芽孢桿菌屬新種，與解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)親緣關系較近。研究結果表明：貝萊斯芽孢桿菌是重要的植物病害生防菌資源[20]。這種細菌對多種植物病原真菌引起的病害具有防治效果，包括：番茄早疫病(Alternariasolani引起)、作物炭疽病(Colletotrichumspp.引起)、作物灰霉病(Botrytiscinerea引起)、小麥全蝕病(Gaeumannomycesgraminisvar.triciti引起)和小麥根腐病(Bipolarissorokiniana引起)、番茄黃萎病(Verticilliumdahliae引起)、稻瘟病(Magnaportheoryzae引起)[16,21-24]。本研究結果表明：貝萊斯芽孢桿菌菌株CanL-30對油菜菌核病和黑脛病具有明顯的防治效果。這一結果拓寬了貝萊斯芽孢桿菌的防病譜。此外，本研究建立了中等規模(1 t和10 t)的發酵工藝，制備了可濕性粉劑，為菌株CanL-30作為生物農藥登記奠定了基礎。

從前人的研究結果可以看出：貝萊斯芽孢桿菌的防病機制在于產生脂肽類抗菌物質，促進植物生長以及誘導抗病性[25-28]。就產生抗菌物質而言，菌株CanL-30能夠產生廣譜性抗真菌物質，對油菜菌核病菌、黑脛病菌、灰霉病菌和立枯絲核菌等病原真菌有抑制作用[16]。在本研究中，我們發現：菌株CanL-30可濕性粉劑中含有抑制油菜菌核病菌菌絲生長及菌核產生的抗菌物質，該物質還可以抑制油菜黑脛病菌分生孢子萌發。可濕性粉劑中的抗菌物質是從CanL-30發酵物中濃縮出來的，對粉劑防病效果有一定作用。目前，我們還不清楚CanL-30粉劑中的抗真菌物質種類，今后將進一步開展相關研究，一旦明確了抗真菌物質種類及其防病作用，可望將其作為CanL-30可濕性粉劑的產品質量標準。

就促進植物生長而言，菌株CanL-30產生的揮發性有機物能夠顯著促進擬南芥生長[16]。本研究發現：在油菜蕾薹期和花期使用CanL-30可濕性粉劑噴霧可以提高油菜籽產量。對油菜籽增產效應可能源于兩個方面的機制：一是抑制菌核病和黑脛病發病率及病害嚴重度；二是菌株CanL-30產生的促進油菜生長的物質。我們測定了菌株CanL-30產生的揮發性有機物成分(未發表資料)，但還沒有對這些成分進行逐一篩選，這也是下一步需要完成的研究工作。

菌株CanL-30通過產生揮發性有機物促進擬南芥生長[16]，說明它對擬南芥的生長發育有調控作用。可以推定：菌株CanL-30在調控擬南芥生長的過程中，可能影響擬南芥的抗病性，但目前還不明確菌株CanL-30是否具有誘導油菜抗病性的能力。這需要作進一步驗證。