胃泌素- 17 的性能指標檢測及評價

范華

（上海復星長征醫學科學有限公司，上海200444）

1 材料與方法

1.1 儀器

運濤Lumiart-II-3 全自動化學發光測定儀（合肥運濤光電科技有限公司）。

1.2 試劑

長沙中生眾捷生物技術有限公司的胃泌素17 檢測試劑盒（化學發光法）（批號：2020110112-2）及配套的校準品（批號：2020110112-2）和質控品（批號：2020110112-2），試劑、校準品和質控品均在有效期內使用，符合廠家說明書和技術要求的指標。

1.3 評價方法

1.3.1 精密度評價。按照CLSI EP5-A3[1]指南文件制訂方案：6 個濃度水平，3 個儀器系統，5 天實驗，每天測定1 批，每批每個水平重復測定5 次，計算重復性、實驗室內精密度和再現性。

1.3.2 準確度評價。采用回收試驗[2]進行評價：選擇人源性樣品（濃度為1.21pmol/L）為基礎樣本；取900μL 基礎樣本和100μL 濃度為12.30pmol/L 的標準溶液作為回收樣品1；取900μL 基礎樣本和100μL 濃度為48.00pmol/L 的標準溶液作為回收樣品2；取900μL 基礎樣本和100μL 濃度為200.00pmol/L 的標準溶液作為回收樣品3。基礎樣品、每份回收樣品重復測定3 次，取平均值，計算回收率，在85～115 范圍內回收率符合要求。

1.3.3 分析靈敏度評價

1.3.3.1 檢出限（LOD）。參考CLSI EP17-A2[3]指南文件制訂方案：2 個空白樣品、2 個檢測出限樣品、1 個儀器系統，3 天實驗，每天測定1 批，每批每個樣品重復測定5 次。在設定兩類錯誤水平條件：α=0.05，β=0.05 時的最低檢出限。

1.3.3.2 定量限（LOQ）。參考CLSI EP17-A2 指南文件制訂方案：選擇G-17 低水平樣品1 份（3.5pmol/L），用校準品S0（0pmol/L）按1:2、1:4、1:8、1:16、1:32 和1:64 進行倍比稀釋，作為6 個定量限濃度樣品、3 天實驗，每天測定1 批，每批每個樣品重復測定3 次，分別計算原倍樣品和6 個定量限濃度樣品的濃度平均值，標準差和CV，以濃度平均值和CV 建立數學模型，取CV 為10%（廠家聲明的精密度要求）時對應樣品的濃度值作為定量限。

1.3.4 線性范圍驗證。參考CLSI EP6-A2[4]指南文件制訂方案：用低濃度和高濃度線性樣品各1 份，按照等比例關系稀釋成11 個系列濃度樣本。每個樣本重復測定3 次，記錄結果。以三次測量的平均值為實測值和計算的預期值進行多項式回歸分析，將所得數據擬合為一階、二階和三階多項式，評估所檢測的濃度范圍是否為線性。

1.3.5 參考區間驗證。參考CLSI EP28-A3c[5]指南文件制訂方案：測定20 份表觀健康人樣本，驗證試劑盒給定的參考區間的適用性。若20 份樣本檢測結果在參考區間的人數≥18 份，則驗證通過，否則需要重新驗證或確認。

1.3.6 統計學方法。采用SPSS 22.0、Analyse-it 和Minitab 17.0 軟件進行數據統計分析，P＜0.05 為差異具有顯著性的意義。

2 結果

2.1 精密度評價結果

低、中、高水平樣品分別標記為P1、P2、P5，同時3 個實驗點檢測的低、中、高水平的質控品分別標記為Q3、Q4、Q6；P1、P2、Q3、Q4、P5、Q6 樣本測定的精密度結果見表1。G-17 濃度在1～50pmol/L 范圍內，該檢測方法的重復性、實驗室內精密度和再現性均符合廠家要求＜10%。

表1 實驗室的精密度評價結果

2.2 準確度評價結果

見表2，根據相關公式計算回收率，添加三個水平的回收率分別為98.4%、103.8%、96.4%，均在85.0%～115.0%范圍內，符合該儀器的性能要求。

表2 回收試驗結果

2.3 分析靈敏度評價結果

2.3.1 檢出限（LOD）

G-17 空白樣本測試數據不符合正態分布，需按照非參數法評估空白限（LOB），低濃度樣本符合正態分布，采用參數法評估檢出限（LOD）。由表3 結果和圖1 可得知LOB 為0.04pmol/L，LOD 為0.07pmol/L，符合聲明的檢出限≤0.50pmol/L 的要求。

表3 空白限（LOB）和檢出限（LOD）

2.3.2 定量限（LOQ）

根據要求CV 具有或最接近10%所對應濃度值即為G17 的定量限，根據表4 結果和圖2 模型可計算在CV 最接近10%的時候G-17 的預期濃度值為0.26pmol/L，即LOQ 為0.26pmol/L，符合聲明的定量限≤1.00pmol/L 的要求。

2.4 線性范圍驗證結果

圖1 空白限（LOB）和檢出限（LOD）分布圖

表4 定量限（LOQ）

11 個系列濃度水平G-17 樣品測定均值分別為0.03、6.52、10.74、14.50、18.50、23.89、28.40、35.97、42.08、44.37 和49.94pmol/L，計算SDr=0.398，CVr=1.2%, 小于設定的允許集合誤差目標2%。以線性樣本的稀釋度作為X，實測濃度均值作為Y，對數據組進行多項回歸分析和線性檢驗，得到一階方程Y=0.9966X+0.06276；二階方程中的b2的P 值為0.0668；三階方程中b2、b3的P 值分別為0.153 和0.260。結果顯示二階和三階多項式中的回歸系數與0 進行比較，均無顯著性差異（p＞0.05），故該數據組具有線性，為一階線性方程。

2.5 參考區間驗證結果

20 名表觀健康者G-17 檢測結果均在試劑盒聲明的參考區間內（1-7pmol/L），通過驗證。

3 討論

胃泌素包括胃泌素源、甘氨酸、延伸型的胃泌素和酰胺化胃泌素多種類型。胃泌素17（Gastrin17，G-17）是屬于胃泌素中分泌的激素類型一致，一種重要的胃腸激素，它主要由G 細胞分泌的胃腸激素。G 細胞是典型的開放型細胞，以胃竇部最多，其次是胃底、十二指腸和空腸等處。人胰島的D 細胞亦能分泌胃泌素。它能夠調節消化系統的功能，維持消化道黏膜的結構完整，有重要的作用。目前人體有95%以上有生物活性的胃泌素就是α 酰胺化胃泌素[6]，主要含有兩種G17 和G34，而G17 占有80%到90%。如果胃泌素17 偏高，可能影響胃的消化吸收功能，而導致出現胃腸道的疾病，比如胃炎，胃潰瘍等。因此G-17是反映胃黏膜損傷情況的重要指標。以胃泌素17 作為核心指標的人體血清胃功能檢測項目可以有效地減少胃癌患病風險，大幅度地提高胃癌疾病的早診以及早治概率，對于各種胃病的預防和治療都具有重要的積極意義。血清G-17 檢測可以反映胃竇部黏膜萎縮情況[7]。血清G-17 水平取決于胃內酸度及胃竇部G 細胞數量。因此，高胃酸以及胃竇部萎縮患者的空腹血清G-17 濃度較低。與血清PG 檢測相結合，血清G-17 濃度檢測可以診斷胃竇（G-17 水平降低）或僅局限于胃體（G-17 水平升高）的萎縮性胃炎。當人體內胃泌素17 處于低值狀態時，通常提示患者的胃部存在一些高酸的狀況。而當胃泌素17 處于高值狀態時，則提示患者的胃內部存在一些炎癥，患者可能表現出一些高胃泌素血癥的發病癥狀。這種情況可能跟幽門螺旋桿菌感染、胃潰瘍以及藥物影響有關系。另外，胃泌素17 的變化與患者的胃部受到飲食刺激以及患上其他疾病也有一定的聯系。

圖2 精密度曲線圖

4 結論

本研究結果顯示化學發光磁微粒免疫法檢測G-17 的精密度、準確度、分析靈敏度、線性范圍和參考區間等各項性能指標均符合要求。精密度是反映檢測系統整體性能的基本指標，本實驗參考了CLSI EP5-A3 文件，用不同濃度的G-17 樣本和質控品對重復性、實驗室內精密度和再現性等3 種精密度進行評價，G-17 重復性分別為2.1%、2.0%、3.6%、2.8%、1.8%和2.5%，實驗室內精密度分別為5.0%、2.5%、3.8%、2.8%、2.0%和3.4%，再現性分別為5.5%、4.0%、5.4%、3.0%、2.9%和4.2%，其CV 結果均小于廠家的聲明結果，符合要求。檢測系統的準確度評價是均勻樣本的一系列測量結果中系統測量誤差的性能特征，一般可采用分析參考物質、方法學比對和回收試驗，本研究采用低、中、高三個水平的回收率（98.4%、103.8%和96.4%）和平均回收率（99.5%），均在廠家可接受范圍內，符合要求。分析靈敏度是評價檢測系統的一個重要性能指標，能很大程度上體現檢測系統的檢測能力，包括空白限（LOB）、檢出限（LOD）和定量限（LOQ）；尤其G-17 在低濃度水平有重要臨床意義，其檢測方法的下限尤為重要，檢出限和定量限是評估檢測方法下限的指標，空白限是建立和驗證檢出限時的必要條件。本研究的LOB為0.04pmol/L，LOD 為0.07pmol/L，LOQ 為0.26pmol/L，均符合廠家的聲明要求，表明G-17 在該檢測系統具有很好的檢測方法下限。線性范圍是性能評價的關鍵指標，CLSI EP6-A2 文件表明要求線性區間的建立需要對線性試驗進行多項回歸分析，并進行線性檢驗。本研究表明磁微粒化學發光法檢測G-17 在線性范圍0.03～49.94pmol/L，通過線性檢測，最適方程為一階直線方程。本研究根據CLSI EP28-A3c 文件，進行了G-17 的參考區間驗證，其參考區間在1～7pmol/L 的驗證通過，符合廠家聲明。總之，在運濤Lumiart-Ⅱ-3 發光測定儀檢測G-17，對其主要性能指標進行評價，驗證結果符合廠家聲明，具有良好的性能，符合臨床質量要求。