取材前處理在改善黏液樣碎組織制片中的應(yīng)用

李敏敏，方雪松，陳晶晶，王月娥，鐘 文

隨著陰道鏡下子宮頸管搔刮術(shù)、消化內(nèi)鏡、穿刺針吸等醫(yī)療技術(shù)在臨床工作中的廣泛應(yīng)用，黏液樣碎組織及針尖樣細小組織的數(shù)量不斷增加[1]，這些松散碎小的組織在常規(guī)取材后進行固定、脫水、透明、浸蠟等一系列脫水處理過程，常出現(xiàn)組織丟失[2]，無法包埋的現(xiàn)象，直接影響后期切片及病理診斷。本實驗通過在取材前對標本進行預(yù)處理來探討對黏液樣碎組織制片的影響因素。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1標本 黏液樣碎組織標本68例，主要來源于中國科學技術(shù)大學附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科陰道鏡下子宮頸管搔刮術(shù)(ECC)、消化內(nèi)鏡、支氣管鏡、肺穿刺等活檢標本及網(wǎng)膜囊腫、中耳炎性肉芽腫等手術(shù)組織。

1.1.2儀器 離心機(AXTG16G)，組織包埋機(Thermo Histostar)，切片機(Leica RM2235)，VERTANA HE600全自動染色封片一體機。

1.1.3試劑及耗材 固定液(10%中性緩沖福爾馬林)，伊紅，無水乙醇，二甲苯，石蠟。

1.2 方法

1.2.1預(yù)處理 將收集到的黏液樣組織標本轉(zhuǎn)管至10 mL離心管中，配平離心機后，4 000 r/min離心10 min，升5降9；棄上清，將離心軟管剪斷，底物用吸管完全取出，將組織置于包埋紙上滴加伊紅，靜置5 min；將滴染伊紅的組織團按照取材規(guī)范包好，置于固定液中固定。

1.2.2組織處理及制片 將預(yù)處理的組織經(jīng)脫水、透明和浸蠟后進行包埋、切片，切片厚4 μm，用全自動染色封片一體機進行HE染色。

2 結(jié)果

經(jīng)取材醫(yī)師判斷不能進行常規(guī)取材的黏液樣碎組織微小標本，經(jīng)高速離心、伊紅滴染前期預(yù)處理(圖1)，在包埋時能較清晰的看到組織，易于包埋，且經(jīng)過伊紅滴染的組織更易于分辨，后期切片中也能極大減少誤修的概率，以確保極小組織精準切片(圖2)。經(jīng)過處理的活檢標本多數(shù)鏡下能觀察到腺上皮細胞、炎性細胞、黏膜上皮細胞等(圖3)。

①②③圖1 預(yù)處理后黏液樣組織圖2 切片染色后大體觀圖3 切片染色后鏡下觀

3 討論

目前臨床醫(yī)師在內(nèi)鏡下取出的微小組織標本通常采用濾紙作為載體以減少顆粒樣微小組織的缺失，但黏液樣組織含水量高，極易吸附在濾紙上，更不利于取材，婦科ECC操作時使用不沾墊作為載體可以進一步提高臨床取材成功率[3]，但對于如何提高送檢到病理科的內(nèi)鏡、纖支鏡等黏液樣碎小標本的組織處理方法仍不明確。

病理科的微小組織標本主要通過浸染伊紅提高組織的分辨率以利于切片[4]，以及部分采用瓊脂預(yù)包埋的方法進行干預(yù)[5]。雖然這些方法在一定程度上可以防止樣本丟失，但瓊脂預(yù)包埋因受其濃度影響不易把控[6]，在操作上帶來不便。本實驗主要針對ECC、支氣管鏡活檢的標本，組織黏液多且部分呈散在分布于固定液中，直接取材后進行脫水處理，黏液極易滲透到包埋紙外，導致出現(xiàn)組織缺失無法包埋，或組織貼附在包埋紙表面增加包埋難度，這些貼附的組織在刮取包埋的過程中也會造成進一步遺漏。

采用高速離心技術(shù)時以最快降速將組織進行充分沉淀，黏液碎組織形成聚集，這些成團的組織再滴加伊紅預(yù)染并交由取材醫(yī)師進行紙包，經(jīng)過離心成團的組織較為致密，在后續(xù)組織脫水、透明處理的過程中不易從包埋紙內(nèi)滲透，由于預(yù)先滴加伊紅在包埋時能清楚看到組織，可對技術(shù)員后期包埋及切片提供有利條件。