油紅O染色在甲醛固定的乳腺富于脂質(zhì)癌中的實踐應(yīng)用

姜貝貝，劉曉紅，曹瑞雪，于國麗，李培峰

在臨床病理診斷中，常規(guī)HE切片中常可見到胞質(zhì)透亮或胞質(zhì)內(nèi)有許多大小不等的圓形空泡，此現(xiàn)象是水泡樣變、黏液樣物質(zhì)、脂肪或脂質(zhì)組織，還是溶解了的糖原，往往不易區(qū)分，這就要依賴于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等來鑒別。黏液染色和糖原染色可用石蠟包埋后切片染色即可，而脂肪染色不能用常規(guī)石蠟包埋組織切片。日常病理診斷工作中，很多標(biāo)本可能未行冷凍或者在冷凍時未考慮脂肪染色的問題，但在常規(guī)HE染色切片觀察時卻要考慮或驗證其脂質(zhì)或脂肪成分。為彌補新鮮冷凍時未行脂肪染色，本文收集1例已明確診斷為乳腺富于脂質(zhì)癌的剩余標(biāo)本，用甲醛固定后的標(biāo)本來制作冷凍切片進(jìn)行油紅O脂肪染色，并記錄甲醛固定30天內(nèi)的標(biāo)本中脂肪染色情況。

1 材料與方法

1.1 材料收集解放軍第九六〇醫(yī)院經(jīng)10%磷酸鹽緩沖中性福爾馬林固定的乳腺富于脂質(zhì)癌1例，分成4小塊，每塊大小1.5 cm×1.5 cm×0.8 cm。另收集20例經(jīng)10%磷酸鹽緩沖中性福爾馬林固定的帶有正常脂肪的組織作為對照，每例取1小塊，每塊大小1.5 cm×1.5 cm×0.8 cm。

1.2 試劑與配方油紅O染色試劑為本科室自行配制。油紅O貯備液：將油紅O粉劑0.5 g和100 mL 50%乙醇傾入三角燒瓶中，輕輕晃動使其充分溶解，過濾后保存至小口砂塞瓶內(nèi)，密封備用。油紅O工作液：油紅O貯備液36 mL，加蒸餾水24 mL，充分混合后靜置10 min即可使用。

1.3 方法分別將固定7、15、21、30天的乳腺富于脂質(zhì)癌組織和另20例對照組組織，按照同一實驗條件進(jìn)行油紅O染色：(1)固定腫塊流水沖洗2 h[1]，濾紙吸干水分放入冷凍切片機中制作冷凍切片，6 μm厚切片，貼于載玻片上，并貼上新鮮脂肪組織作為陽性對照；(2)將切片于50%乙醇中稍洗；(3)油紅O工作液浸染(加蓋)10～15 min；(4)用50%乙醇稍洗，再用蒸餾水稍洗；(5)用蘇木精淺染細(xì)胞核，流水洗5 min，再用蒸餾水稍洗；(6)用濾紙或干凈紗布把組織周圍水分抹干，甘油明膠封片。需注意：(1)油紅O工作液只能當(dāng)天使用，不能保存；(2)不能用中性樹膠封片。

2 結(jié)果

本實驗中作為陽性對照的新鮮脂肪組織油紅O染色顯示，圓形或卵圓形片塊狀橙紅色著色；固定7、15、21、30天的乳腺富于脂質(zhì)癌標(biāo)本中，瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均顯示小圓滴狀橙紅色著色。固定30天的20例富含正常脂肪的組織中，脂肪部分均顯示圓形或卵圓形片塊狀橙紅色著色。

乳腺富于脂質(zhì)癌HE染色可見胞質(zhì)透亮，細(xì)胞呈巢團狀排列(圖1A)。油紅O染色顯示：固定7天后的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)見橙紅色小脂滴(圖1B)；固定30天后的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)見橙紅色小脂滴(圖1C)；襯染腫瘤細(xì)胞核均呈藍(lán)色。固定30天的正常脂肪組織中脂肪部分顯示圓形或卵圓形片塊狀橙紅色著色(圖2)。

①A①B①C②

3 討論

在常規(guī)HE染色切片中經(jīng)常可見胞質(zhì)透亮或胞質(zhì)內(nèi)有許多大小不等的圓形空泡，這種空泡有時與水泡樣變、溶解了糖原或脂質(zhì)等不易區(qū)分，這最好用脂肪染色、糖原染色聯(lián)合應(yīng)用，互相驗證來鑒別。糖原染色用石蠟包埋切片染色即可，常采用PAS法[2]，此法可將黏多糖類物質(zhì)染成紫紅色。對于糖原染色陰性的病例需進(jìn)一步行脂肪染色證實空泡內(nèi)成分是否為脂質(zhì)。而油紅O脂肪染色[3]法不能用于常規(guī)石蠟制片后的染色，因為石蠟包埋組織處理過程中需用一些有機溶劑，脂類物質(zhì)易被脫水液和透明液中的高濃度乙醇和二甲苯等脂溶性試劑所溶解。本實驗驗證了甲醛固定后標(biāo)本中脂質(zhì)的殘留情況，實驗結(jié)果顯示，30天內(nèi)的中性甲醛固定標(biāo)本均可以染出脂質(zhì)，未影響胞質(zhì)內(nèi)成分的定性，可以準(zhǔn)確的為病理鑒別診斷提供技術(shù)支持。大部分病理科的取材剩余標(biāo)本保存30天，在遇到類似病例時，用中性甲醛固定的乳腺組織在30天內(nèi)均可以用此方法來彌補術(shù)中冷凍切片以明確診斷。