胰腺導管腺癌組織中人表皮生長因子受體2的表達及臨床意義

崔自強 竇劍 高慶軍 趙鑫 高峰 姜翀弋 曹經琳 王巍

1河北醫科大學第三醫院肝膽外科，石家莊 050051；2河北醫科大學第三醫院病理科，石家莊 050051；3復旦大學附屬華東醫院普外科，上海 200040；4復旦大學附屬腫瘤醫院胰腺外科，上海 200032

胰腺癌惡性程度高，預后極差，且發病率和死亡率均呈上升趨勢。人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)為表皮生長因子受體家族的二號成員，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白[1]。HER2是細胞生長、分化及存活的重要調節基因。有研究證明，HER2在乳腺癌等多種實體腫瘤中過表達，導致惡性腫瘤發生，且預示患者預后差[2]。但HER2在胰腺癌中的表達及其與患者預后的關系尚不明確。本研究檢測PDAC患者腫瘤組織HER2的表達，探討HER2的表達與胰腺癌發展及預后的關系。

材料與方法

一、胰腺組織標本

收集2001年1月至2012年12月間上海復旦大學附屬華東醫院病理科存檔的PDAC組織石蠟標本109例，其中男性67例，女性42例，年齡35～82(61.7±10.1)歲，中位年齡63歲。納入標準：(1)行胰腺癌根治性手術；(2)病理診斷為PDAC；(3)患者術前未行放化療；(4)腫瘤無遠處轉移；(5)癌腫未侵犯腹腔干或腸系膜上動脈；(6)無圍手術期死亡。另收集上海復旦大學附屬華東醫院病理科存檔的正常胰腺組織石蠟標本27例作為對照組。

患者出院后通過門診復查及電話隨訪了解其病情發展，94例獲得預后結局，隨訪截止日為2020年12月。患者的生存期定義為入組時間至死亡時間或隨訪終止時間。

二、胰腺癌組織HER2蛋白表達檢測

所有標本常規切片，厚度為4 μm，采用免疫組織化學Envision二步染色法檢測胰腺組織HER2蛋白表達，步驟嚴格按試劑盒說明書進行。兔抗人HER2抗體、GT1009系列抗體稀釋液和GTVisionⅢ抗鼠/兔通用型檢測試劑盒均購自DAKO公司。由兩名病理科醫師獨立閱片，參考Hercep Test評分判定標準[3]，根據細胞膜染色程度和陽性細胞占比進行評定。細胞膜染色陽性細胞占比<10%為陰性(-)；細胞膜呈淡黃色，占比≥10%為弱陽性(+)；細胞膜呈黃色，占比≥10%為陽性(++)；細胞膜呈棕黃色，占比≥10%為強陽性(+++)。陽性和強陽性定義為過表達。

三、統計學處理

結 果

一、PDAC組織與正常胰腺組織HER2蛋白表達

109例PDAC組織中32例(29.4%)HER2蛋白表達為-，39例(35.8%)+，28例(25.7%)++，10例(9.2%)+++，過表達率為34.9%(圖1)。27例正常胰腺組織中，HER2蛋白表達為-或+，無過表達者。PDAC組織HER2過表達率顯著高于正常胰腺組織，差異有統計學意義(χ2=13.063，P=0.000)。

注：PDAC為胰腺導管腺癌；HER2為人表皮生長因子受體2圖1 PDAC組織HER2蛋白陰性(1A)、弱陽性(1B)、陽性(1C)、強陽性(1D)表達(免疫組織化學 ×100)

二、HER2蛋白表達與PDAC臨床病理特征的相關性

HER2蛋白過表達與患者年齡顯著相關，≥65歲的PDAC患者顯著多于<65歲患者，而與患者性別、腫瘤部位、分化程度、T分期、N分期、神經侵犯和切緣陽性均無關(P值均>0.05，表1)。

三、HER2表達與PDAC患者術后生存期的相關性

單因素Cox比例風險分析顯示，手術切除標本切緣陽性及HER2表達與PDAC患者術后生存期相關，而與患者性別、年齡及腫瘤部位、分化程度、T分期、N分期、神經侵犯等均無關(表2)；多因素Cox比例風險分析顯示，手術切除標本切緣陽性、HER2表達是影響PDAC患者生存期的預后因素(表3)。Kaplan-Meier法生存分析顯示，HER2表達+++患者的術后中位生存期為128.43個月，HER2表達-、+、++的患者術后中位生存期為21.53個月，HER2表達+++組患者的生存期明顯長于HER2表達-～++組，差異有統計學意義(P=0.038，圖2)。

表1 HER2蛋白表達水平與胰腺導管腺癌患者臨床病理特征的關系[例(%)]

表2 94例胰腺導管腺癌患者術后生存期的單因素分析

表3 94例胰腺導管腺癌患者術后生存期的多因素分析

注：PDAC為胰腺導管腺癌；HER2為人表皮生長因子受體2圖2 PDAC患者HER2不同表達水平的術后生存曲線

討 論

HER2基因最早由Shih等[4]提出，定位于人17號染色體長臂上，分子質量約為185 000，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白[1]。在特定條件下，過度表達的HER2可形成二聚體并發生自身磷酸化，進而激活Ras蛋白，通過TPK-Ras-MAPK途徑，導致基因轉錄或關閉，最終調節細胞生長、增殖和分化[2]。因此，HER2在很多實體腫瘤的發生和發展過程中扮演著重要的角色。曲妥珠單抗通過抑制乳腺癌中HER2二聚體的形成，從而發揮抑制腫瘤生長的作用[5]。HER2的規范化檢測為乳腺癌的治療帶來了革命性的改變。鑒于胰腺癌的高度惡性和有限的臨床干預，且有關胰腺導管腺癌HER2表達及其與預后關系的國內外臨床研究較少，本研究檢測HER2蛋白在接受根治性切除術的PDAC患者標本中表達情況，并分析HER2表達與患者預后的關系。

本研究發現，109例PDAC的HER2蛋白過表達率為34.9%，而在27例正常胰腺組織中過表達率為0。PDAC組織中HER2過表達率顯著高于正常胰腺組織，提示HER2表達在PDAC的發展過程中可能起重要作用，HER2可作為胰腺正常組織和PDAC組織鑒別的標志物。

本研究結果顯示，HER2表達與年齡相關，其中≥65歲的PDAC患者HER2過表達率顯著高于<65歲患者(P=0.043)，此一發現為首次報道。Komoto等[6]對129例無遠處轉移、無腹腔播散的PDAC根治性切除腫瘤標本進行研究，認為HER2表達與T分期相關，但本研究的T分期與HER2表達未見明顯相關性。

國內外關于胰腺癌HER2表達與患者預后關系的研究較少，且兩者的關系存有爭議。Lei等[3]研究顯示，HER2蛋白過表達者占47.6%，HER2蛋白過表達胰腺癌患者生存期僅為(7.3±3.8)個月，而HER2蛋白不表達和正常表達患者生存期長達(19.1±11.7)個月，兩組差異有統計學意義，胰腺癌患者HER2蛋白過表達提示預后差。Koka等[7]對308例胰腺癌患者研究發現，僅48例HER2過表達，約占16%，HER2過表達者生存期為11個月，不過表達者生存期為7個月，結果與上述研究相反。Ata等[8]檢測30例胰腺癌組織HER2表達，并分析其與預后的關系，認為HER2過表達對胰腺癌患者預后無預測價值。本研究單因素生存分析顯示，HER2表達+ ++者術后中位生存時間為128.43個月，HER2表達為-、+、+ +患者術后中位生存時間為21.53個月，PDAC組織HER2表達+ ++患者術后生存時間明顯長于HER2表達-～+ +患者(P=0.038)。多因素COX比例風險分析也顯示HER2表達+ ++的PDAC患者術后生存時間較HER2表達-～+ +患者顯著延長，HER2表達是影響PDAC預后的獨立因素，提示HER2可考慮作為評價PDAC生物學行為及評估預后的指標。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突