酵母硒對(duì)豆粕替代魚(yú)粉的作用效果研究
——以大口黑鱸飼料為例

周紹紅, 方懷義, 尹艷鎮(zhèn), 楊正寬, 張艷秋

(1.廣西大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院， 廣西 南寧 530000； 2.北部灣大學(xué) 海洋學(xué)院， 廣西 欽州 535011；3.北部灣富硒產(chǎn)業(yè)研究院， 廣西 欽州 535011; 4.欽州市生物廢棄物資源富硒功能化利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣西 欽州 535011)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)，俗稱(chēng)加州鱸，隸屬于鱸形目，太陽(yáng)魚(yú)科，黑鱸屬，是典型肉食性淡水魚(yú)類(lèi)。大口黑鱸原產(chǎn)于美國(guó)加利福尼亞州，因其生長(zhǎng)速度快、抗病力強(qiáng)、耐活體運(yùn)輸、肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，現(xiàn)已成為我國(guó)淡水養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)[1-2]。豆粕是優(yōu)質(zhì)廉價(jià)的飼料原料，作為魚(yú)粉的替代品已廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)飼料中。然而，豆粕含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，硒含量低，會(huì)影響動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收[3-4]。酵母硒(Selenium yeast)是一種高品質(zhì)有機(jī)硒，其毒副作用小、生物利用率高[5-6]，能夠提高水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)性能和飼料轉(zhuǎn)化率[7]、提高機(jī)體抗氧化能力[8]和增強(qiáng)免疫力[9-10]。飼料中硒缺乏或過(guò)量都會(huì)抑制魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)[11-12]。本試驗(yàn)在大口黑鱸幼魚(yú)飼料中添加酵母硒，以《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第1224號(hào)》中飼料硒含量最高推薦劑量(0.5 mg/kg)的約10倍添加量(4.8 mg/kg)作為試驗(yàn)最高添加量，探究其在大口黑鱸幼魚(yú)飼料中的作用效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用大口黑鱸幼魚(yú)魚(yú)苗購(gòu)自佛山市三水白金水產(chǎn)種苗有限公司；酵母硒購(gòu)自安琪酵母股份有限公司，酵母硒中硒的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2 400 mg/kg；魚(yú)粉、菜粕、豆粕和血粉等飼料原料購(gòu)自廣西澳華農(nóng)牧科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

試驗(yàn)以飼料中魚(yú)粉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為32%作對(duì)照組，以飼料中魚(yú)粉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為16%，并分別添加0、100、200、400、600、800、1 000、2 000 mg/kg酵母硒作試驗(yàn)組，分別命名為C、Se0、Se0.24、Se0.48、Se0.96、Se1.44、Se1.92、Se2.4和Se4.8組。各組飼料中硒的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0、0、0.24、0.48、0.96、1.44、1.92、2.4、4.8 mg/kg，各組飼料等氮、等能。將原料粉碎、過(guò)40目篩，飼料加工配制參考文獻(xiàn)[13]的做法，飼料貯存在-20 ℃冰箱中備用。飼料配方及風(fēng)干后質(zhì)量見(jiàn)表1，營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表2。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料配方及風(fēng)干后質(zhì)量

表2 每100 g實(shí)驗(yàn)飼料的營(yíng)養(yǎng)組分

1.3 試驗(yàn)方法與飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在北部灣大學(xué)海洋學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖室進(jìn)行。共設(shè)置9個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組3個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，魚(yú)苗停喂1 d，挑選規(guī)格相近的健康魚(yú)苗并隨機(jī)分組，每組25尾魚(yú)，共計(jì)675尾，分別放入27個(gè)養(yǎng)殖桶內(nèi)，魚(yú)苗初始體質(zhì)量為(8.35±0.05)g，養(yǎng)殖桶為玻璃鋼材質(zhì)，容積為0.3 m3。

試驗(yàn)期間，每天的8:00和16:00飽食投喂，投喂量為各組魚(yú)體質(zhì)量的3%左右，每天根據(jù)天氣、水溫、魚(yú)苗的攝食情況和生長(zhǎng)情況適當(dāng)調(diào)整。每天記錄各實(shí)驗(yàn)組攝食量、水溫和魚(yú)體活動(dòng)的情況，發(fā)現(xiàn)死魚(yú)及時(shí)稱(chēng)重記錄。試驗(yàn)期間保持自然光照，養(yǎng)殖系統(tǒng)保持水溫在27.0～30.0 ℃、溶氧為6.0～6.5 mg/L、pH為7.5～8.0。養(yǎng)殖持續(xù)28 d。

1.4 樣品處理與測(cè)定方法

試驗(yàn)結(jié)束前，停止喂食24 h，將每個(gè)養(yǎng)殖桶的魚(yú)苗全部撈出，計(jì)數(shù)并稱(chēng)質(zhì)量。從各組隨機(jī)抽取3尾魚(yú)，測(cè)量其體重、體長(zhǎng)、內(nèi)臟團(tuán)質(zhì)量和肝臟質(zhì)量，另取5尾魚(yú)，稱(chēng)重后裝進(jìn)樣品袋密封，置于-20 ℃的冰箱中保存，用于后期測(cè)定全魚(yú)成分。全魚(yú)經(jīng)在高壓滅菌鍋125 ℃下蒸煮20 min后在烘箱中105 ℃下烘干，粉碎后過(guò)40目樣品篩，充分拌勻后裝進(jìn)樣品袋密封保存，分別測(cè)定全魚(yú)水分(AOAC法)、粗蛋白質(zhì)(凱氏定氮法)、粗脂肪(石油醚抽提法)和灰分(550 ℃灼燒法)。各組另取肝胰臟和背側(cè)肌肉冷凍干燥后保存，用于測(cè)定肝胰臟和肌肉中的硒含量，測(cè)定時(shí)稱(chēng)取均勻的樣品置于50 mL聚四氟乙烯消化管中，加入10 mL的優(yōu)級(jí)純濃硝酸，于微波消解儀(CEM-MARS-5 XPRESS)中180 ℃時(shí)消化30 min。冷卻后取出，移到50 mL比色管中，用20 mL的超純水分兩次洗滌消化管，合并溶液，用5%的優(yōu)級(jí)純硝酸定容至50 mL，于ICPMS(Agilent 7 900)中進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 計(jì)算方法與數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)樣品魚(yú)的增重(WG,g/fish)、成活率(SR,%)、攝食率(FI，%/day)、飼料轉(zhuǎn)化率(FCR，g/g)、特定生長(zhǎng)率(SGR，%/day)、肥滿(mǎn)度(CF，g/cm3)、肝體比(HSI，%)、臟體比(VSI，%)、飼料氮沉積率(NRE，%)、飼料氮廢物排放[TNW，g·N/(kg·fish·gain)]按如下公式計(jì)算：

m=Wt/Nt-W0/N0

(1)

SR=100×(Nt/N0)

(2)

FI=100×I/[(W0+Wt+Wd)/2×t]

(3)

FCR=I/(Wt-W0+Wd)

(4)

SGR=100×[ln(Wt/Nt)-ln(W0/N0)]/t

(5)

(6)

HSI=100×Wl/Ws

(7)

VSI=100×Wv/Ws

(8)

NRE=100×(Wt×CNt-W0×CN0+Wd×CN0)/(I×CNf)

(9)

TNW=1 000×(I×CNf)×(1-NRE/100/(Wt-W0+Wd)

(10)

式中，I為每個(gè)養(yǎng)殖桶投喂飼料的質(zhì)量(g)，W0和Wt分別為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)每個(gè)養(yǎng)殖桶內(nèi)實(shí)驗(yàn)魚(yú)的總質(zhì)量(g)，Wd為每個(gè)養(yǎng)殖桶生長(zhǎng)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死魚(yú)的重量(g)，t為實(shí)驗(yàn)持續(xù)的時(shí)間(d)，Ws、Ls、Wv和Wl分別為實(shí)驗(yàn)取樣魚(yú)的體質(zhì)量(g)、體長(zhǎng)(cm)、肝質(zhì)量(g)和內(nèi)臟質(zhì)量(g)，N0和Nt為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)每個(gè)養(yǎng)殖桶內(nèi)魚(yú)的數(shù)量(尾)，CN0和CNt分別為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)魚(yú)體的氮含量(g)，CNf為飼料氮質(zhì)量(g)。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel2013軟件進(jìn)行處理，通過(guò)SPSS22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，所有以百分?jǐn)?shù)表示的數(shù)據(jù)先經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)換后再進(jìn)行方差分析。所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，若組間差異顯著，采用Duncan test法進(jìn)行多重比較，差異顯著水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 大口黑鱸幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能

由表3可知，各組大口黑鱸幼魚(yú)成活率差異不顯著(P>0.05)，C組的末均重、增重和特定生長(zhǎng)率與Se0.48組差異不顯著(P>0.05)，但明顯低于其余各組(P<0.05)；隨著飼料中酵母硒含量的增加，各試驗(yàn)組的末均重、增重和特定生長(zhǎng)率呈先升高后降低趨勢(shì)；除對(duì)照組外，各組間的末均重、增重和特定生長(zhǎng)率均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 大口黑鱸幼魚(yú)的初均重、末均重、增重、成活率和特定生長(zhǎng)率狀況

2.2 大口黑鱸幼魚(yú)的飼料利用率和飼料氮廢物排放

由表4可知， C組的攝食率與Se0.48和Se0.96兩組的差異不顯著，但顯著低于其余各組(P<0.05)；C組的飼料轉(zhuǎn)化率與Se0.48組的差異不顯著，但顯著高于其他各組(P<0.05)；Se0.48組的飼料轉(zhuǎn)化率顯著高于Se0.24、Se1.44和Se1.92組(P<0.05)，其余各組間的飼料轉(zhuǎn)化率無(wú)顯著差異(P>0.05)。各組間的飼料氮沉積效率無(wú)顯著差異(P>0.05)。豆粕替代50%魚(yú)粉對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)飼料氮廢物排放無(wú)顯著影響；隨著飼料中酵母硒含量的增加，飼料氮廢物排放無(wú)規(guī)律性變化，Se1.92組的飼料氮廢物排放最高，Se1.44組的最低，最高組是最低組的1.21倍，各組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表4 大口黑鱸幼魚(yú)的攝食率、飼料利用率和飼料氮廢物排放情況

2.3 大口黑鱸幼魚(yú)的形體指數(shù)

由表5可知，豆粕替代飼料中50%的魚(yú)粉后，大口黑鱸幼魚(yú)的肥滿(mǎn)度、臟體比和肝體比均有所降低，且肝體比降低顯著(P<0.05)；隨著酵母硒含量的增加，各組大口黑鱸幼魚(yú)的肥滿(mǎn)度和臟體比均無(wú)顯著差異(P>0.05)，Se0.48組的肝體比明顯高于其余各組(P<0.05)。

表5 大口黑鱸幼魚(yú)的肥滿(mǎn)度、臟體比和肝體比狀況

2.4 大口黑鱸幼魚(yú)的全魚(yú)組成

由表6可知，用豆粕替代飼料中50%的魚(yú)粉后，各組大口黑鱸幼魚(yú)的全魚(yú)水分、粗蛋白質(zhì)和灰分質(zhì)量含量均無(wú)顯著影響，粗脂肪質(zhì)量含量顯著升高(P<0.05)；隨著酵母硒質(zhì)量含量的增加，各組的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的質(zhì)量含量無(wú)顯著差異；Se0.24組的水分質(zhì)量含量顯著低于Se0.48和Se1.92組(P<0.05)；Se0和Se0.48組的灰分顯著低于Se0.24、Se0.96、Se1.44、Se1.92、Se2.44和Se4.8組(P<0.05)，其余各組間的差異不顯著。

表6 大口黑鱸幼魚(yú)的全魚(yú)組成情況單位：%

2.5 大口黑鱸幼魚(yú)的肌肉和肝胰臟硒含量

如表7所示，用豆粕替代飼料中50%的魚(yú)粉后，大口黑鱸幼魚(yú)肌肉和肝臟中硒的質(zhì)量含量無(wú)顯著差異；隨著酵母硒質(zhì)量含量的增加，Se0.48組肌肉中硒的質(zhì)量含量顯著低于Se1.92、Se2.4、Se4.8組(P<0.05)，Se4.8組肌肉中的硒質(zhì)量含量與Se1.92和Se2.4無(wú)顯著差異，但顯著高于其余各組(P<0.05)；Se4.8組的肝胰臟中硒質(zhì)量含量顯著高于其余各組(P<0.05)。

表7 大口黑鱸幼魚(yú)的肌肉和肝胰臟硒含量單位：mg·kg-1

3 討論

3.1 酵母硒和豆粕對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能和飼料利用率的影響

豆粕替代魚(yú)粉水平因豆粕類(lèi)型不同而有所差異，駱軍寧[14]用脫脂豆粕替代魚(yú)粉，當(dāng)比例超過(guò)13%時(shí)，隨著替代比例的升高，大口黑鱸的生長(zhǎng)性能逐漸下降。王新霞[15]在加州鱸飼料中添加10%的發(fā)酵豆粕，能顯著地提高加州鱸的生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中用豆粕替代加州鱸飼料中的魚(yú)粉，將魚(yú)粉含量降低至16%，對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能未產(chǎn)生不良影響。在此基礎(chǔ)上添加酵母硒對(duì)其增重?zé)o明顯促進(jìn)作用。隨著飼料中豆粕含量的增加，大口黑鱸幼魚(yú)的攝食率逐漸升高，飼料轉(zhuǎn)化率變低，與陳乃松等[16]的研究結(jié)果一致。郭正富等[17]的研究表明，鱸魚(yú)的增重率、特定生長(zhǎng)率隨著飼料中硒質(zhì)量含量的升高呈先升高后降低的趨勢(shì)。在本試驗(yàn)中，隨著飼料中酵母硒質(zhì)量含量的增加，各組大口黑鱸幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能、增重、特定生長(zhǎng)率和飼料氮廢物排放量均無(wú)顯著差異。這與龍萌[6]和許友卿[18]的研究結(jié)果一致。但最高組的飼料氮廢物排放量比最低組的高約21%，表明在一定范圍內(nèi)，高含量的酵母硒會(huì)降低大口黑鱸幼魚(yú)對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的吸收和利用，從而增加飼料氮廢物的排放量，加重對(duì)養(yǎng)殖水環(huán)境的污染。

3.2 酵母硒和豆粕對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)全魚(yú)組成的影響

飼料中不同硒的質(zhì)量含量對(duì)不同魚(yú)類(lèi)全魚(yú)體組成的影響存在差異[19]，添加酵母硒對(duì)大口黑鱸具有一定的脂肪代謝促進(jìn)作用[20]、對(duì)鯽魚(yú)全魚(yú)體組成無(wú)顯著影響[21]。本試驗(yàn)中，用豆粕替代50%的魚(yú)粉后，對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)全魚(yú)體水分、粗蛋白質(zhì)和灰分的含量均無(wú)顯著影響，但粗脂肪的含量顯著升高；隨著酵母硒質(zhì)量含量的增加，全魚(yú)體粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的含量無(wú)顯著差異。該試驗(yàn)結(jié)果與酵母硒對(duì)團(tuán)頭魴[6]、鳡魚(yú)[18]的影響結(jié)果基本一致。

3.3 酵母硒和豆粕對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)肌肉和肝胰臟中硒含量的影響

硒作為機(jī)體所必需的微量元素，是多種酶的活性中心，對(duì)生物體免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)和生理生化代謝過(guò)程起著重要作用[2,22]。肝胰臟作為魚(yú)類(lèi)重要的免疫和代謝器官，肝胰臟中的硒含量間接反映魚(yú)類(lèi)的免疫能力和代謝水平。本試驗(yàn)中，隨著飼料中酵母硒含量的增加，各試驗(yàn)組的加州鱸肝體比呈先增加后降低的趨勢(shì)，表明酵母硒會(huì)影響大口黑鱸幼魚(yú)肝胰臟的發(fā)育，且肝胰臟中硒的含量隨著硒劑量的增加而逐漸增加，與郭正富等[17]的研究結(jié)果相似。本試驗(yàn)中，大口黑鱸幼魚(yú)肝胰臟硒的含量明顯高于肌肉中硒的含量，表明大口黑鱸幼魚(yú)體內(nèi)硒累積的主要部位在肝胰臟。這與陳春秀等人[23]對(duì)半滑舌鰨的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

綜上所述，豆粕替代部分魚(yú)粉可將大口黑鱸幼魚(yú)飼料中魚(yú)粉的質(zhì)量含量降至16%，添加酵母硒不能顯著地提高在大口黑鱸幼魚(yú)飼料中以豆粕替代魚(yú)粉的效果。