國(guó)產(chǎn)離子交換高效液相色譜法糖化血紅蛋白儀的性能評(píng)價(jià)

譚洪輝 （廣東省高州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東高州 525200）

糖化血紅蛋白(HbA1c)是血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白A 組分的某些特殊部位與葡萄糖結(jié)合的產(chǎn)物，該產(chǎn)物由緩慢而不可逆的非酶促反應(yīng)而形成[1]，可以反映患者近8～12 周的血糖控制情況，是臨床上診療糖尿病及評(píng)估血糖控制水平的有效指標(biāo)[2]。根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織ISO15189[3]和衛(wèi)生部《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》要求[4]，本研究對(duì)科室新引進(jìn)的離子交換高效液相色譜法(HPLC)國(guó)產(chǎn)的糖化血紅蛋白儀MQ-6000 進(jìn)行臨床性能評(píng)價(jià)，確認(rèn)其是否滿足臨床應(yīng)用要求。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取本院2019 年7 月各內(nèi)科住院確診的50 例糖尿病患者及40 例健康體檢者為研究對(duì)象，其中男28 例，女22 例，平均年齡(46.6±7.4)歲，所有研究對(duì)象抽取EDTA-K2 抗凝血液2 mL 標(biāo)本送檢。

1.2 儀器和試劑

MQ-6000 高效液相色譜法糖化血紅蛋白儀(上海惠中公司)，試劑、高低質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品均由上海華臣公司提供；美國(guó)BIO-RAD D-10 糖化血紅蛋白分析儀，試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均由美國(guó)BIO-RAD 公司提供。2 臺(tái)儀器均每天進(jìn)行高、低2 個(gè)水平質(zhì)控品測(cè)定，質(zhì)控在控后進(jìn)行性能評(píng)價(jià)試驗(yàn)。

1.3 方法學(xué)評(píng)估

1.3.1 攜帶污染率 依據(jù)我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T1246-2014《糖化血紅蛋白分析儀》[5]評(píng)價(jià)方法，選取低值和高值樣本各1 份，連續(xù)測(cè)定高值樣本3 次，記為H1、H2 和H3，馬上連續(xù)測(cè)定低值樣本3 次，記為L(zhǎng)1、L2 和L3，攜帶污染率=|L1-L3|/(H3-L3)×100%，攜帶污染率≤3%為符合驗(yàn)證要求。

1.3.2 批內(nèi)及批間精密度 依據(jù)我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 461-2015[6]精密度評(píng)價(jià)方法，選取高值和低值患者新鮮全血各1 份，每天檢測(cè)2 批次標(biāo)本2 次(間隔大于2 h)，連續(xù)檢測(cè)20 d，以20 d 的80 個(gè)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算同批次以及不同批次之間的變異系數(shù)。批內(nèi)變異系數(shù)≤2%，批間變異系數(shù)≤3%為可接受結(jié)果[6]。

1.3.3 正確度 依據(jù)CLSI EP15-A3[7]文件的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)方法，測(cè)定國(guó)家衛(wèi)健委臨檢中心2020 年第1 次室間質(zhì)控物，每天對(duì)同一水平測(cè)定2 次后取平均值，連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算測(cè)定值與靶值之間的相對(duì)偏差，測(cè)定值在允許范圍內(nèi)，相對(duì)偏差為±8%區(qū)間內(nèi)為可接受結(jié)果[5]。

1.3.4 儀器比對(duì) 依據(jù)CLSI EP9-A3[8]文件的可比性評(píng)價(jià)方法，以同方法學(xué)的美國(guó)BIO-RAD D-10 為對(duì)比儀器，選取線性范圍內(nèi)濃度均勻分布的20 份標(biāo)本在2 臺(tái)血液分析儀上隨機(jī)測(cè)定，記錄結(jié)果。以極端化偏差處理法(ESD)進(jìn)行離群值檢驗(yàn)后剔除離群值。以MQ6000 儀器測(cè)定均值為橫坐標(biāo)，以BIORAD D-10 測(cè)定均值為縱坐標(biāo)，繪制散點(diǎn)圖。選擇(Passing-Bablok，P-B)模型擬合回歸方程，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r和偏倚。以相關(guān)系數(shù)r≥0.975，偏倚≤10%為可接受結(jié)果。

1.3.5 線性范圍 依據(jù)CLSI EP6-A2[9]文件的線性范圍評(píng)價(jià)方法，參照試劑說(shuō)明書的檢測(cè)線性范圍(4.0%～17.0%)，收集高低值標(biāo)本(分別記為H 和L)，按0H+5L、1H+4L、2H+3L、3H+2L、4H+1L、5H+0L稀釋成6 個(gè)濃度的樣本，每個(gè)濃度樣本重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算平均值。以稀釋比例預(yù)期值(通過(guò)已知的高低濃度樣品值計(jì)算)為x，以各嘗試實(shí)際測(cè)定平均值為y作線性回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r值及測(cè)定均值與預(yù)期值的相對(duì)偏倚。以r≥0.990，相對(duì)偏倚＜10%，判斷線性范圍在實(shí)驗(yàn)已涉及濃度線性范圍，為可接受結(jié)果[5]。

1.3.6 參考區(qū)間 依據(jù)CLSI C28-A2[10]文件的參考區(qū)間評(píng)價(jià)方法，按年齡性別均等分布選取40 例健康體檢者的血樣，對(duì)廠商給出參考范圍(4.0%～6.0%)進(jìn)行驗(yàn)證，只允許10%的數(shù)據(jù)超過(guò)所驗(yàn)證的參考范圍，否則需建立參考范圍。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2013 和SPSS 20.0 軟件進(jìn)行計(jì)算和處理。

2 結(jié)果

2.1 攜帶污染率

通過(guò)計(jì)算得攜帶污染率為0.72%，小于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(＜5%)[5]，高濃度樣本對(duì)低濃度樣本基本無(wú)攜帶污染，符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，見表1。

表1 攜帶污染率 (%)

2.2 批內(nèi)及批間精密度

通過(guò)計(jì)算批內(nèi)及批間的CV，批內(nèi)CV 及批間CV均小于3%，符合我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[5]，見表2。

表2 批內(nèi)及批間精密度 (%)

2.3 正確度

根據(jù)國(guó)家臨檢中心2020 年第1 次室間質(zhì)控物測(cè)定均值與靶值之間對(duì)比，5 個(gè)濃度水平的測(cè)定值均在允許范圍內(nèi)，相對(duì)偏倚≤8%[5]，見表3。

表3 正確度 (%)

2.4 儀器比對(duì)

ESD 法檢驗(yàn)后未發(fā)現(xiàn)離群值，MQ6000 與D-10 儀器比對(duì)回歸方程為y=1.073 4x-0.417 1，r=0.990 6，偏倚0.17%～3.00%。r≥0.975，偏倚≤10%。

2.5 線性范圍

線性方程為y=0.998 6x-0.363 9，r=0.993；6 個(gè)稀釋比例的實(shí)測(cè)值與預(yù)期值的相對(duì)偏倚均＜10%，提示線性范圍驗(yàn)證為可接受結(jié)果，見表4。

表4 線性范圍 (%)

2.6 參考區(qū)間

通過(guò)檢測(cè)40 例健康體檢者標(biāo)本后發(fā)現(xiàn)MQ-6000 HbA1c 參考區(qū)間4.0～6.0，測(cè)試個(gè)體范圍(%)4.3～6.6，超限2 個(gè)，符合率95%＞90%，符合應(yīng)用要求。

3 討論

HbA1c 被認(rèn)為能夠反映平均血糖水平，與糖尿病并發(fā)癥密切相關(guān)，是監(jiān)測(cè)評(píng)估血糖控制水平的金標(biāo)準(zhǔn)[1，11]。HbA1c 檢測(cè)方法有多種，主要有電泳法、色譜法、免疫比濁法和HPLC 法。HPLC 具有抗干擾性好、精密度好和準(zhǔn)確度高等優(yōu)勢(shì)，被美國(guó)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(NGSP)推薦為檢測(cè)HbA1c 的參考方法[12]，同時(shí)也為我國(guó)糖化血紅蛋白檢測(cè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的推薦方法[13]。

每臺(tái)檢測(cè)儀器在投入使用之前，確保儀器性能穩(wěn)定至關(guān)重要，其中檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量是否符合質(zhì)量要求是最重要因素。同時(shí)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則:ISO15189規(guī)定，在引進(jìn)新的檢驗(yàn)儀器和建立新的檢驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的性能進(jìn)行驗(yàn)證，以判斷其能否符合臨床應(yīng)用要求[14]。另根據(jù)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)一致化和標(biāo)準(zhǔn)化的目標(biāo)和循證醫(yī)學(xué)的要求，相同項(xiàng)目在不同檢測(cè)系統(tǒng)之間的結(jié)果應(yīng)該做到結(jié)果互認(rèn)。

本研究依據(jù)各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)文件對(duì)MQ-6000 糖化血紅蛋白儀各項(xiàng)主要性能進(jìn)行了驗(yàn)證。計(jì)算得出其攜帶污染率為0.72%，遠(yuǎn)小于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的5%，表明高值樣本不影響低值樣本的檢測(cè)。精密度是用來(lái)量值一系列重復(fù)測(cè)定結(jié)果的分散程度，通過(guò)高值和低值樣本的批內(nèi)及批間重復(fù)性試驗(yàn)，批內(nèi)及批間CV 均小于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的3%，表明儀器精密度良好。準(zhǔn)確度是多次測(cè)定的均值與真值相符合的程度，通過(guò)相同方法學(xué)儀器的比對(duì)試驗(yàn)和臨檢中心的室間質(zhì)評(píng)，相同方法學(xué)兩種檢測(cè)系統(tǒng)的相關(guān)性良好(r=0.975），5 個(gè)水平的測(cè)定值均在允許范圍內(nèi)，與靶值之間相對(duì)偏倚小于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(±8%)，表明儀器準(zhǔn)確度良好。另外儀器線性范圍較大(4.0%～17.0%)，參考區(qū)間適用于大多數(shù)(＞90%)正常個(gè)體。

綜上所述，MQ-6000 離子交換高效液相譜法糖化血紅蛋白儀在攜帶污染率、批內(nèi)及批間精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍和參考區(qū)間方面均符合CLSI 文件要求，且與廠商標(biāo)定的分析性能一致，可滿足臨床應(yīng)用需求。