北京南海子麋鹿苑春季麋鹿糞樣皮質醇激素變化及其指示作用

張樹苗 李夷平 陳 頎 孟慶輝 程志斌 陳 星 白加德

(北京麋鹿生態實驗中心，北京，100076)

麋鹿(Elaphurusdavidianus)俗稱“四不像”，是世界自然保護聯盟IUCN紅皮書野外滅絕(EW)物種。1920年在我國本土滅絕[1-2]。1985年，我國開啟了麋鹿重引進項目，項目首選了北京南海子皇家獵苑作為重引進放歸地，并在1985—1987年共重引進77只麋鹿作為北京南海子麋鹿苑和江蘇大豐麋鹿國家級自然保護區的基礎種群，以恢復園囿種群，為恢復野生種群儲備動物。經過30年的圈養繁殖和種群擴大、輸出及野外放歸，截至2020年，我國的麋鹿分布于全國81個遷地保護場所，種群數量達到8 000余只。其中，野生種群1 000余只，圈養和半散放種群7 000余只，這些圈養或半散放場所多對公眾開放。

在對外開放的場所中，開展游客對動物的干擾程度的研究是當前動物保護、動物福利關注的熱點之一。動物受到干擾會產生應激反應，此時體內皮質醇激素會產生顯著變化，因此，皮質醇激素成為公認的反應動物應激狀態的指標[3-5]。麋鹿應激狀態的高低在一定程度上能夠反映其適應環境條件的能力[6]，通常情況下，過低的應激水平表明動物不能對環境變化及時做出有效的反應，過高的應激狀態則會損害動物的正常生理活動。近幾年來，研究者已逐漸采用非損傷性取樣法研究動物糞樣內的皮質醇激素值，并評價目標動物的生存狀態[7-10]。迄今，崔媛媛等[11]通過監測糞樣中皮質醇激素濃度考察游客密集程度對圈養大熊貓(Ailuropodamelanoleuca)的影響程度。Der等[12]通過監測糞樣中皮質醇激素含量高低研究游客密度對3種狐蝠(Acerodonjubatus、Pteropusvampyrus、Pteropushypomelanus)的影響，Barja等[13]研究發現位于核心保護區(無干擾區)的松貂(Martesmartes)糞樣中皮質醇激素明顯低于有游客干擾的限制區及自由進入區。

2）十二指腸支架：該種支架放置后由于腸蠕動的影響本身就存在移位的可能。鎳鈦合金類支架與MRI兼容，對移位的附加力影響不大，不銹鋼支架對于移位的參與度多少不清楚，通常要禁行MRI檢查。

本文采用非損傷性方法，研究春季(客流量)北京南海子麋鹿苑半散放麋鹿種群的生理應激狀態，并與游客干擾程度相比較，旨在闡明生態旅游中游客量的變化對麋鹿生存狀態造成的影響，以期為麋鹿遷地保護場所的科學管理提供參考數據。

動遷辦很快進了南菜村，拆遷的傳言得到證實。火車站南移，和高鐵并站。日子確實要變了，南菜馬上就要被格式化了。看到蓋著大紅印章的政府通告，侯大同很驚訝，好像是誰告訴他無花果開花了。政府這叫專制，沒有征得我們的同意就要拆遷，沒門！

1 材料與方法

1.1 糞樣采集和保存

參照郎冬梅等[14]的提取方法并略做改動：將冷凍保存的糞樣置于室溫解凍，取5 g左右糞便顆粒放入研缽中研磨。而后稱取約1 g濕糞于15 mL離心管中，加入5 mL 90%乙醇溶液；用恒溫水育振蕩器20℃下振蕩混合液20 min；經2 500 rpm離心15 min后收集上清液和沉淀，向離心管沉淀物中再加入同濃度提取液5 mL，重復上述步驟，將2次得到上清液混合均勻后取1 mL于新離心管，做完標記后置于-20℃下保存待測。同時設置對照組，測定糞便含水量，依次將測得的數據換算為每克干糞所含各激素的量(ng/g)。

1.2 糞便皮質醇激素提取和測定

2017年3—5月，對北京南海子麋鹿苑的健康麋鹿采集糞樣，3月采集樣品240份(8 d，30份/d)，5月采集樣品150份(5 d，30份/d)，共獲得樣品390份。采樣時間為每天8：00—10：00，每頭麋鹿采取新鮮糞便5 g左右，選取時挑選糞便中無污染的中心部分顆粒，并抓勻放入自封袋內，記錄好個體編號、采集日期，排除空氣封口后立刻放入-20℃冰箱保存。

2017年3—5月，我們對北京南海子麋鹿苑麋鹿糞樣皮質醇含量及游客量進行了測定與統計，結果見圖1、圖2、圖3所示。

1.3 數據分析

在高職院校的發展過程中，為了可以更好的培養學生的工匠精神，院校還應該對結合自身發展現狀，對課程內容、課程設計等進行合理革新。

2 結果

2.1 春季麋鹿糞樣中皮質醇水平變化

采用酶聯免疫吸附法(ELISA)對上述樣品中皮質醇激素含量進行檢測。酶免試劑盒：試劑盒為北京北方生物技術研究所生產。主要技術參數：(1)測定范圍：5—100 ng/mL；(2)靈敏度：<1 ng/m；(3)變異系數：批內<9%，批間<11%；(4)特異性：無交叉反應。

通過對北京南海子麋鹿苑麋鹿糞樣皮質醇含量與前一日游客量及當日游客量進行Pearson相關性分析，結果見表1、表2所示。

從圖1、圖2，我們可以看出麋鹿糞樣中皮質醇水平的變化趨勢與當日客流量不存在相關性，而與前一日游客的數量變化趨勢基本一致。2017年北京南海子麋鹿苑1月的平均游客量為282人，2月的平均游客量為1 334人，3月9日游客量上升到1 500人，次日麋鹿糞樣中的皮質醇含量為140 ng/g。在3月12日植樹節，當日隨著游客量的顯著增多，次日麋鹿糞樣中的皮質醇含量明顯上升至204 ng/g；3月14日隨著游客量的下降，次日的麋鹿糞樣中的皮質醇含量也下降。而后隨著游客量的上升第2日的糞樣中的皮質醇含量再度上升。

廣東粵墾農業小額貸款股份有限公司于2015年12月辦理工商注冊登記，注冊資金人民幣30,000萬元，注冊地在珠海橫琴自貿區，運營總部在廣州。公司的股權結構為：廣東農墾及成員企業占65%，中國人保資產占30%，橫琴金投占5%。公司2016年3月29日經省金融辦批準開業，系廣東省農墾集團公司控股的省級國有小額貸款公司。

2017年北京南海子麋鹿苑第一季度的平均游客量為1 210人，第二季度的平均游客量為1 799人。通過比較北京南海子麋鹿苑麋鹿第一季度和第二季度皮質醇水平(圖3)，我們發現：第二季度整體皮質醇水平高于第一季度，與第二季度游客量增高趨勢相同，但第一季度存在較多高應激水平離群值，綜合每日激素水平折線圖分析，我們發現3月13日和17日糞樣皮質醇含量較高，這2 d正好是植樹節期間麋鹿苑游客量較多。

2.2 春季麋鹿糞樣中皮質醇含量與游客量的相關性

例如，在《燕子》一課教學中，小學語文教師首先可以引導學生進行文章閱讀，在此基礎上進行文章結構的分析，鼓勵學生自主將文章中生動的詞句以及成語等勾畫出來，并鼓勵學生根據所閱讀的內容展開仿寫，描寫其他的小動物，如小老虎、小狗以及企鵝等，整個仿寫練習中，可以加深學生對語文知識的理解，同時還能夠引導學生掌握更多的寫作技巧，因此通過閱讀篇章引導學生展開仿寫與續寫對于提升小學生的寫作能力具有重要意義。

所有數據經過糞便干物質校正。采用 Moreira 等的迭代方法計算每只個體的糞便皮質醇基值水平。具體方法為：去除每個個體糞便皮質醇高于 2 SD 的值，所得均值即為該個體的基值。糞便皮質醇濃度表示為 mean±SE。所有數據在做統計分析前進行正態檢驗。使用Excel 2010對數據進行整理及作圖，并通過SPSS 18.0分別對麋鹿糞樣中的皮質醇激素含量與當日客流量，以及麋鹿糞樣中的皮質醇激素含量與前一日客流量進行相關性分析(personal correlation analysis)，檢驗設為雙尾檢驗，顯著性水平設置為α=0.05。

表1 麋鹿糞樣皮質醇含量與前一日游客量的相關性

表2 麋鹿糞樣皮質醇含量與當天游客量的相關性

我們發現，前一日客流量與皮質醇水平正相關，即客流量越大皮質醇水平越高，當日客流量與皮質醇水平不具有相關性。

3 討論

野生動物的應激生理狀態是機體應對各種生存脅迫因子而產生的一種生理適應，應激反應可對機體健康產生廣泛的影響，過高或過低的應激狀態都不利于動物的生存適應，過低的應激水平表明動物不能對各種應激源做出及時有效的反應，而過高的應激狀態又會損害動物正常的生理活動，甚至引發疾病。

動物的性類固醇激素能反映其繁殖生理狀態，當機體繁殖生理機能異常時，動物體內的性類固醇激素分泌水平會呈現波動并表達于糞便。任何過高或過低的糞樣性類固醇激素值，表明該麋鹿個體的繁殖生理狀態可能偏離了正常值范疇，其偏離程度是其繁殖生理狀態的直接反應，以此作為診斷該個體繁殖生理狀況的依據之一。

人為干擾主要包括動物棲息地的破壞[15-16]、城市化[17-18]以及游客干擾[13，19-20]等。其中游客對動物體造成的影響是當前動物保護、動物福利關注的熱點問題。與血樣相比，糞樣內的皮質醇激素水平可以更準確地反映動物的實際應激性，但是由于胃腸的蠕動時間較長，食物在消化道中停留一段時間，使得糞樣中的激素從分泌至排出往往有一定時間的延遲性[21-22]。對于麋鹿而言，從吃下食物到排糞約需1 d左右時間，其分泌的皮質醇激素在糞樣中排出需要1 d左右的延遲。

本研究結果顯示：糞樣中的皮質醇變化均與前一日的游客量顯著性相關，而與當日客流量的相關性則不明顯，即表示糞樣中的皮質醇存在1 d左右的延遲性。這一點與李駿[23]、劉娟等[24]、于小杰等[25]、崔媛媛等[11]對于大熊貓的研究結果相一致。