醫療污水中糞大腸菌群測定方法及研究進展

◇保山市疾病預防控制中心 楊秀紅

醫療機構污水在排放前要妥善處理，通過做好管控工作，有利于切斷傳染病傳播途徑，為人體健康與生態環境安全提供有力保護。抽取轄區內醫療機構污水41份，用多管發酵法（多步驟）、多管發酵法（單步驟）對其進行糞大腸菌測定。醫療機構在污水消毒后1小時，排放前進行采樣。本文在分析糞大腸菌群時主要用多管發酵法（多步驟）、多管發酵法（單步驟）等方法，并通過綜合比較與研究，提出在現階段糞大腸菌群測定中能夠省略其他步驟，并在嚴謹的驗證與完善后，亦可成為較好的選擇。

糞大腸菌群有著極強的耐熱特征，在44.5℃±0.5℃溫度條件下能夠正常生長，在總大腸菌群中屬于非常關鍵的構成部分。糞便內細菌為糞大腸菌群主要來源，并與水中很多病毒的關系非常密切，在缺少活的宿主情況下，腸道病毒一般無法繁殖，進入水環境后期存活能力明確提升，且時間在數天到數月之間。在出現糞便污染現象后，將引起腸道病原菌污染的問題，由此帶來腸道傳染病以及流行病等情況。基于此對糞大腸菌群的測定具有重要意義，能夠對水源被糞便污染的程度作出有力監控與準確反映，相關部門獲得檢測數據后，能夠為制定流行疾病發生與傳播的防控方案創造有利條件。近年來污水中糞大腸菌群測定時通常采用多管發酵法。針對這種情況，本文僅對多管發酵法檢測進行了研究，并提出了改進措施，旨在為監測人員找到更加有效與簡單的測定方式提供可靠依據。

1 技術背景

在污水糞大腸菌群測定過程中，主要根據糞大腸菌群檢出結果判斷醫療污水是否存在污染。糞大腸菌群含量水平，可以將糞便污染情況反映出來，由此作為其對人體健康危害程度的依據。糞便作為人類腸道排泄物，在醫療污水中不僅包括健康人糞便，也包括腸道患者、帶菌者等糞便，因此分辨內既有正常細菌，也含有大量的腸道致病菌，比如志賀氏菌、沙門氏菌等[1]。若是醫療污水內存在糞便污染的現象，將引起腸道致病菌污染的問題，并因此帶來流行病，我們必須充分了解其對人體健康造成的潛在危險。在病原微生物傳播的防控工作中，需要采取有效、準確的測定手段，在醫療污水糞大腸菌群測定中常用多管發酵法，但是傳統方式存在實驗步驟多、檢測周期長、操作較為繁瑣等不足，需要進行研究與分析，找到可行的改進措施。

2 材料與方法

2.1 實驗材料

為了準確獲取醫療污水中糞大腸菌群的含量，本文在測定中主要材料來源于轄區內41份消毒后的出水。在培養液濃度與量方面，當接種體積為10 mL時，試管中需要裝有3倍濃度乳糖蛋白胨培養液5 mL。當接種量不超過1 mL時，需要接種普通濃度乳糖蛋白胨培養液10 mL。

2.2 實驗方法

取轄區內41份醫療機構消毒后的出水，按多管發酵法《醫療機構水污染物排放標準》附錄A進行。具體來說，在測定糞大腸菌群含量的過程中，主要包括以下步驟：首先，在乳糖膽鹽培養液中接種樣品，在44 ℃條件下培養24 h；其次，采取平板分離的措施，在EMB中接種產酸發酵管，在37 ℃條件下培養24 h；最后，采取染色鏡檢的方法，通過革蘭氏陰性無芽孢桿菌對第一步的培養液進行接種，并于44 ℃條件下培養24 h。

2.3 數據統計

選擇excel和SPSS1 7.0軟件對獲得的數據進行整理與統計。

3 結果

3.1 水樣檢測

用多管發酵法（多步驟）和多管發酵法（單步驟）為醫療機構污水處理消毒前后的出水進行比對實驗。在檢測中應該先對水樣進行混合，結合水樣污染情況將接種量確定下來，通常來說各樣品需要有至少3個水樣量接種，相同接種水樣量至少為5管[2]。在加入水樣的前后，要把培養管關口通過酒精燈進行消毒，再進行封口。

3.2 檢測方法－多管發酵法（多步驟）

（1）取污水樣品10 ml、1 ml、0.1 ml樣品在含有乳糖膽鹽培養液的試管內進行接種，試管中設置有小倒管，每個稀釋度5管，在44 ℃的條件下培養24 h。

（2）乳糖膽鹽培養液變色、產氣時小倒管內出現氣泡。24 h培養后，在EMB培養基中分別劃線接種產酸的試管內培養液。置于37 ℃條件下培養箱中，持續18 h～24 h。

（3）挑取可疑大腸菌群菌落，采取革蘭氏染色和鏡檢等方式。可疑菌落有：①深紫黑色，帶有金屬光澤；②紫黑色，這類菌落略有金屬光澤；③淡紫紅色，菌落的中心色比較深。涂片是革蘭氏陰性無芽胞桿菌，選擇上述1～3個在5 ml乳糖蛋白胨培養液倒管與倒管的試管中接種，在44 ℃條件下的培養箱內保持24 h。取出試管后進行觀察，若是其既產酸又產氣，則可以判定為糞大腸菌群陽性管。

3.3 檢測方法－多管發酵法（單步驟）

取污水樣品10 ml、1 ml、0.1 ml樣品在含有乳糖膽鹽培養液的試管內進行接種，其中同樣設置有小倒管，每個稀釋度5管，在44 ℃條件下培養24 h。在培養結束后，將試管取出認真、細致觀看，若是顏色從紫色變為黃色，且產生了氣泡[3]。簡單來說就是試管既產酸又產氣，則判定為糞大腸菌群陽性管。

3.4 檢驗結果

在對醫療污水中糞大腸菌群測定過程中，結合不同接種量的發酵管呈現的陽性結果數目，得出具體檢驗結果如表1所示。

表1 檢驗結果對比

3.5 討論

糞大腸菌群作為人體腸道中的一種細菌，當脫落、死亡后將隨著糞便由人體排向外界，在微生物分解作用下將形成二氧化碳。若是糞大腸菌群含量超出一定水平，則無法通過微生物對其進行分解，細菌長時間存在外界，將帶來污染的問題，影響人們正常生活與社會和諧穩定[4]。對此我國在污水排放標準中明確了糞大腸菌群的含量，若是其含量較高，則表明醫院在污水處理上不到位，需要接受相應的處罰與制裁。

在本文中所用的兩種方法檢測的糞大腸菌群結果，結果完全一致。都可以對水樣內微生物污染程度作出準確、全面的判斷，這在未來醫療污水廠對水質微生物污染進行評價過程中，將成為一種常用的標準檢測方法。

4 結語

總之，糞大腸菌群作為在人和溫血動物腸道內生存的腸道細菌，在排泄中會進入外界，在糞便干重中超過了1/3。本文選擇多管發酵法的兩種方法測定轄區內醫療機構排放污水中的糞大腸菌群含量，并通過對比與分析后獲得最終結果。在今后醫療污水糞大腸菌群測定中運用文中提出的方法，可以省略后面幾個步驟，能更快捷的得到較準確的數據。