HR-HPV感染患者微量元素與陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子的相關(guān)性研究

王珊珊，任靜靜，程旭紅

（新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院檢驗科，河南新鄉(xiāng) 453700）

高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要因素，但僅存在HR-HPV 感染不足以將已感染細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞，也可能是HR-HPV 感染病程中炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)的調(diào)控發(fā)生了改變［1-2］。微量元素通過多種途徑調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及免疫細(xì)胞因子的分泌，多項研究證實，微量元素含量異常與HPV 感染、宮頸高級別病變及宮頸癌有密切關(guān)系［3-6］，但HR-HPV 患者微量元素與細(xì)胞因子的相關(guān)性研究報道較少且不全面。本研究探討HR-HPV 感染患者血清微量元素及陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子的差異，以及微量元素與細(xì)胞因子間的相關(guān)性，為尋找HPV 的治療開辟新思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017 年1 月至2019 年5 月新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院收治的66 例感染HR-HPV 宮頸病變患者，根據(jù)臨床診斷分為宮頸上皮內(nèi)瘤（CIN）Ⅰ組20 例［平均年齡（43.02±8.43）歲］、CIN Ⅱ～Ⅲ組25 例［平均年齡（42.17±9.62）歲］及宮頸癌組21 例［平均年齡（45.17±8.89）歲］。擇取同期該院體檢的20 例健康女性作為對照組［平均年齡（47.33±7.81）歲］。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥24 周歲；②HR-HPV 感染經(jīng)病理診斷確診為CIN 患者、宮頸癌Ⅰ期患者；③無其他宮頸疾病和惡性腫瘤；④無自身免疫疾病或使用免疫抑制劑治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠、哺乳期婦女；②1 周內(nèi)有性行為、陰道用藥；③心、肺、肝、腎功能異常。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，患者及其家屬知情同意。4 組一般資料比較，差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子檢測 生理鹽水充分沖洗陰道壁上1/3 及宮頸陰道部，用專用試劑管于后穹窿吸取灌洗液，離心取上清分裝，-80℃保存?zhèn)溆谩；謴?fù)室溫后采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測γ干擾素（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）水平，試劑盒購自武漢優(yōu)爾生生命科學(xué)裝備有限公司，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 清微量元素檢測 采集外周靜脈血分離血清，采用電子耦合-等離子體原子發(fā)射光譜儀進(jìn)行檢測血清中鋅、硒、鐵、錳、鈷等微量元素。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SSPSS 19.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用SNK-q 檢驗；相關(guān)性分析用Pearson 法；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4 組血清中微量元素水平比較

4 組鐵、錳、鈷等微量元素含量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但均在正常值范圍內(nèi)。對照組血清中鋅、硒水平＞CINⅠ組＞CIN Ⅱ～Ⅲ組＞宮頸癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 4 組陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子水平比較

4 組陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-10、TNF-α 水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 血清中鋅含量與陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子的相關(guān)性分析

血清鋅含量與陰道中IFN-γ、TNF-α 水平呈正相關(guān)（r=0.573 和0.612,P=0.007 和0.009）；而與陰道中IL-10、TGF-β 水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.193和-0.416,P=0.002 和0.003）。

表1 4 組血清中微量元素水平比較（）

表1 4 組血清中微量元素水平比較（）

注：1）與對照組比較，P＜0.05；2）與CIN Ⅰ組比較，P＜0.05；3）與CIN Ⅱ～Ⅲ組比較，P＜0.05。

表2 4 組陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子水平比較（,pg/mL）

表2 4 組陰道微環(huán)境中細(xì)胞因子水平比較（,pg/mL）

注：1）與對照組比較，P＜0.05；2）與CIN Ⅰ組比較，P＜0.05；3）與CIN Ⅱ～Ⅲ組比較，P＜0.05。

3 討論

微量元素對人類的生存和健康起著至關(guān)重要的作用，已有研究證實，微量元素與感染性疾病及惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)［3-7］。本研究發(fā)現(xiàn)，HR-HPV 患者的鋅含量明顯降低，且隨著臨床分期的加重鋅含量顯著降低，而各組鐵、錳、鈷水平比較無差異，這與ABULIZI 等［8］研究指出血清鎳和硒低水平與HPV 感染和CIN Ⅱ有關(guān)的結(jié)果不一致，而與張媛媛等［9］和文彩虹［10］研究鋅是宮頸疾病組、宮頸癌的保護(hù)性因素的結(jié)果一致。本研究結(jié)果提示，鋅含量的降低與HR-HPV 感染的發(fā)生及宮頸病變的進(jìn)展有關(guān)，這可能與微量元素是維持機體免疫自穩(wěn)、免疫監(jiān)測和免疫應(yīng)答所必需、其在體內(nèi)的失衡可造成免疫調(diào)節(jié)的紊亂有關(guān)。

IFN-γ、TNF-α 主要是由Th1 細(xì)胞分泌的炎性因子，參于細(xì)胞免疫發(fā)揮抑制病毒復(fù)制和抗腫瘤作用［11-13］。IL-10 是下調(diào)或抑制炎性因子分泌的Th2 細(xì)胞因子［14］，具有免疫抑制活性。TGF-β 是一類多肽類的生長因子，能夠抑制機體淋巴因子活化殺傷細(xì)胞（ILAK）的產(chǎn)生和NK 細(xì)胞的活化、減少細(xì)胞因子的產(chǎn)生［14］。本研究結(jié)果顯示，隨著宮頸病變的發(fā)展，血清中IFN-γ、TNF-α 水平逐漸降低，而血清中IL-10、TGF-β 水平在CIN 組及宮頸癌組明顯升高，表明HR-HPV 感染患者發(fā)生了免疫應(yīng)答的紊亂及多種免疫細(xì)胞因子的異常，即機體發(fā)生了細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)異常，偏向于免疫抑制的Th2 細(xì)胞優(yōu)勢應(yīng)答，且隨著病變發(fā)展Th2 優(yōu)勢應(yīng)答越明顯，這與研究報道Th1/Th2 漂移是HRHPV 持續(xù)感染和宮頸癌發(fā)生的重要因素一致［15-17］。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，機體鋅含量與陰道微環(huán)境中IFN-γ、TNF-α 呈正相關(guān)，而與陰道微環(huán)境中IL-10、TGF-β 呈負(fù)相關(guān)。這提示HR-HPV 感染病程中鋅的缺乏與Th2 優(yōu)勢應(yīng)答密切相關(guān)、造成CD4+T 細(xì)胞免疫應(yīng)答紊亂，這可能是由于鋅參與多種催化酶活性中心的構(gòu)成。當(dāng)機體內(nèi)輕度缺鋅時，血清胸腺素的活性顯著下降，影響T 細(xì)胞功能，包括異基因細(xì)胞毒、抑制功能及IL-12 的產(chǎn)生功能等，造成Th1 和Th2 細(xì)胞功能的不平衡［18-19］。本研究HR-HPV 病毒載量CIN Ⅰ組＜CINⅡ～Ⅲ組＜宮頸癌組也證實Th1 細(xì)胞清除HPV 及抗腫瘤能力減弱。IL-10 通過激活JAK1/STAT3 信號傳導(dǎo)通路促進(jìn)E6、E7 癌基因蛋白表達(dá)，加劇癌變的發(fā)生；同時E6、E7 癌基因蛋白反式激活I(lǐng)L-10 過表達(dá)，形成惡性循環(huán)［20］。總之Th1/Th2 漂移是HR-HPV 持續(xù)感染和宮頸癌發(fā)生的重要因素。

綜上所述，HR-HPV 感染患者血清微量元素鋅顯著降低，其與疾病發(fā)生、發(fā)展中免疫反應(yīng)的異常密切相關(guān)。