α-酮酸聯(lián)合極低蛋白飲食對2型糖尿病腎病的影響

王毅 汪延輝 虞丹丹

2型糖尿病腎病為常見糖代謝綜合征微血管并發(fā)癥，是終末期腎功能衰竭的重要發(fā)病因素［1］。研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病腎病由于長期處于高血糖狀態(tài)，腎臟組織代謝負(fù)擔(dān)不斷加重，最終造成腎功能障礙。自噬是人體細(xì)胞特有自我保護(hù)機(jī)制，通過清除受損細(xì)胞器、循環(huán)利用細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)等維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，抵御外部環(huán)境變影響［2-3］。最新發(fā)現(xiàn)細(xì)胞自噬在2型糖尿病腎病發(fā)病中起關(guān)鍵作用［4］。α-酮酸聯(lián)合低蛋白飲食可防治2型糖尿病腎病，但其病理學(xué)機(jī)制仍未明確［5］。本研究基于細(xì)胞自噬探討α-酮酸聯(lián)合極低蛋白飲食對2型糖尿病腎病的作用機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2018年11月至2020年1月本院2型糖尿病腎病確診患者120例作為觀察對象。按隨機(jī)數(shù)表法分成觀察組和對照組，每組各60例。對照組中男36例，女24例；年齡22～74歲，平均（53.18±6.22）歲；病程1.5～12年，平均（6.32±1.06）年。觀察組中男34例，女26例；年齡21～77歲，平均（55.02±4.77）歲；病程1.4～11年，平均（6.29±1.17）年。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①多項檢查聯(lián)合確診為2型糖尿病腎病者［6］；②伴有蛋白尿癥狀；③尿白蛋白排泄率＞100 mg/24 h；④對本研究所用藥物耐受；⑤患者及家屬均自愿參與研究，并簽訂知情同意書。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①糖尿病酮癥酸中毒者；②合并凝血功能障礙及自身免疫系統(tǒng)功能障礙者；③血糖、血壓難以控制在正常范圍者；④惡性腫瘤患者；⑤對本研究所用藥物不耐受，出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)患者；（6）妊娠期或者哺乳期患者。兩組基本資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 糖尿病腎病分期標(biāo)準(zhǔn) （1）Ⅰ期：腎損傷，腎小球濾過率GFR≥90；（2）Ⅱ期：腎臟受損，60≤腎小球濾過率GFR≤89；（3）Ⅲ期：腎臟中度受損，30≤腎小球濾過率GFR≤59；（4）Ⅳ期：腎臟重度受損，15≤腎小球濾過率GFR≤29；（5）Ⅴ期：終末期腎病尿毒癥，腎小球濾過率GFR＜15。

1.3 方法 對照組給予非嚴(yán)格控制低蛋白飲食［1.0 g/（kg·d）］+α-酮酸片（北京費森尤斯卡比醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，服用劑量：4片/次，3次/d）；觀察組給予α-酮酸片（北京費森尤斯卡比醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，服用劑量：4片/次，3次/d）聯(lián)合極低蛋白飲食［（0.5 g/（kg·d）］進(jìn)行治療，連續(xù)治療3個月為一個療程。

1.4 觀察指標(biāo) （1）24 h UAER、24 h Upro：采用免疫比濁法（試劑盒購自浙江世紀(jì)康大醫(yī)療科技有限公司）檢測24 h UAER，采用雙縮脲法（試劑盒購自浙江世紀(jì)康大醫(yī)療科技有限公司）檢測24 h Upro；（2）BUN、SCr：采用酶偶聯(lián)速率法（試劑盒購自山東博邁達(dá)生物科技有限公司）檢測血清BUN及SCr；（3）腎小球濾過率：采用肌酐酶法（試劑盒購自杭州德安奇生物工程有限公司）檢測腎小球濾過率；（4）LC3蛋白及P62抗體陽性率：采用RNA 提取試劑（購自浙江世紀(jì)康大醫(yī)療科技有限公司）提取糖尿病患者血清RNA，配合選取反轉(zhuǎn)錄試劑盒（購自浙江世紀(jì)康大醫(yī)療科技有限公司）生成cDNA，擴(kuò)增反應(yīng)DNA 片段后分離LC3 蛋白，經(jīng)溴化乙錠染色后檢測LC3 蛋白的相對表達(dá)。采用ELISA法檢測p62 抗體陽性率，試劑盒及p62 抗原購自杭州德安奇生物工程有限公司。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以n或%表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前、治療后3個月24 h UAER、24h Upro指標(biāo)比較 治療前，兩組患者的24 h UAER、24 h Upro指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；治療后3個月，兩組患者的24 h UAER、24 h Upro指標(biāo)均降低，且觀察組比對照組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 兩組治療前、治療后3個月BUN、SCr指標(biāo)比較 治療后3個月，兩組患者BUN、SCr指標(biāo)水平均降低，且觀察組比對照組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組治療前、治療后3個月腎小球濾過率比較 治療后3個月，兩組患者腎小球濾過率升高，且觀察組高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表1 兩組治療前、治療后3個月24 h UAER、24 h Upro指標(biāo)比較［mg/24 h，（±s）］

組別 n 24 h UAER 24 h Upro治療前 治療后3個月 t值 P值 治療前 治療后3個月 t值 P值觀察組 60 296.22±64.71 187.26±49.66 38.744 0.000 204.22±33.074 154.07±36.305 28.366 0.000對照組 60 295.18±68.27 242.73±52.24 22.167 0.000 203.17±18.661 184.37±23.076 19.062 0.000 t值 0.128 43.216 0.203 56.221 P值 0.861 0.000 0.794 0.000

表2 兩組治療前、治療后3個月BUN、SCr指標(biāo)比較（±s）

表2 兩組治療前、治療后3個月BUN、SCr指標(biāo)比較（±s）

組別 n BUN（mmol/L）SCr（μmol/L）治療前 治療后3個月 t值 P值 治療前 治療后3個月 t值 P值觀察組 60 12.31±4.82 8.47±2.93 11.085 0.006 223.25±32.19 117.45±23.24 26.016 0.000對照組 60 12.33±4.74 10.03±2.38 8.069 0.012 223.43±34.14 172.05±21.19 21.077 0.002 t值 0.104 9.216 0.143 27.112 P值 0.922 0.004 0.885 0.000

表3 兩組治療前、治療后3個月腎小球濾過率比較［ml/（min·1.73 m2），（±s）］

表3 兩組治療前、治療后3個月腎小球濾過率比較［ml/（min·1.73 m2），（±s）］

組別 n 治療前 治療后3個月 t值 P值觀察組 60 47.04±12.041 128.06±14.102 27.884 0.000對照組 60 47.27±12.07 72.10±15.026 14.228 0.004 t值 0.228 31.284 P值 0.857 0.001

2.4 兩組治療前、治療后3個月LC3蛋白、P62抗體陽性率比較 治療后3個月，兩組患者LC3蛋白表達(dá)升高，P62抗體陽性率降低，且觀察組LC3蛋白表達(dá)高于對照組，P62抗體陽性率低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組治療前、治療后3個月LC3蛋白、P62抗體陽性率比較（±s）

表4 兩組治療前、治療后3個月LC3蛋白、P62抗體陽性率比較（±s）

組別 n LC3蛋白表達(dá) P62抗體陽性率（%）治療前 治療后3個月 t值 P值 治療前 治療后3個月 χ2值 P值觀察組 60 0.65±0.14 1.08±0.39 6.1320.015 25.68 14.27 10.826 0.000對照組 60 0.64±0.17 0.89±0.21 4.0290.002 25.07 18.25 16.008 0.000 t/χ2 值 0.418 7.013 0.108 8.224 P值 0.944 0.006 0.784 0.000

3 討論

2型糖尿病腎病是糖尿病常見并發(fā)癥，其發(fā)病早期隱匿，且病情進(jìn)展緩慢，易被患者及其家屬忽略，一旦出現(xiàn)大量蛋白流失，腎臟損傷已進(jìn)展為終末期，預(yù)后較差［7］。細(xì)胞自噬在2型糖尿病腎病的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，細(xì)胞自噬通過清除受損細(xì)胞器、循環(huán)利用細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)等手段，為細(xì)胞提供營養(yǎng)的分解代謝過程［8］。α-酮酸為多種氨基酸復(fù)方制劑，可提供機(jī)體必需氨基酸，維持肌肉氨基酸平衡，促進(jìn)細(xì)胞自噬活化，緩解骨骼肌蛋白降解風(fēng)險［9］。而極低蛋白飲食能夠降低機(jī)體內(nèi)前列腺素E2合成分泌，緩解腎小球高灌注狀況，降低蛋白質(zhì)的流失，但長期保持極低蛋白含量可能會誘發(fā)營養(yǎng)不良［10］。α-酮酸聯(lián)合極低蛋白飲食干預(yù)不僅能夠改善腎功能指標(biāo)水平，降低腎臟負(fù)擔(dān)，還可通過α-酮酸的攝入，有效避免極低蛋白飲食引起的營養(yǎng)不良［11］。

本研究結(jié)果顯示，兩組患者治療后3個月的24 h UAER、24 h Upro、BUN、SCr指標(biāo)均降低，且觀察組比對照組低。提示α-酮酸聯(lián)合極低蛋白飲食干預(yù)能夠有效改善2型糖尿病腎病患者的腎功能指標(biāo)，緩解24 h蛋白質(zhì)流失進(jìn)程，進(jìn)而有效保護(hù)患者的腎臟功能。究其原因，α-酮酸聯(lián)合極低蛋白飲食能夠降低前列腺素E2血管擴(kuò)充物的合成和分泌，緩解腎小球的高濾過和高灌注，降低2型糖尿病腎病患者的蛋白流失程度，起到良好的腎功能保護(hù)作用［11］，還可以有效改善2型糖尿病腎病患者LC3蛋白、P62抗體陽性率，調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞自噬進(jìn)程［12］。究其原因，外周血自噬相關(guān)蛋白p62和LC3被認(rèn)為是自噬標(biāo)志性蛋白，動物和體外實驗發(fā)現(xiàn)這兩個蛋白的表達(dá)水平與自噬功能的強(qiáng)弱相關(guān)p62是一種支架蛋白，在LC3介導(dǎo)下與LC3結(jié)合形成自噬小體，最后自噬小體與溶酶體相互融合完成蛋白的降解。α-酮酸聯(lián)合極低蛋白飲食不僅能提高機(jī)體所必須的氨基酸，緩解長期低蛋白飲食所造成的營養(yǎng)不良癥狀，同時能夠顯著降低細(xì)胞自噬-溶酶體細(xì)胞自噬-溶酶體mRNA和蛋白的相對表達(dá)量，顯著抑制了細(xì)胞的自噬活化作用，降低2型糖尿病腎病患者骨骼肌自噬水平，應(yīng)用效果確切［13-14］。