基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討肝腎陰虛型紅斑狼瘡中藥用藥規(guī)律及作用機制

孫靜 高燕 張敏 房杉 張祎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種慢性自身免疫性疾病，常累及全身多系統(tǒng)的損害。近年來，有關(guān)系統(tǒng)性紅斑狼瘡中藥用藥規(guī)律的研究頗多，但多從整體用藥探討，少有從不同證型探究用藥規(guī)律，因為SLE的中醫(yī)證型尚未有統(tǒng)一明確的標(biāo)準(zhǔn)。大多數(shù)醫(yī)家認(rèn)為肝腎陰虛是SLE的發(fā)病基礎(chǔ)與關(guān)鍵，肝腎陰虛型是中醫(yī)界認(rèn)同的SLE證型。本文探討分析肝腎陰虛型紅斑狼瘡的中藥用藥規(guī)律及作用機制。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來源 在知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，檢索詞為“系統(tǒng)性紅斑狼瘡”或“SLE”，文獻(xiàn)分類目錄選擇“醫(yī)藥衛(wèi)生科技”欄目下的“中醫(yī)學(xué)”“中藥學(xué)”“中西醫(yī)結(jié)合”，時間限定為1979年1月1日至2019年3月14日，共篩選出中文文獻(xiàn)1930篇。逐一篩選紅斑狼瘡肝腎陰虛型的處方錄入Excel中。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡，明確屬于肝腎陰虛證型；方藥完整。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：肝腎陰虛證以外其它證型；未明確診斷為肝腎陰虛證；方藥不全；方藥重復(fù)使用的。

1.2 數(shù)據(jù)規(guī)范 參照中國中醫(yī)藥出版社《中藥學(xué)》和2015版《中國藥典》規(guī)范部分中藥名稱，如生地、生地黃統(tǒng)一為生地黃，山萸肉、山茱萸統(tǒng)一為山茱萸，夜交藤、首烏藤統(tǒng)一為首烏藤，丹皮、牡丹皮統(tǒng)一為牡丹皮。

1.3 數(shù)據(jù)庫及軟件 （1）數(shù)據(jù)庫：中國知網(wǎng)CNKI（https：//www.cnki.net/）、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺 TCMSP（http ：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php/），人類基因數(shù)據(jù)庫GeneCards（http：//www.genecards.org/）、OMIM（http：//www.omim.org/），蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析數(shù)據(jù)庫 String（https：//string-db.org/）。（2）軟件：中醫(yī)傳承輔助平臺TCMISSV2.5、IBM SPSS Statistics 25、Rx64 3.6.0、Cytoscape3.3.0。

1.4 數(shù)據(jù)分析 （1）規(guī)律分析：選取肝腎陰虛型紅斑狼瘡的病案數(shù)據(jù)共56個，將核對無誤后的數(shù)據(jù)雙人合作錄入中醫(yī)傳承輔助平臺TCMISSV2.5軟件，得到肝腎陰虛型紅斑狼瘡的用藥頻次、性味歸經(jīng)、對藥組合以及核心處方。（2）網(wǎng)絡(luò)藥理分析：在TCMSP數(shù)據(jù)庫輸入生成的新方藥物，限定生物利用度（OB值）＞30%，化合物類藥性（DL）＞0.18，篩選其中藥成分和靶點。在GeneCards、OMIM數(shù)據(jù)庫中篩選出SLE疾病的靶點，將各個核心處方靶點和疾病靶點取交集，得到疾病-核心處方靶點。在String數(shù)據(jù)庫對相關(guān)靶點進(jìn)行蛋白互作分析，用Cytoscape等軟件進(jìn)行KEGG通路分析并將通路可視化。

2 結(jié)果

2.1 肝腎陰虛型紅斑狼瘡用藥結(jié)果 （1）用藥頻次：肝腎陰虛型紅斑狼瘡的56個處方中，頻次＞15的中藥，見表1。其中牡丹皮使用40次，頻率最高。生地黃、山茱萸、女貞子、旱蓮草、澤瀉、茯苓、山藥、枸杞子的使用頻率＞20。（2）基于關(guān)聯(lián)規(guī)則的藥物組合用藥規(guī)律：在軟件TCMISSV2.5的方劑分析模塊進(jìn)行“組方規(guī)律”分析，支持度22，置信度0.95時，得出18對藥物組合模式。生地黃、牡丹皮，山茱萸、牡丹皮出現(xiàn)28次，頻率最高，其次是牡丹皮、澤瀉，旱蓮草、女貞子等。見表2。（3）復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類的組方規(guī)律：設(shè)置相關(guān)度5、懲罰度2，提取組合后得到核心藥物組合4組，見表3。相關(guān)度和懲罰度不變的情況下，得到2個核心處方，見表4。

表1 肝腎陰虛型紅斑狼瘡用藥頻次分布

表2 治療肝腎陰虛型紅斑狼瘡處方中的藥物組合

表3 治療肝腎陰虛型紅斑狼瘡處方中的核心藥物組合

表4 治療肝腎陰虛型紅斑狼瘡的核心處方

2.2 核心處方網(wǎng)絡(luò)藥理分析 （1）靶點分析：將2個核心處方的作用靶點與SLE疾病相關(guān)靶點相交集，見圖1。發(fā)現(xiàn)核心處方1共有57個作用靶點與SLE疾病靶點相同，核心處方2共有106個作用靶點與SLE疾病靶點相同。其中，核心處方1、核心處方2共有55個相同的作用靶點為SLE疾病靶點。進(jìn)一步將核心處方1、2共同作用靶點在String數(shù)據(jù)庫進(jìn)行蛋白互作分析，分別得到2個處方作用靶點的相互作用圖，見圖2、3。（2）通路分析：使用Cytoscape軟件的Gluego插件將核心處方1、核心處方2的靶點進(jìn)行KEGG通路分析，得到相關(guān)通路，見表5、6。用Cytoscape將相關(guān)通路進(jìn)行可視化，見圖4。

圖1 核心處方與藥物venny圖

圖2 核心處方1蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

圖3 核心處方2蛋白互作網(wǎng)絡(luò)

表5 核心處方1靶向的與SLE相關(guān)的信號通路

表6 核心處方2靶向的與SLE相關(guān)的信號通路

圖4 核心處方作用的信號通路與SLE疾病相關(guān)信號通路之間的關(guān)系圖

3 討論

肝腎陰虛型紅斑狼瘡，是由于素體陰虛，加之久病損傷肝腎之陰所致，常見癥狀有脫發(fā)、煩熱盜汗、耳鳴暈眩、咽干便結(jié)、男子遺精、女子月經(jīng)量少等。本證特點以正虛為主，病變部位在肝腎。本文搜集CNKI中肝腎陰虛型紅斑狼瘡的醫(yī)案，運用中醫(yī)傳承輔助平臺系統(tǒng)進(jìn)行常規(guī)用藥規(guī)律統(tǒng)計。從用藥規(guī)律來看，肝腎陰虛型紅斑狼瘡的常用藥有牡丹皮、生地黃、山茱萸、女貞子、旱蓮草、澤瀉、茯苓、山藥、枸杞子等，多為補益肝腎、清熱涼血、利水滲濕藥，歸肝腎經(jīng)。從組方規(guī)律來看，生地黃、牡丹皮，山茱萸、牡丹皮，牡丹皮、澤瀉，旱蓮草、女貞子組合用藥頻次較高。生成的兩個核心處方中，核心處方1為女貞子、白芍、玄參、旱蓮草，是二至丸的加減。女貞子、旱蓮草組成二至丸，出自清代的《醫(yī)方集解》，具有補益肝腎、補陰血之效。白芍長于養(yǎng)血柔肝、緩急止痛，主治肝陰不足、血虛肝旺、肝氣不舒等癥，可治療肝臟損害和肝區(qū)疼痛。其有效成分白芍總苷（TGP）具有止痛、抗炎、保肝、調(diào)節(jié)自愈系統(tǒng)功能的作用。玄參味苦、咸，微寒，入少陰腎經(jīng)，滋陰瀉熱解毒。可見，核心處方1的二至丸加減對肝腎陰虛型SLE有一定療效。核心處方2為茯苓、山藥、青蒿、澤瀉、牡丹皮，是由六味地黃丸加減。有研究表明，六味地黃丸可激活人體細(xì)胞免疫反應(yīng)，增強人體免疫功能［1］。王洪彬等［2］探討中藥防治SLE的組方規(guī)律，得出SLE常用方劑為犀角地黃湯和六味地黃丸。盧立春等［3］觀察發(fā)現(xiàn)，六味地黃丸聯(lián)合激素治療老年系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床療效理想。鄭萍等［4］研究指出，六味地黃丸能顯著提高激素和免疫抑制劑對SLE的療效、減少其復(fù)發(fā)，并能對抗激素的不良反應(yīng)。除六味地黃丸的組成外，核心處方中還有青蒿一藥。青蒿味苦，氣寒，入足厥陰肝經(jīng)，長于清透虛熱、涼血除蒸，適用于肝腎陰虛證。現(xiàn)代研究表明青蒿素類衍生物可以作用于固有免疫及獲得性免疫的各個階段，發(fā)揮抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用［5］。屠呦呦早年即有研究表明雙氫青蒿素通過抑制B淋巴細(xì)胞增殖，促進(jìn)CD4T細(xì)胞和CD8T細(xì)胞的增殖，減少B細(xì)胞分泌自身抗體，從而達(dá)到治療紅斑狼瘡的作用［6］。可見，核心處方中的青蒿一藥治療SLE有中醫(yī)理論及實驗支持。綜上，兩個核心處方的中藥組方與系統(tǒng)性紅斑狼瘡尤其是肝腎陰虛型的治療皆有相關(guān)性。

從網(wǎng)絡(luò)藥理的研究結(jié)果來看，核心處方1與系統(tǒng)性紅斑狼瘡共有靶點57個，涉及的相關(guān)通路有PI3K-Akt信號通路、HTLV-I感染、TNF信號通路、MAPK信號通路、EB病毒感染等24個。核心處方2與系統(tǒng)性紅斑狼瘡共有靶點106個，涉及的相關(guān)通路有PI3K-Akt信號通路、HTLV-I感染、TNF信號通路、IL-17信號通路、MAPK信號通路等40個。核心處方1涉及的PI3KAkt信號通路、HTLV-I感染、TNF信號通路調(diào)控的靶點依次有17、16、12個。核心處方2涉及PI3K-Akt信號通路、HTLV-I感染、TNF信號通路調(diào)控的靶點依次有29、26、23個。這三個通路是兩個核心處方調(diào)控靶點相對較多的通路。有研究表明PI3K / Akt / mTOR信號通路在細(xì)胞增殖和生長信號傳導(dǎo)中起重要作用，從SLE患者分離的CD4+T細(xì)胞中觀察到PI3K / Akt / mTOR信號傳導(dǎo)途徑的活性增強［7］。該通路在SLE發(fā)病中激活T、B淋巴細(xì)胞，抑制Treg細(xì)胞，造成自身免疫狀態(tài)，影響巨噬細(xì)胞等免疫功能，并參與自噬調(diào)控［8］。HTLV-I感染與自體免疫疾病存在爭論，但HTLV-1可影響包括IFN-γ、TNF-α、TGF-β和IL-10在內(nèi)的細(xì)胞因子的穩(wěn)態(tài)，并破壞炎癥和抗炎反應(yīng)的平衡，導(dǎo)致喪失耐受力并發(fā)展自身免疫［9］。有研究表明IFN-α的單獨上調(diào)足以誘導(dǎo)SLE［10］。總之，肝腎陰虛型紅斑狼瘡的中藥治療可能通過上述通路發(fā)揮作用。

綜上所述，本研究運用一系列數(shù)據(jù)庫和軟件，分析了肝腎陰虛型紅斑狼瘡的中藥用藥規(guī)律和核心處方可能作用的信號通路，為肝腎陰虛型紅斑狼瘡的中醫(yī)藥治療提供思路，為其機制研究提供方向。