端粒酶、-干擾素、腺苷酸脫氨酶及T 細胞斑點試驗對胸腔積液的診斷價值

朱慶華，黃青青，何小花

近年來隨著分子生物學的發展，細胞因子越來越多地用于診斷免疫性疾病。端粒酶目前是熱門的腫瘤標志物之一，在惡性腫瘤中端粒酶的活性明顯增強。-干擾素（IFN- ）可以通過增加巨噬細胞的吞噬活性，從而在抗結核免疫中具有強大的調節作用，是診斷結核性胸膜炎的重要因子之一。腺苷脫氨酶（ADA）可以使腺苷脫氨基生成鳥苷，臨床上也用于診斷結核性胸膜炎。T 細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）檢測結核病有著極高的敏感度，是目前臨床結核性胸膜炎主要的診斷措施之一。本文探討端粒酶、IFN- 、ADA及T-SPOT.TB聯合檢測在胸腔積液中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集 2017 年 1 月至2018 年12 月在浙江省義烏市中心醫院治療的80 例胸腔積液患者，其中早期結核性胸膜炎胸腔積液（結核組）38 例，男19 例，女 19 例；年齡 35 ～ 66 歲，平均（50.3±15.3）歲；合并肺結核 4 例，其他均為單純結核性胸膜炎；均符合《臨床診療指南·結核病分冊》中的診斷標準。惡性胸腔積液（腫瘤組）42 例，男 20 例，女22 例；年齡 33 ～ 65 歲，平均（53.0±19.0）歲；肺腺癌25 例，肺小細胞癌8 例，肺鱗狀細胞癌5 例，其他類型肺癌4 例；均經穿刺、胸腔鏡及纖維支氣管鏡等檢查確診。兩組一般資料差異無統計學意義（P ＞0.05）。

1.2 方法 患者入院24h 內抽取空腹靜脈血5 ml，采用胸腔穿刺抽取積液15 ml，隨后離心10min，轉速3000r/min，取上清存儲于－80 ℃冰箱中凍存，待用。采用Ficoll分離法從靜脈血中分離外周血單個核細胞，加入等體積RPMI1640 細胞培養液混勻，加在Ficoll 分離液上層，離心，吸取中間層，洗滌單個核細胞，待用。采用酶聯免疫吸附分析法檢測端粒酶和IFN-濃度，采用比色分析法檢測ADA 活性，試劑盒均由北京百奧萊博科技有限公司提供；采用T-SPOT.TB技術檢測外周血中單個核細胞中的效應 T 細胞，按照 TSPOT.TB試劑盒檢測T-SPOT.TB陽性率。

1.3 結果判定 T-SPOT.TB 陽性結果判斷標準：（1）如空白對照孔斑點數＜5個，檢測孔斑點數減去空白對照孔斑點數≥6 個；（2）如空白對照孔斑點數≥6個，則檢測孔斑點數須＞2 倍空白對照孔斑點數。

1.4 統計方法 采用SPSS17.0 統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t 檢驗；計數資料采用2檢驗或Fisher 確切概率法。P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組端粒酶、IFN- 及ADA 比較結核組端粒酶水平低于腫瘤組，IFN- 及ADA 水平均高于腫瘤組（均P ＜ 0.05），見表1。

2.2 兩組端粒酶、IFN- 、ADA和T-SPOT.TB 陽性率比較 兩組端粒酶、IFN- 、ADA 和T-SPOT.TB 的陽性率差異均有統計學意義（均P ＜0.05），見表2。

2.3 敏感性、特異性和準確性分析 端粒酶、IFN- 、ADA和T-SPOT.TB聯合檢測的敏感性、特異性和準確性均高于4項指標單項檢測（均P ＜0.05），見表3。

3 討論

胸腔積液是結核性疾病和惡性腫瘤的常見臨床表現[1-2]，對其進行有效辨別在臨床治療中意義重大，鑒別的“金標準”是細菌學和病理學診斷，但這兩種方法均存在陽性率低、耗時長等問題[3]。因此本文采用端粒酶、IFN- 、ADA 及TSPOT.TB 四種生化指標進行鑒別，以期為臨床提供參考。

端粒酶是一種核糖核酸蛋白酶，可合成端粒DNA，使端粒延伸并維持其穩定性[4]。人體內正常體細胞中絕大多數無端粒酶活性，其長度隨著細胞分裂的進行而縮短。在腫瘤細胞中端粒酶會重新表達，端粒酶的激活使端粒長度得以穩定，腫瘤細胞可以避免衰老的過程，獲得永生[5]。因此端粒酶的活性與腫瘤的發生發展關系緊密，是目前最常用的腫瘤分子標志物和診斷指標之一。本文結果顯示結核組胸腔積液中的端粒酶水平低于腫瘤組（P ＜0.05）；以端粒酶低于2.0×10－3nmol/L 判斷為陰性，結核組陰性率高于腫瘤組（P ＜0.05）。

表1 兩組端粒酶、IFN- 及ADA 比較

表2 兩組端粒酶、IFN- 、ADA 和T-SPOT.TB 陽性率比較 例（%）

表3 敏感性、特異性和準確性分析 例（%）

IFN- 對免疫系統具有調節作用[6-7]。非結核性的胸腔積液中 IFN- 的水平低于結核性胸腔積液。有學者報道結核性胸腔積液的 IFN- 水平高于惡性胸腔積液，診斷結核性胸腔積液的靈敏度和特異度分別為 90.3%和 79.5%；IFN- 在IL-6、IL-4 等6 種細胞因子中對結核性胸腔積液的敏感性、特異性和準確性均最高[8-9]。本文結果顯示結核組胸腔積液中的 IFN- 水平高于腫瘤組（P ＜ 0.05）；結核組 IFN- 陽性率高于腫瘤組（P ＜0.05）。結核性胸膜炎時T 細胞受到結核抗原刺激后，引起胸腔積液中CD4+T 細胞反應明顯增加，而CD4+細胞是細胞因子IFN- 的直接來源，因此，胸腔積液中的IFN- 含量明顯增高。

ADA 是最早在臨床上應用于結核性胸膜炎的診斷方法，ADA 可促進嘌呤核苷地分解，在免疫組織中含量明顯高于其他組織及細胞[10]。結核性胸膜炎的細胞免疫反應以T 淋巴細胞為主，因此ADA 可用于結核性胸膜炎的診斷[11]。黃曉磊等[12]研究發現ADA 在結核性胸腔積液中的含量水平明顯高于惡性胸腔積液，其對結核性胸膜炎的敏感性和特異性均達到了75%以上。本文結果顯示結核組胸腔積液中的ADA 含量水平高于腫瘤組（P ＜ 0.01），且結核組 ADA 的陽性率高于腫瘤組（P ＜ 0.05）。ADA 存在于淋巴細胞和肺組織中，當肺部有結核性胸膜炎時，可刺激細胞免疫，淋巴細胞顯著增加，因此結核患者胸腔積液中的ADA 水平升高。

T-SPOT.TB不受細胞因子代謝的影響，因此這個方法可以確切地反應體內細胞因子的水平。每個斑點代表一個斑點形成細胞（SFC），通過對SFC 進行計數來評價機體是否感染結核桿菌，是診斷結核性胸膜炎的重要方法之一。以往研究發現T-SPOT.TB對肺外結核的診斷具有重要價值，具有高度敏感性[13-14]。本文結果顯示結核組T-SPOT.TB的陽性率高于腫瘤組（P ＜ 0.05）。

綜上所述，端粒酶、IFN- 、ADA及TSPOT.TB單獨檢測對鑒別結核性和惡性胸腔積液有一定價值，但四項聯合檢測的敏感性、特異性和準確性更高。本文不足之處在于不僅僅是結核和腫瘤會發生胸腔積液，所以有待于進一步對其他病因的胸腔積液進行分析。