抗感顆粒（兒童裝）對普通型手足口病患兒免疫功能及炎性因子的影響*

李宏云，胡 榕 ，汪明輝，張曉清，沈詠梅，黃媛莉 ，王亞云，王存林

1 常德市第一人民醫院，湖南 常德 415003；2 成都高新好醫生第一醫院

手足口病是腸道病毒引起的急性傳染病，學齡前兒童多發。春夏季是手足口病的高發季節。患者、隱性感染者是主要傳染源，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸等途徑傳播。少數重癥患者可出現腦膜炎、腦炎、腦脊髓炎、肺水腫、循環障礙等，致死原因主要是腦干腦炎及神經源性肺水腫。手足口病患兒存在體液免疫、細胞免疫學變化。免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）與免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）是免疫細胞受到病原微生物等抗原物質刺激后產生的重要免疫分子，手足口病患兒黏膜免疫功能紊亂、低下，IgA（immunoglobulin A，IgA）水平下降 ，IgG 及IgM 水平顯著升高［1］。患兒也存在細胞免疫學變化，包括 CD4+、CD8+淋巴細胞亞群的變化［2］。其他NK 細胞、B 細胞也參與了手足口病的免疫功能紊亂過程，因此檢測免疫功能相關指標對評價患者治療效果具有重要的臨床意義。抗感顆粒（兒童裝）是一種中藥制劑，主要成分是金銀花、赤芍、貫眾，具有清熱解毒的功效。有研究顯示，抗感顆粒有抗病毒的作用［3］。筆者就抗感顆粒對普通型手足口病患兒免疫功能與炎性因子的影響進行了分析，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料將2017 年1 月至12 月在常德市第一人民醫院就診的60 例普通型手足口病患兒隨機分為兩組。觀察組30 例，其中男16 例，女14例 ；平均年齡（2.5±0.7）歲 ；白細胞（13.3±3.1）×109/L；發病時間（2.2±0.6）天。對照組30例，其中男 15 例，女 15 例；平均年齡（2.4±0.6）歲；白細胞（13.1±3.0）×109/L；發病時間（2.1±0.7）天。兩組患兒性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 納入標準納入：1）符合普通型手足口病診斷標準［4］者；2）家長對本次研究知情同意者；3）本研究經過醫院醫學倫理委員會同意。

1.3 排除標準排除：1）不符合上述納入標準者；2）重癥患兒；3）合并水痘、皰疹性咽頰炎、不典型麻疹、幼兒急疹等疾病者。

1.4 治療方法兩組均給予單磷酸阿糖腺苷（四川好醫生攀西藥業有限公司，國藥準字Z20023030，規格：5.0 g/袋），10 mg/kg+100 mL 5%葡萄糖注射液，靜脈滴注，每天1 次，同時給予對癥支持治療。觀察組同時服用抗感顆粒（兒童裝）（湖南科倫制藥有限公司，國藥準字H20058835，規格：0.1 g/瓶），開水沖服，每次10 g，每日3 次。兩組均連續治療5天。

1.5 觀察指標分別于治療前及治療5 天后采集外周靜脈血測定免疫功能指標，包括細胞免疫功能指標、體液免疫功能指標。1）細胞免疫功能指標：CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD8+，采用 BD 流式細胞儀檢測，試劑盒由BDIS 公司提供。2）體液免疫功能指標：IgA、IgG、IgM，采用雙抗體夾心法檢測，人免疫球蛋白檢測試劑盒由上海公司提供。3）細胞因子指標：白細胞介素2（interleukin-2，IL-2）、白細胞介素 4（interleukin-4，IL-4）、白細胞介素6（interleukin-6，IL-6）、白細胞介素10（interleukin-10，IL-10）、腫瘤壞死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、干擾素 γ（interferon-γ，IFN-γ）采用ELISA方法檢測。

1.6 統計學方法采用SPSS 15.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料采用表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 體液免疫指標治療后觀察組IgA 較治療前顯著升高，IgM、IgG 較治療前顯著下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療后，觀察組IgA 高于對照組，IgM、IgG 低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 淋巴細胞水平治療后兩組CD3+、CD4+、CD8+顯著升高，CD19+淋巴細胞水平均較治療前顯著下降，CD4+/CD8+較治療前升高，差異均有統計學意義（P＜0.05）；治療后觀察組 CD3+、CD4+、CD8+顯著高于對照組，CD19+淋巴細胞水平低于對照組，CD4+/CD8+高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 細胞因子水平治療后，兩組IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ 均較治療前顯著下降，差異有統計學意義（P＜0.05）；治療后觀察組IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ顯著低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表1 兩組治療前后體液免疫指標比較（） g/L

表1 兩組治療前后體液免疫指標比較（） g/L

注：*表示與對照組治療后比較，P＜0.05

組別觀察組對照組治療后8.35±0.18*9.06±0.15例數30 30 IgA治療前1.03±0.12 1.02±0.13治療后1.18±0.11*1.10±0.16 IgM治療前1.10±0.13 1.11±0.14治療后1.00±0.10*1.06±0.10 IgG治療前9.91±0.22 9.89±0.24

表2 兩組治療前后細胞免疫指標比較（）

表2 兩組治療前后細胞免疫指標比較（）

注：*表示與對照組治療后比較，P＜0.05

組別觀察組例數30對照組CD4+/CD8+1.26±0.02 1.30±0.03*1.26±0.02 1.28±0.02 30時間治療前治療后治療前治療后CD3+（n/μL）2018.6±394.7 2341.2±461.8*2019.4±215.5 2250.8±315.9 CD4+（n/μL）1062.6±205.3 1393.5±218.4*1072.1±216.2 1201.7±221.5 CD8+（n/μL）817.5±139.4 1106.8±167.6*820.5±174.6 986.3±152.4 CD19+（n/μL）2367.6±597.2 1211.8±316.7*2378.1±581.5 1614.3±422.8

表3 兩組治療前后細胞因子水平比較（） pg/mL

表3 兩組治療前后細胞因子水平比較（） pg/mL

注：*表示與對照組治療后比較，P＜0.05

組別觀察組對照組IFN-γ 35.1±6.6 5.5±1.5*34.9±7.1 16.3±3.0例數30 30時間治療前治療后治療前治療后IL-2 11.3±2.6 3.6±1.0*11.5±3.3 6.2±1.5 IL-4 16.8±3.1 3.8±1.1*16.7±3.5 7.5±1.4 IL-6 17.0±3.3 4.1±1.4*16.9±3.1 7.3±2.0 IL-10 26.6±4.9 5.2±1.3*26.3±5.1 13.7±3.5 TNF-α 25.9±6.2 4.6±1.1*26.1±6.5 12.9±3.0

3 討論

手足口病是腸道病毒引起的常見傳染病之一，5 歲以下嬰幼兒高發，無合并癥的患者一般預后較好，但個別患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等致病性并發癥。引起手足口的病毒主要是腸道病毒，有20 多種，其中腸道病毒71 型（EV71）及柯薩奇病毒A16 型（COXA16）最為常見。腸道病毒呈球形，是單股正鏈RNA 病毒，因其無脂質外膜，因此親脂性消毒劑無用。腸道病毒經上呼吸道進入體內后，在局部上皮細胞增殖，轉移至局部淋巴結組織，增殖、釋放入血，出現第一次病毒血癥。病毒擴散至有病毒受體靶細胞，與細胞表面受體結合吸附，病毒RNA 進入細胞質，轉錄、翻譯、復制出二代病毒，再次進入血液循環，出現第二次病毒血癥，并出現臨床癥狀。EV71 具有高度的噬神經性，因此部分重癥患兒會出現神經癥狀。

手足口病患兒無論是普通型或者重型，均會出現免疫功能改變。相對于體液免疫，在病毒感染過程中，細胞免疫發揮了更為重要的作用［4-6］。重癥手足口病多發生在3 周歲以下的患兒，與年齡小的患兒細胞免疫功能較弱有關，患兒病毒殺傷及清除推遲，更容易導致病毒播散，發生全身炎癥反應，甚至發展為肺水腫。在生理狀況下，T 淋巴細胞相互作用，維持動態平衡，調劑免疫應答，維持機體細胞免疫、體液免疫功能［7-9］。病毒進入機體，T 淋巴細胞與自然殺傷細胞是主要的防御細胞，在初期，NK 細胞作為機體固有免疫應答細胞，首先產生應答、活化，產生IFN-γ、IL-2、TNF-α等，誘導Th 淋巴細胞分化，調劑機體免疫功能［10-11］。在本研究中 CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細胞在治療前顯著下降，而CD19+B 淋巴細胞水平在治療前顯著升高，提示患兒存在細胞體液免疫功能紊亂。CD3 分子是T 淋巴細胞成熟標志，CD3+T 淋巴細胞包括 CD3+、CD4+T 淋巴細胞與 CD3+、CD8+T 淋巴細胞，其中 CD3+、CD4+T 淋巴細胞為 Th 細胞，包括Th1與Th2型，Th1參與對腫瘤、病毒感染的免疫反應［12-13］。Th1 細胞分泌產生 IL-1β、TNF-α、IL-2、IFN-γ，還能夠激活單核巨噬細胞、中性粒細胞，增加吞噬作用，同時也會促進炎性介質的產生，加重炎癥反應。Th2 參與寄生蟲感染與過敏性疾病的免疫反應，分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 等，參與B淋巴細胞增殖成熟，促進產生抗體，參與體液免疫［14］。有研究證實，在重癥手足口病患兒急性期，患兒存在免疫功能平衡紊亂的情況，細胞免疫應答占優勢，而體液免疫受到一定程度的抑制，使易感性增加，在恢復期，Th2 淋巴細胞逐漸升高，體液、細胞免疫逐漸恢復平衡［15］。CD3+、CD8+T 淋巴細胞為細胞毒性T 細胞，參與病毒清除過程。本研究結果顯示，患兒治療前T 淋巴細胞水平下降，既往研究證實腸道病毒本身對T 淋巴細胞有毒性作用，并且患兒T 淋巴細胞水平下降也提示患兒存在免疫功能紊亂。而經過治療后，患兒體內病毒得到有效清除，T 淋巴細胞水平也會隨著病情的好轉而升高，恢復免疫功能平衡。在本研究中治療前IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ水平均顯著升高，提示病毒侵入機體后，引起強烈的炎性與抗炎反應。IFN-γ在機體的免疫功能中發揮重要作用，主要由CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、NK 細胞分泌，是重要的反應因子，可增強巨噬細胞的吞噬能力，促進Th0 細胞分化為Th1 細胞，提高機體抵抗病毒感染的能力。IFN-γ能夠促進NK 細胞殺傷感染病毒的靶細胞，提高單核巨噬細胞殺死腸道病毒的作用，抑制Th2 細胞誘導的免疫應答反應，增強抗病毒能力。而同時IFN-γ也是一種致炎因子，激活單核巨噬細胞、中性粒細胞，后者分泌炎癥介質，加重炎癥反應。在本研究中，治療前患兒IFN-γ均顯著升高，治療后下降，提示病毒清除后，IFN-γ水平下降，患兒機體免疫反應減輕。IL-2 是Th1 細胞分化因子，能夠刺激NK細胞活性，發揮抗病毒作用，還能夠調節Th0細胞分化為 Th1 細胞，促進 IFN-γ分泌，抑制腸道病毒復制，提高抗病毒能力。IL-4由Th2細胞分泌，輔助B 淋巴細胞的增殖，促進IgE 合成。IL-4 能阻斷IFN-γ的活化，抑制巨噬細胞活化，增加腸道病毒的易感性。在本研究中，治療前兩組患兒IL-4 水平均顯著升高，提示其參與了腸道病毒感染過程，在手足口病的發病過程中發揮重要的作用。IL-6 參與機體的局部炎癥損傷過程，可誘導肝細胞產生急相蛋白，增強自身破壞性炎癥，是啟動炎癥反應的關鍵因子，參與血管炎癥反應以及免疫應答。在本研究中，兩組治療前IL-6 水平均顯著升高，提示這與病毒感染后誘發機體炎癥反應有關，而經過治療后，其水平顯著下降，說明機體炎癥反應隨之減輕。IL-10 是一種多重功效的嚴重抑制因子，是負性調節因子，抑制IL-2、IFN-γ的合成，上調IgM、IgG、IgA。在本次研究中治療前兩組患兒IL-10 水平顯著升高，提示其作為抗炎因子參與了病理過程，而經過治療后，隨著病情好轉，其水平也呈顯著下降的趨勢。

抗感顆粒是一種復方中藥制劑，成分主要是金銀花、赤芍、貫眾等，具有清熱解毒的作用，臨床上主要用于治療外感風熱導致的發熱、頭痛、鼻塞、咽痛、全身乏力等。研究表明，抗感顆粒對小鼠耳殼和大鼠足跖腫脹有明顯的抑制作用，能夠降低小鼠腹腔毛細血管通透性，對抗組織引起的大鼠皮膚毛細血管通透性，具有抗炎作用，抑制炎癥急性期的水腫與滲出增加，從而緩解紅、腫、熱、痛的癥狀，抗感顆粒能夠顯著降低大鼠炎性足滲出液中組織胺的含量，提示其抗炎作用可能與抑制炎癥介質組胺釋放有關［16］。研究表明，抗感顆粒具有增強免疫、抗疲勞、鎮痛的作用。現代藥理證實金銀花具有解熱、抗炎、抗病毒的作用。祝寶鋼［17］采用抗感顆粒治療手足口病患兒80 例，總有效率達到100%。邱靜［18］以抗感顆粒聯合炎琥寧治療手足口病，與常規治療比較，能夠顯著提高臨床療效。本研究結果顯示，觀察組患兒免疫功能改善更為顯著，治療后患兒病情恢復更好，炎性因子水平下降更明顯。

綜上所述，抗感顆粒（兒童裝）能夠顯著改善普通型手足口病患兒的免疫功能，降低炎性因子水平，從而改善臨床癥狀。