外周血單個核細胞Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結核患者預后的相關性分析

楊芳 ，殷衛兵 ，嚴鳴光 ，趙斌 ，王國戧

（1.商丘市第一人民醫院檢驗科，河南 商丘 476100；2.新鄉醫學院第一附屬醫院檢驗科，河南 新鄉 453100）

肺結核是由結核分枝桿菌傳染而引起的慢性傳染性疾病，是我的高發性傳染病，可累及機體多個器官，以肺部感染最常見，主要表現為午后低熱、盜汗、乏力、消瘦、咳嗽咳痰、咯血、呼吸困難等，重癥肺結核是指其癥狀嚴重的發病類型，可表現為大咯血、血行播散型肺結核、結核性腦膜炎、呼吸衰竭等，嚴重威脅國民生命健康[1,2]。研究表明，外周單個核細胞 （Peripheral mononuclear cells，PBMC）Blimp1 基因、 干擾素 γ （Interferon γ，IFN-γ）、白介素 10（Interleukin 10，IL-10）均可參與調節機體免疫炎癥反應，與肺結核疾病的發生發展密切相關[3,4]。在上述研究背景下，本研究對本院92 例重癥肺結核患者的臨床病理資料進行回顧性分析，來探討其臨床預后與 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平的關系，旨為臨床防治重癥肺結核提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料 將 2017 年 8 月-2019 年 8 月本院的重癥肺結核患者92 例作為研究對象，納入標準：均符合《肺結核診斷和治療指南》中重癥肺結核的診斷標準[5]。

排除標準：合并除肺結核外其他肺部疾病者；合并除肺結核外其他傳染性疾病者者； 合并免疫功能障礙者；合并惡性腫瘤者；臨床病理資料不全者。根據患者6 個月內臨床結局的不同分為存活組n=60 與死亡組n=32。本研究經本院醫學倫理委員會會議表決通過。

1.2 方法 收集所有患者的臨床資料，進行回顧性分析。采集兩組外周靜脈血5ml，置于抗凝管內靜置1.5h，用密度梯度離心法分離PBMC，用離心機（德國 Hettich，ROTOFIX32A） 離心 10min，轉速3000r/min，用移液槍抽取上清液置入微型離心管中,-80℃保存備用。用TRIzol 試劑提取兩組PBMC總 DNA，用 DAN 探針、 熒光定量試劑盒、PCR 儀（美國 ABI，QuantStudio3）對 PBMC Blimp1 基因進行標記、擴增，記錄Ct 值，按公式2-△Ct計算其表達水平，相關試劑盒均購自北京凱瑞基生物科技有限公司，所有操作流程均嚴格參照試劑和儀器說明書。采用酶聯免疫吸附實驗試劑法檢測患者外周血清IFN-γ、IL-10 水平，用急診血氣分析儀（美國GEM，3500）檢測患者血漿二氧化碳分壓（Partial pressure of carbon dioxide ，PaCO2）、氧分壓（Oxygen partial pressure ，PaO2）水平，相關試劑盒均購自武漢華聯科生物科技有限公司，操作流程均嚴格參照相關試劑和儀器說明書。

1.3 觀察指標 ⑴觀察比較存活組與死亡組一般資料情況的差異，包括年齡、性別、病程、吸煙史、糖尿病史、冠心病史、是否合并呼吸衰竭、PaCO2、PaO2、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平。分析影響重癥肺結核患者預后的相關因素，并進行Logistic多因素回歸分析，觀察其獨立危險因素。⑵用ROC曲線分析 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平對重癥肺結核患者臨床預后的預測價值。

1.4 統計學方法 用SPSS20.0 軟件進行統計分析，計量數據均以平均數±標準差(±s)的方式表示，采用t 檢驗。計數數據組間比較采用卡方檢驗。獨立影響因素分析采用Logistic 回歸模型。用ROC 曲線及AUC 評價指標對疾病預后的預測價值。以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯合預測重癥肺結核患者臨床預后的ROC 曲線分析ROC 曲線分析結果顯示，PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯合對重癥肺結核患者臨床預后均具有預測價值（P＜0.05），且 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 三者聯合的AUC 大于各單一指標，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。見表1，圖1。

圖1 PBMCBlimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯合預測重癥肺結核患者臨床預后的ROC曲線

2.2 死亡組與存活組一般資料比較 兩組在年齡、性別、病程、吸煙史、糖尿病史、冠心病史、PaCO2、PaO2上無明顯差異（P＞0.05），在是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 上差異明顯 （P＜0.05）。見表2。

表1 PBMCBlimp1、IFN-γ、IL-10 水平及其三者聯合預測重癥肺結核患者臨床預后的ROC曲線分析

表2 死亡組與存活組一般資料比較

2.3 重癥肺結核患者預后的Logistic 多因素回歸分析 將重癥肺結核患者存活或者死亡作為因變量，將單因素分析中差異具有統計學意義的因素（是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10）作為自變量，并進行賦值，重癥肺結核患者預后（存活=0，死亡=1），是否合并呼吸衰竭（否=0，是=1）、PBMC Blimp1 （≥1.45=0，＜1.45=1）、IFN-γ（pg/ml） （≤70.74 =0，＞70.74 =1）、IL -10 （pg/ml） （≥69.67=0，＜69.67=1），其中 PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 臨界值水平均根據ROC 曲線分析確定。將上述數據納入Logistic 回歸模型，結果顯示，是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 是重癥肺結核患者死亡的獨立影響因素 （OR=1.413、2.280、2.307、1.570，P＜0.05）。見表3。

表3 重癥肺結核患者預后的Logistic多因素回歸分析

3 討論

全世界每年的肺結核發病人數逾千萬，我國是典型的肺結核疫情高負擔國家,發病人數高居全球第2，該病傳染性強，主要通過呼吸道飛沫傳播,若不及時加以治療，病情進展至重癥肺結核后，癥狀嚴重，可造成心肺功能障礙，預后多為不良，明確影響重癥肺結核預后的相關因素對臨床防治該病具有重要意義[1]。研究表明，PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 可廣泛參與結核分枝桿菌介導的肺部炎癥反應，影響疾病進程[6]。現為探討PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結核患者預后的相關性，特做此研究。

本研究結果顯示，存活組與死亡組在是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 上差異明顯，Logistic 多因素回歸分析結果顯示，是否合并呼吸衰竭、PBMC Blimp1、IFN-γ、IL-10 是重癥肺結核患者死亡的獨立影響因素 （OR=1.413、2.280、2.307、1.570，P＜0.05），提示合并呼吸衰竭、Blimp1＜1.45、IFN-γ＞70.74pg/ml、IL-10＜69.67pg/ml 是重癥肺結核患者死亡的獨立危險因素。探究其原因，研究表明，重癥肺結核患者合并呼吸衰竭可進一步加重患者肺通氣功能障礙，造成機體缺氧、二氧化碳潴留，導致一系列生理、精神、代謝紊亂癥狀，可危及機體多個臟器功能，引起多器官功能障礙綜合征，致死率極高[7]。此外，PBMC Blimp1 基因可合成轉錄因子Blimp1 蛋白，從而發揮誘導細胞免疫，增強機體免疫力的作用，相關研究表明，Blimp1 屬于鋅指蛋白基因家族的一員，具有5 個鋅指結構，可誘導B 淋巴細胞增殖分化，促進特異性抗體的合成與分泌，調節機體免疫功能，Blimp1 表達水平過低可抑制患者機體免疫球蛋白的合成，增強肺結核疾病活動性，不利于患者臨床預后[8]。另外，IFN-γ 是一種具有抗病毒、 抗腫瘤作用的細胞因子，可在細菌內毒素環境下誘導各種炎癥因子的合成與分泌，調節機體免疫炎癥系統，其表達水平過高可能預示重癥肺結核患者病情較重，體內結核菌素合成分泌旺盛，導致IFN-γ 水平適應性增高[9]。最后，IL-10 是目前公認的抑炎因子，具有抑制機體炎癥因子合成釋放，降低炎癥損傷的作用，其表達水平降低可導致機體對結核桿菌的免疫殺傷力降低，肺部炎癥損傷加重，提高患者死亡率[10]。

本研究ROC 曲線分析結果顯示，Blimp1、IFN-γ、IL-10 及其三者聯合對重癥肺結核患者臨床預后均具有預測價值，且 Blimp1、IFN-γ、IL-10 三者聯合的AUC 大于各單一指標，差異均具有統計學意義，提示 Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結核患者臨床預后密切相關，對重癥肺結核患者臨床預后可能具有一定的預測價值。探究其機制，肺結核的主要發病機制是結核桿菌感染引起機體T細胞介導的免疫反應與遲發型性過敏反應，反應過程生成大量炎性細胞因子，前者對結核桿菌形成免疫殺傷力，后者對患者肺部組織造成炎癥損傷，這兩種反應的劇烈程度對肺結核患者病情的轉歸與預后起到決定性作用[11]。研究表明，Blimp1可促進T 細胞的增殖分化，調節Th1/Th2 細胞失衡，增強機體細胞免疫[12]；IFN-γ 可激活巨噬細胞活性，促進炎癥因子的分泌，加重炎癥損傷[13]；IL-10 可以抑制巨噬細胞的抗原呈遞作用，抑制炎癥因子釋放，減輕炎癥損傷[14]，三者均對重癥肺結核患者機體T 細胞介導的免疫反應與遲發型性過敏反應產生重要影響，從而一定程度上決定著患者的臨床預后。Liu Y 等人[15]的研究表明，Blimp1 對診斷肺結核活動性，評價其臨床預后具有重要價值；Basingnaa A 等人[16]的研究表明，IFN-γ、IL-10水平預測對肺結核患者臨床預后的敏感度為0.728，特異度為0.866，差異均具有統計學意義（P＜0.05）；按上述研究報道均與本研究結果相符合。

綜上所述，合并呼吸衰竭、Blimp1＜1.45、IFN-γ＞70.74pg/ml、IL-10＜69.67pg/ml 是重癥肺結核患者死亡的獨立危險因素，Blimp1、IFN-γ、IL-10 水平與重癥肺結核患者臨床預后密切相關，該結論與國內外研究報道基本一致，Blimp1、IFN-γ、IL-10作為客觀、可量化的實驗室指標，打破了臨床長久以來對重癥肺結核患者預后經驗性判斷的模式，將有望成為臨床預測重癥肺結核患者預后的新指標。