EGFR基因在肺微浸潤性腺癌中的突變特征及意義

孫小敏，王敏，李宏春

（安陽市人民醫院檢驗科，河南 安陽 455000）

肺癌作為呼吸系統常見惡性腫瘤,其發病率及死亡率日增,已成為嚴重威脅人群健康的惡性腫瘤之一。該病病因及發病機制不明，吸煙、職業暴露、電離輻射、既往肺部慢性感染、遺傳因素及大氣污染等均屬其發病相關危險因素,依據其組織病理特點可分為肺鱗狀細胞癌、肺腺癌、肺未分化癌、肺泡細胞癌等類型[1,2]。肺腺癌（lung adenocarcinoma，LAC）屬非小細胞肺癌重要亞型，常見發生于女性及不抽煙者[3]。LAC 治療目前仍以外科手術、放化療為主，以實現腫瘤根治及最大限度控制、提高生存率、改善生存質量、延長生存期為主要治療原則[4]。以表皮生長因子受體（英文全稱，EGFR）為靶點的生物靶向治療（酪氨酸激酶抑制劑，EGFR-TKIs）因其治療特異性及有效性日益受到重視[5]。既往研究發現EGFR 基因的人群突變率約10~50%[6,7]。雖組織病理表現可一定程度上提示EGFR 基因情況,但仍需行相應EGFR 基因檢測以了解其具體突變情況。因篩查技術的進步，諸如原位腺癌、微浸潤性腺癌（英文全稱，LMIA）等肺腺癌早期類型可見檢出,了解其EGFR 基因突變情況并給予及早治療可顯著改善患者預后[4]。本研究旨在了解LMIA 的EGFR 基因突變情況及其相應組織病理特點間的關聯，為臨床進一步診療方案制定提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集 2016 年 1 月至 2018 年 10 月本院經治 LMIA 90 例，其中男 40 例，女 50 例，發病年齡范圍38~75 歲，中位年齡55 歲。納入標準：所有患者均符合2018 版《中華醫學會肺癌臨床診療指南》[8]所述LMIA 診斷標準；均經病理活檢確診為LMIA；病歷資料完整；腫瘤標本可獲取；術前均未給予放療、化療及生物治療等；患者或患者家屬了解本研究并簽署知情同意書。排除標準：合并其他系統惡性腫瘤者；近期給予相應抗腫瘤治療者；合并高血壓、腦梗等心腦血管疾病者；患者神志不清或明確表示拒絕入組者。收集所有病例的臨床及病理資料與術后腫瘤組織樣本。計算吸煙指數（即日吸煙支數×吸煙年限），≥400 者屬吸煙病例，相反則為非吸煙病例。本研究得到醫院醫學倫理委員會的批準。

1.2 EGFR 基因突變檢測

1.2.1 檢測試劑及儀器 QIAamp DNA FFPE Tissue Kit 試劑盒（Qiagen 公司生產）；人 EGFR 基因突變檢測試劑盒 （上海透景生命科技股份有限公司生產）；752N 可見/紫外分光光度計（北京海天友誠科技有限公司生產）。

1.2.2 檢測方法 應用QIAamp DNA FFPE Tissue Kit 試劑盒從LMIA 標本組織中提取DNA，并應用752N 可見/紫外分光光度計檢測DNA 濃度及純度。根據人EGFR 基因突變檢測試劑盒說明書提示，采用RT-PCR 的方法檢測已提取DNA 樣本中EGFR 突變基因（主要檢測 19Del 及 L858R）。

1.3 統計學方法 采用SPSS 23.0 對所有數據進行統計學分析。計數資料采用率（%）表示，并采用Pearson 相關分析兩組間相關性。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 LMIA 中EGFR 基因突變情況 共發現野生型25 例（27.78%），突變型 65 例（72.22%）。突變型中，32 例 19Del 突變（突變率 35.56%）,30 例 L858R 突變（突變率 33.33%）,另有3 例外顯子 18 G719X 點突變（突變率3.33%）。

2.2 LMIA 中EGFR 基因突變與病理參數間的關聯 EGFR 突變與腫瘤尺寸、 病灶纖維化及病灶炎癥細胞浸潤間均存在關聯（P 均＜0.05），而與性別、年齡、吸煙情況、病灶數量、病灶位置及病理亞型間均無關聯（P 均＞0.05）。見表1。

表1 LMIA中EGFR基因突變與病理參數間的關聯

2.3 LMIA 中EGFR 基因突變亞型與病理參數間的關聯19Del 基因突變與年齡、病灶位置、腫瘤尺寸、 病理亞型及病灶纖維化間均存在關聯 (P 均＜0.05),而與性別、吸煙情況、病灶數量及病灶炎癥細胞浸潤間均無關聯(P 均＞0.05)。L858R 基因突變與腫瘤尺寸、 病理亞型及病灶炎癥細胞浸潤間均存在關聯性(P 均＜0.05),而與性別、年齡、吸煙情況、病灶數量、病灶位置及病灶纖維化間均無關聯（P 均＞0.05）。見表2。

3 討論

肺腺癌作為主要非小細胞肺癌類型,其組織學特征及基因突變情況存在較強異質性[9,10]。LMIA 作為肺腺癌重要亞型,其主要是指肺泡壁出呈孤立性生長、直徑≤3cm 的腫瘤細胞團塊，且病灶內可見至少 1 個的浸潤灶（直徑≤0.5cm）[8]。臨床診療中，LMIA 因其常無明顯臨床特征而易漏診。既往研究發現EGFR 是肺腺癌的主要突變基因位點,亞洲人群發生率約46.9%,而在不吸煙女性中發生率＞16.2%[10],肺腺癌靶向治療的主要作用靶點即為EGFR。既往研究發現EGFR 敏感性肺腺癌給予EGFRTKIs 治療后,疾病無進展生存期可顯著延長，且可顯著提高患者生活質量[4,11]。EGFR-TKIs 已成為術后復發性肺腺癌及晚期EGFR 敏感性肺腺癌的一線治療選擇[4]。Yoshizawa 等[12]研究發現 EGFR 基因突變常見于LMIA，其主要突變類型包括19Del 與L858R。本研究所示EGFR 基因突變發生率為72.22%，其中 19Del 突變率 35.56%，L858R 突變率33.33%，與既往研究基本一致[13]，此外本研究還發現 3 例 18 G719X 點突變。我國 EGFR 基因突變情況較為常見[14]。EGFR 基因突變是給予EGFR 靶向酪氨酸酶抑制劑能否取得預期療效的重要預測因素，治療前明確其突變情況可增加臨床決策效能、改善患者預后[15]。本研究發現EGFR 突變與腫瘤尺寸、 病灶纖維化及病灶炎癥細胞浸潤間均存在關聯（P 均＜0.05）；19Del 基因突變與年齡、病灶位置、腫瘤尺寸、 病理亞型及病灶纖維化間均存在關聯（P 均＜0.05）；L858R 基因突變與腫瘤尺寸、病理亞型及病灶炎癥細胞浸潤間均存在關聯性 （P 均＜0.05）；提示腫瘤尺寸、病理亞型、病灶纖維化及病灶炎癥細胞等因素與EGFR 基因突變特征間存在一定的關聯性,且EGFR 整體基因突變情況與不同突變亞型間存在差異,其具體差異對比情況尚需進一步研究去了解、證實。

表2 LMIA中EGFR基因突變亞型與病理參數間的關聯

綜上，LMIA 中EGFR 基因突變發生率較高，整體及不同突變亞型與部分臨床特征因素間存在一定關聯。