羅氏cobasE602 發光檢測系統檢測項目的溯源研究

沈素晶，葉青，李靄文，鄧超，譚俊青

（廣東省第二中醫院檢驗科，廣東 廣州 510095）

電化學發光系統具有性能穩定、準確度高、重復性好、靈敏度高等特點，可測定內分泌激素、腫瘤標志物、心血管疾病標志物、血藥濃度和傳染病等項目[1-4]，近年來也為各大實驗室應用。不難發現，一個實驗室同時使用幾個不同的發光檢測系統也是常事。因此各檢測系統間的可比性和結果的同質性研究也成了臨床檢驗工作中一個亟需解決的問題[5,6]。對新建檢測系統的溯源是一個復雜而且必需的過程，同時也需要投入大量的人力、物力和財力。而技術不成熟也將對人力和財力造成較大的浪費。本文將對實驗室新引進的羅氏cobas E 602 發光檢測系統與已溯源的目標檢測系統雅培I 2000 進行一次系統的溯源比對試驗，驗證其性能及是否滿足臨床需求； 也為臨床檢驗進行溯源性研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 ⑴檢測系統。新建檢測系統：Roche cobas E 602 電化學發光檢測儀模塊及其配套校準物、試劑和第三方朗道質控物 目標檢測系統：雅培I2000 化學發光檢測儀，雅培試劑、校準品和質控品)。選擇的5 個具有代表性的檢測項目作為檢測對象，T3、T4、CEA、CA125II、ProgIII，五個項目分別代表內分泌系統，腫瘤標志物及性激素。本次溯源用到的羅氏E 602 檢測系統的試劑，校準品，質控品批號，見表1。

表1 5 個檢測項目的試劑，校準品，質控品批號

1.2 方法 ⑴可報告范圍分析：從患者的血清樣品中分別挑選5 個檢驗項目的低值(L)和高值(H)樣本，高值濃度達廠家說明書線性范圍的上限，低值樣品濃度盡可能低，將 H 和 L 樣品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、lL+4H、0.5L +4.5H、5H 的比例混合配制，形成7 個系列濃度的實驗樣品。7 個待測樣品濃度呈比例關系并涵蓋說明書的線性范圍。每個濃度的樣品均重復6 次測定，前3 次由低到高進行，后3 次順序相反。首先計算出混合的待測樣品的濃度作為這些樣品的預期值，再與這些樣品的實際測定值進行回歸關系驗證； 確認是直線回歸關系且具有相關性(P＜0.05)后，計算相關系數(r)和直線回歸方程(Y=bX+a)的斜率b 和截距a，最后作截距a 檢驗，確認差異無統計學意義(P＞0.05)。

⑵精密度的測定:選擇與患者標本相近且性能穩定的第三方質控品：朗道質控品,作為批內和批間精密度檢測的樣本。在羅氏和雅培兩個檢測系統的第三方質控均在控的前提下,5 個待檢項目每天檢測1 次,連續檢測20d,累積得到20 個結果，經計算得到20 個數據的CV 值, 即是各個項目在兩個系統的日間精密度。另外將待測樣品隨機插入患者標本一起檢測,一個批內選4 個時間段，每個時間點連續測5 次，總共得到20 個數據,經計算得出CV 值即是待測項目在兩個系統的批內精密度。

⑶準確度的分析： 為5 個溯源項目分別隨機選取2O 份患者標本，標本濃度分布盡量覆蓋項目的可報告范圍，其中濃度在參考區間內外各1O份。每天分別在規定時間內檢測選取的標本4 份，每份標本一分為二，分別在雅培I2000 和羅氏cobas E 602 檢測系統上檢測。先按 l、2、3、4 順序測1 次，然后相反順序再測1 次，以相同的方法連續檢測5d。對所得的數據先進行離群值分析，剔除離群值后進行直線回歸與相關分析，得直線回歸方程(Y=bX+a)和相關系數(r)。

⑷臨床可接受性分析： 將5 個檢測項目的臨界值分別代入各自相應的回歸方程得相應的Y值，SE=Y-X, %SE=—Y-X｜/X*100%判斷臨床的可接受性。

⑸統計學處理： 不同檢測系統的質控及血清標本的測定結果統計采用隨機區組設計資料的方差分析、可靠性分析、相關分析和回歸分析。所有數據均在Excel 2000 和SPSS 20.0 軟件包上進行。

2 結果

2.1 可報告范圍；5 個檢驗項目的測定值與理論值間的回歸方程均為直線回歸檢驗，且具有相關性(P＜0.05)。回歸直線斜率 b 在 1.0±0.03 范圍內，截距a 檢驗均無統計學意義 (P＞0.05)； 相關系數r 均＞0.975，說明直線回歸統計的斜率和截距可靠；見表2。經驗證，5 個檢驗項目廠家說明書提供的線性范圍可以作為Roche cobas E 602 化學發光檢測系統的可報告范圍，見表3。

表2 5 個檢驗項目的回歸方程和相關系數

表3 5 個檢驗項目驗證的線性范圍與說明書線性范圍比較

2.2 精密度 按照設計的方法分別計算的羅氏C 602 檢測系統和雅培I2000 檢測系統的批內和批間的精密度，兩者均能滿足文件對不精密度的要求，結果見表4～7。

表4 羅氏cobasE602 檢測系統批內精密度實驗結果

表5 羅氏cobasE602 檢測系統批間精密度實驗結果

表6 雅培I2000 檢測系統批內精密度實驗結果

表7 雅培I2000 檢測系統批間精密度實驗結果

2.3 準確度 去除離群值后進行直線回歸與相關分析，得直線回歸方程Y=bX+a 和相關系數(r)。r均＞0.975，說明直線回歸統計的斜率和截距可靠，可以用于回歸統計。見表8。

表8 5 個項目用于驗證不確定度的回歸方程和相關系數

2.4 檢測系統可接受性能分析結果與結論 將5個檢測項目的臨界值分別代入各自相應的回歸方程得相應的Y 值，與雅培系統比較其偏倚。系統間比對結果的誤差全部小于CLIA 88 允許誤差的1/2，結果臨床全部能夠接受。見表9。

表9 5 個項目的評價

3 討論

電化學發光免疫測定法發展于1996 年，它在發光反應中加入了電化學反應，是繼放射免疫、酶免疫、 化學發光免疫測定之后的新一代標記免疫測定技術，是電化學和免疫測定相結合的產物，具有高敏感度，精密度，高準確度的特點，也是世界公認的最先進的臨床免疫檢測技術[7-10]。因此各大醫院也相繼引進電化學發光檢測系統； 但由于其試劑成本高,很少實驗室可以對系統進行完整的溯源性研究。本文參照EP9 文件要求[11,12]，選擇了羅氏E 602 檢測系統常規項目中的5 個代表性項目進行驗證，結果顯示新建檢測系統羅氏cobas E 602 的精密度，準確度，可報告范圍及臨床可接受度均具有良好的溯源性，可投入臨床使用。隨著科技不斷發展，檢驗儀器推陳出新速度也不斷加快，實驗室同個系列項目同時使用幾臺儀器也常見，檢測系統間的可比性也成為頭等任務。不少廠家也有提供一定的溯源性資料,若實驗室直接使用廠家的數據,不僅不夠嚴謹，也為實驗室埋下隱患，有可能掩蓋了實驗室一些不穩定因素。因此每個實驗室為儀器作溯源性研究也是必要的。本文就科室新引進的羅氏E 602 發光檢測系統進行系統的溯源性研究，驗證其性能，達到結果的可比性[13-15]為臨床治療和診斷提供指導。