血清CCL20 與失代償期肝硬化患者肝纖維化的相關性

吳輝

（河南省駐馬店市中醫院檢驗科，河南 駐馬店 463000）

失代償期肝硬化的發生、發展受多因素長期、反復刺激，加重肝臟組織上炎癥反應程度，導致肝臟組織產生彌漫性損害[1]。文獻指出，失代償期肝硬化患者肝臟組織損傷修復期間使細胞外基質產生降解-沉積紊亂，促使肝內結締組織異常增生，加重肝纖維化程度，不利于預后[2]。因此，早期準確預測失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險被認為是指導治療的關鍵。趨化因子是分泌蛋白，該因子及其受體可調節免疫細胞遷移及滯留，能夠穩定免疫功能[3]。CC 家族趨化因子配體20（CC-chemokine ligand 20，CCL20） 是趨化因子 CC 家族重要組成,目前已被證實在機體肝臟組織中表達[4]。文獻指出，正常情況下，CCL20 在機體內呈低表達，若機體受到部分微生物刺激，CCL20 能夠被多種炎癥因子及免疫受體介導呈高表達狀態[5]。此外，CCL20 也屬于促炎趨化因子，能夠在病理條件下大量生成，并積極參與炎癥反應，吸引免疫細胞到達炎癥部位[6]。由此推測，CCL20 與失代償期肝硬化的肝纖維化程度有一定內在聯系，但具體機制尚不清楚，相關研究也較少。本研究主要觀察失代償期肝硬化患者CCL20 水平及肝纖維化比例面積，并分析血清 CCL20 水平與肝纖維化程度的關系，以指導未來失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險的早期預測及干預，旨在提高失代償期肝硬化的治療獲益。報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取 2018 年 1 月-2019 年 12 月期間我院接受治療的69 例失代償期肝硬化患者作為觀察組；并選取同期于我院接受治療的67 例代償期肝硬化患者作為對照組。觀察組女41 例，男28 例；年齡 40~59 歲，平均年齡 53.50±3.15 歲；體質量 52.95~65.12kg，平均體質量 59.24±4.23kg。對照組女 38 例，男 29 例；年齡 40~59 歲，平均年齡52.99±3.63 歲；體質量 52.49~65.36kg，平均體質量58.89±4.35kg。統計學對比兩組上述一般資料，差異無統計學意義（P＞0.05）。本次研究設計內容經我院倫理委員會批準同意實施。

納入標準：⑴所有肝硬化患者均符合《AASLD成人肝硬化腹水治療指南2012 年修訂版》[7]內相關診斷標準；⑵患者及家屬均知曉本次研究內容，且簽署知情同意書；⑶接受肝穿刺檢查的患者。

排除標準： ⑴合并重要臟器功能不全或相關疾??；⑵合并精神異常影響研究配合度；⑶服用其他藥物可能影響肝纖維化程度評估； ⑷合并惡性腫瘤。

1.2 指標檢測方法 ⑴血清CCL20 水平檢測方法：分別于患者入院第二天早晨在其空腹狀態下抽取5ml 外周肘靜脈血，使用TD5A 自動脫蓋離心機（長沙英泰儀器有限公司），3000r/min 離心10min取血清，經酶聯免疫吸附法檢測，試劑盒由合肥萊爾生物科技有限公司提供。⑵肝纖維化比例面積：經肝穿刺技術評估全部患者肝纖維化程度： 穿刺前晚上患者接受相關實驗室檢查，穿刺時常規消毒穿刺區域，采用2%鹽酸利多卡因注射液（國藥集團容生制藥有限公司, 生產批號20171229，規格：5ml/支）對患者實施局部浸潤麻醉，經穿刺針取出患者1-2 條肝臟組織后采用福爾馬林液體中固定，經4h 后對肝臟組織進行病理檢查：參照相關文獻[9]，依據肝纖維化比例面積，輕度：肝纖維化比例面積≤22%； 中度：22%＜肝纖維化比例面積≤48%；重度：＞48%。⑶實驗室指標的檢測方法：分別于觀察組患者入院第二天早晨，空腹抽取5ml 外周肘靜脈血，3000r/min 離心10min 取血清，經酶聯免疫吸附法檢測血清轉化生長因子-β1（Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1）、白細胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）及血管緊張素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ，AngⅡ）水平。⑷基線資料收集方法：分別記錄兩組患者基線資料，包括年齡、性別（女/男）、體質量及肝硬化病程。

1.3 統計學方法 采用SPSS24.0 軟件進行數據處理，全部計量資料均經Shapiro-Wilk 正態性檢驗，符合正態分布的資料以表示，組間用獨立樣本t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q 檢驗，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，影響因素分析采用Logistic 回歸分析檢驗；繪制受試者工作曲線（ROC），檢驗血清 CCL20水平預測失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險的價值，以曲線下面積 （AUC） 評價，AUC≤0.50：無預測價值，0.50＜AUC＜0.70：預測價值較低，0.70＜AUC＜0.90：預測價值中等，AUC＞0.90：預測價值較高，P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組血清CCL20 水平及肝纖維化比例面積比較 觀察組血清CCL20 水平高于對照組，肝纖維化比例面積大于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 觀察組與對照組血清CCL20 水平及肝纖維化比例面積比較（±s）

表1 觀察組與對照組血清CCL20 水平及肝纖維化比例面積比較（±s）

組別 CCL20（pg/ml）觀察組（n=69）對照組（n=67）t P 86.72±30.64 20.95±13.56 16.104 P＜0.001肝纖維化比例面積（%）36.68±17.35 27.85±16.24 3.062 0.003

2.2 失代償期肝硬化患者肝纖維化程度情況 本次69 例失代償期肝硬化患者中，輕度肝纖維化患者 24 例，占比為 34.78%（24/69），中度肝纖維化患者 28 例，占比為 40.58%（28/69），重度肝纖維化患者 17 例，占比為 24.64%（17/69）。

2.3 影響肝纖維化程度的單因素分析結果 初步單因素分析結果顯示，年齡、性別、體質量、病程與失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重無關 （P＞0.05）； 血清 CCL20、TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ可能是失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重的影響因素（P＜0.05）。見表2。

2.4 影響肝纖維化程度的Logistic 回歸分析結果將失代償期肝硬化患者血清CCL20 水平作為協變量，肝纖維化程度作為因變量（1=中、重度肝纖維化，0=輕度肝纖維化），經Logistic 回歸分析結果顯示，血清 CCL20、TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ過表達是失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重的影響因素（OR＞1，P＜0.05），其中，血清 CCL20 過表達帶來的影響最為顯著（OR=10.041），可作為獨立危險因素。見表3。

表2 影響肝纖維化程度的單因素分析結果

2.5 血清CCL20 水平對肝纖維化程度的預測效能將失代償期肝硬化患者血清CCL20 水平作為檢驗變量，肝纖維化程度作為狀態變量（1=中、重度肝纖維化，0=輕度肝纖維化），繪制ROC 曲線（見圖1）結果顯示，血清CCL20 水平預測失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險的AUC 為：0.842（AUC 的 95%CI：0.735~0.949），＞0.80，預測價值較理想，在指標取最佳閾值124.235pg/ml 時，可獲得最佳的特異度、靈敏度，分別為：0.958、0.889，約登指數：0.847。

表3 影響肝纖維化程度的Logistic回歸分析結果

圖1 血清CCL20 預測失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險的ROC曲線圖

3 討論

文獻指出,失代償期肝硬化患者均伴有不同程度的肝纖維化,嚴重肝纖維化程度可加重肝臟組織的受損程度，增加生理活動紊亂風險[10]。此外，有研究證實,肝纖維化程度控制不佳者發生肝性腦病風險較高，嚴重威脅患者的生命健康[11]。為提高失代償期肝硬化整體治療效果，臨床指出，可以早期評估失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險，并給出針對性建議，指導治療方案的擬定，繼而提高干預效果。

肝纖維化是多種病理性肝病的共同特征，嚴重肝纖維化可加重失代償期肝硬化肝臟組織的受損程度，增加肝衰竭的發生風險，不利于預后[12]。本次研究結果顯示,觀察組肝纖維化比例面積大于對照組。表明失代償期肝硬化患者的肝纖維化程度顯著。目前，肝纖維化的發病原因及機制仍尚無明確定論，但有研究指出，肝纖維化的發生、發展與多種血液性細胞因子密切相關[13]。近年來，有研究指出，致炎因子在肝纖維化的發生、發展中起著關鍵性作用，而 TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ是常見的致炎因子[14]。故推測血清 TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ異常表達可能參與了失代償期肝硬化患者肝纖維化程度的發生與發展。本次研究經初步單因素分析及Logistic 多因素分析結果顯示,血清 CCL20、TGF-β1、IL-1β 及 AngⅡ均是失代償期患者肝纖維化程度加重的影響因素。作為一種致炎因子，AngⅡ可促使細胞外基質迅速合成及大量增殖，加速肝纖維化的形成[15]。TGF-β1 對肝星狀細胞具有極強的活化作用, 文獻指出，TGF-β1 能夠誘導細胞分化，促使纖維細胞的轉化，加快肝纖維化的進程[16]。IL-1β 是一種促炎因子,可誘導肝臟發生炎癥反應,活化肝星狀細胞，加重肝纖維化程度[17]。但進一步對比上述各指標對肝纖維化程度加重帶來的影響發現, 血清 CCL20 過表達是影響失代償期患者肝纖維化加重的獨立因素,說明炎性指標雖然參與了失代償期肝纖維化程度的發生、發展，但其可能受到患者其他基礎性疾病的影響,對檢測結果產生干擾，影響研究的可靠性。而CCL20 是一種由細胞分泌的小細胞因子或信號蛋白,可以誘導臨近反應細胞定向趨化的能力,且不易受患者合并基礎疾病等因素影響，檢測結果更為準確。

肝纖維化是多種肝臟損傷后肝臟自我修復過程中常會出現的過程，研究指出，趨化因子對肝臟自我修復過程中的調節及維護具有重要作用[18]。CCL20 是趨化因子CC 家族主要的成分之一，通常在肝臟組織中表達。研究顯示，CCL20 可顯著降低相關部位的防御能力, 加重炎癥反應的發生程度[19]。本次研究結果顯示，觀察組血清 CCL20 水平高于對照組, 初步表明CCL20 與失代償期肝硬化患者肝纖維化程度密切相關。究其原因，CCL20 可在病理條件下聚集炎癥細胞到達肝臟組織,參與肝臟組織處的炎癥反應。同時,作為CCL20 唯一的受體,CCR6 在免疫及炎癥反應中具有重要作用。此外,相關研究顯示，T 細胞及樹突細胞在機體炎癥反應中具有重要作用,而CCL20 及其受體CCR6 能夠吸引記憶/效應T 細胞及未成熟的樹突細胞，促使記憶/效應T 細胞及未成熟的樹突細胞大量聚集,促使肝臟部位發生多種炎癥反應, 加重肝纖維化程度[20]。CCL20 可受白細胞介素-17、C 反應蛋白等多種炎性因子的調控, 經炎性因子的介導后CCL20 在機體中可呈高表達狀態,進而進一步加重肝臟部位的炎癥反應，不利于預后。為了更進一步明確CCL20與失代償性肝硬化患者肝纖維化程度的關系，本研究繪制ROC 曲線發現，血清 CCL20 水平預測失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重風險的AUC為：0.842，＞0.80，預測價值較理想。上述結果證實，CCL20 與失代償性肝硬化患者肝纖維化程度有關,可作為失代償性肝硬化患者肝纖維化程度加重風險預測指標。但值得注意的是，本次研究樣本量較少，加之國內外相關研究更不多見，結果的準確性仍缺少較多循證依據可支持,仍需要在未來開展大樣本、長時間的研究加以佐證。

綜上所述,失代償期肝硬化患者肝纖維化程度加重可能與血清 CCL20 過表達有關, 臨床可考慮通過檢測失代償期肝硬化患者血清 CCL20 水平，來預測患者肝纖維化程度加重風險,以指導早期風險評估與防治，可能對減輕失代償期肝硬化患者的肝纖維化程度有積極意義。