支氣管肺炎患兒T淋巴細胞和NK細胞水平與疾病嚴重程度關系

肖凌云，慕珂珂，魏曉杰

（中國人民解放軍聯勤保障部隊第九八八醫院檢驗科，河南 鄭州450007）

小兒支氣管肺炎是臨床兒科常見的呼吸道疾病，其病癥具有高發病率和高死亡率的特征，會嚴重影響到患兒身體健康正常發育。小兒支氣管肺炎的致病因素多與患兒自身器官尚未發育完善和免疫功能低下感染細菌、支原體等所導致，病情發展嚴重時會對患兒的生命安全造成嚴重威脅[1]。普通支氣管肺炎的病情較輕,在發展成重癥支氣管肺炎病情會快速進展，累及到多個臟器，治療的療效會欠佳。對小兒支氣管肺炎的患兒在早期進行診斷進行及時的合理治療對患者的預后有著重要意義。根據對小兒支氣管肺炎的發病機制進行研究，目前認為除了外來病原體的直接侵害與患者的機體免疫所相關，患兒自身的免疫系統、免疫功能所發育尚未健全才是小兒支氣管肺炎發展的重要原因[2]。對機體細胞免疫水平進行分析判斷的重要指標就是對淋巴細胞亞群進行檢測,對當前機體的免疫狀態、功能可進行準確反映[3]。對淋巴細胞亞群的檢測采用流式細胞術，其具有敏感、特異、高通量、單細胞分析、多參數等優點。本研究對T 淋巴細胞亞群與NK 細胞在小兒支氣管肺炎中的變化及意義進行探討，選取了2015 年2 月-2019 年8月我院收治的80 例支氣管肺炎患者的病例進行回顧性研究分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2015 年 2 月-2019 年 8 月我院收治的80 例支氣管肺炎患兒作為研究對象，分別為普通肺炎組與ICU 重癥肺炎組。普通肺炎組53 例患兒，男 32 例，女 21 例，年齡為 1～8 歲，平均年齡為 4.63±2.75 歲，支氣管肺炎病程為 1～7 天，平均病程為4.73±2.64 天，臨床表現：發熱48 例、咳嗽 50 例、啰音 45 例、氣喘 47 例、肺部 X 線陰影51 例 。重癥肺炎組 27 例患兒,男 16 例，女 11 例，年齡為 1～8 歲，平均年齡為 4.82±2.51 歲，支氣管肺炎病程為 1～15 天，平均病程為 5.16±3.01 天，臨床表現：發熱 26 例、咳嗽 25 例、啰音 25 例、氣喘24 例、肺部X 線陰影27 例；一般資料經統計學處理，計算結果差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 納入及排除標準

1.2.1 納入標準 ⑴所有均病患符合《實用兒科學》中對小兒支氣管肺炎的診斷標準[4]。⑵均為近兩周無感染史患兒。⑶均經胸部X 線檢查確診。⑷家屬均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 ⑴于1 個月內存在免疫藥物治療史。⑵合并患有較為嚴重肝腎系統、 心力衰竭障礙、先天性免疫系統障礙的患兒。⑶合并患有其他器質性病變及嚴重應激狀態。

1.3 方法 兩組患者均于入院后空腹采用真空抗凝管外周抽取靜脈血。每例患者抽取的血液標本對應兩支流式專用管，編號A、B。將試劑CD3/CD8/CD45/CD4 20μL，與抗凝全血混勻 50μL；將 CD3／CD1 6+56／CD45／CD19 20μL 加入 B 試管中，與抗凝全血混勻50μL，均置于螺旋振蕩器上再次進行充分混勻。放置于室溫（20～25℃）避光處反應15 分鐘。將1X FACS 溶血素加入每根試劑管0.45ml，混勻后放置室溫避光處反應15min, 進行離心分離。將生理鹽水0.5ml 加入試管中混勻，放入流式細胞檢測儀即可檢測出患者NK 細胞、B 淋巴細胞、T淋巴細胞。

1.4 觀察指標 ⑴對兩組患者進行外周血T 淋巴細胞亞群變化檢測。⑵對兩組患者進行外周血NK細胞、B 淋巴細胞變化檢測。⑶對兩組患者臨床不適癥狀發生持續時間進行比較。

1.5 統計方法：本試驗采取統計學軟件SPSS21.0 進行統計分析，其中計數資料用（%）表示，技數+資料采用 χ2檢驗，計量資料采取“（±s）”表示，血糖值為計量資料，用t 檢驗，檢驗水平為0.05。

2 結果

2.1 兩組患者一般資料比較 對普通肺炎組與重癥肺炎組年齡、性別、病程一般資料進行比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者一般資料比較（±s）[n(%)]

表1 兩組患者一般資料比較（±s）[n(%)]

組別 n 病程（天） 年齡(歲)性別男女臨床表現發熱 咳嗽 氣喘 啰音 肺部X 線陰影普通肺炎組重癥肺炎組t P 53 27- -16 19 0.009 0.923 25 22 4.73±2.64 5.16±3.01 0.656 0.513 4.63±2.75 4.82±2.51 0.712 0.478 48 26 0.847 0.358 50 25 0.093 0.760 47 25 0.304 0.581 45 24 0.239 0.625 51 27 1.045 0.307

2.2 比較兩組患者T 淋巴細胞亞群比較 普通肺炎組與重癥肺炎組CD8+無顯著性變化，比較差異無統計學意義 （P＞0.05），普通肺炎組 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表達水平均明顯高于重癥肺炎組，比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者T淋巴細胞亞群比較(±s，%)

表2 兩組患者T淋巴細胞亞群比較(±s，%)

組別普通肺炎組重癥肺炎組n 53 27 t P--CD3+68.47±5.21 54.31±7.68 9.746＜0.001 CD4+ CD8+37.55±2.13 32.36±3.41 8.356＜0.001 26.37±3.58 25.81±4.72 0.592 0.555 CD4+/CD8+1.49±0.27 1.25±0.41 3.138 0.002

2.3 兩組患者NK 細胞與B 細胞比較 普通肺炎組NK 細胞CD16+CD56+表達水平明顯高于重癥肺炎組, 普通肺炎組B 細胞CD19+表達水平明顯低于重癥肺炎組,比較差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 兩組患者NK細胞與B細胞比較(±s，%)

表3 兩組患者NK細胞與B細胞比較(±s，%)

組別普通肺炎組重癥肺炎組CD16+CD56+53 27 n t P--14.47±5.31 8.31±7.28 4.314＜0.001 CD19+16.35±4.81 21.74±3.55 5.145＜0.001

2.4 兩組患者臨床癥狀持續時間比較 普通肺炎組患者臨床癥狀出現咳嗽、發熱、啰音、氣喘、肺部X 線陰影的持續時間均明顯低于重癥肺炎組患者，比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表4。

3 討論

在支氣管肺炎據病情可分為普通型及重癥型兩大類別,而重癥型肺炎是兒童最主要的死亡原因之一[5]。近年以來，臨床在抗感染治療上已取得了較大進步,但是重癥型支氣管肺炎依舊是呼吸系統感染臨床治療的挑戰。對支氣管肺炎患兒進行早期診斷對癥治療是對支氣管肺炎的高病死亡率進行有效降低的關鍵,對患者預后判斷有著重要的價值[6]。據研究，支氣管重癥肺炎患者的發生與病情發展的過程中不僅有病原菌的感染參與,更與患者自身的炎癥因子過度表達有一定的關聯性，患者自身機體大量炎癥因子的釋放會引發全身性的炎癥反應綜合征[7-9]。支氣管肺炎患者機體急性反應是內源性致熱源和重要的炎癥介質,均主要是由一些細胞因子進行，其細胞因子均可由T 淋巴細胞、B 淋巴細胞、單核細胞、肺泡巨噬細胞等產生，會起到增強患者自身機體破壞炎癥的效用[10]。

表4 兩組患者臨床癥狀持續時間比較（±s，d）

表4 兩組患者臨床癥狀持續時間比較（±s，d）

組別 n 咳嗽 發熱 啰音 氣喘 肺部X 線陰影普通肺炎組重癥肺炎組53 27 t P- -5.27±0.73 8.64±0.54 21.189＜0.001 3.41±0.67 5.36±0.51 13.275＜0.001 6.41±0.74 7.18±0.62 4.637＜0.001 5.39±0.72 6.88±0.91 7.992＜0.001 7.42±1.33 9.02±1.61 4.734＜0.001

據研究，支氣管肺炎的發病機制除了病原體對患兒自身機體的直接侵害還和患兒的機體免疫功能所相關[11]。外周血淋巴細胞亞群與年齡有一定的關聯，特別是嬰幼兒，小兒尚未發育完全的免疫系統也是其容易發生呼吸道疾病感染的重要因，而支氣管肺炎是由多種病原體和其他因素所綜合導致的肺部炎癥[12]。在隨著人們對支氣管肺炎的病理、生理機制發病過程不斷研究中，發現患者會存在細胞免疫功能的異?，F象,在其中會對T 淋巴細胞亞群有較多的檢測報道。T 細胞在胸腺中發育成熟的淋巴細胞會進入到外周血中，對機體免疫功能進行參與并調節，淋巴細胞其具體可分為B 淋巴細胞、T 淋巴細胞、NK 細胞。機體的免疫平衡狀態是依賴于各淋巴細胞亞群間的相互制約、協調，形成適度的免疫應答[13-15]。在機體受到病毒、細菌等感染侵害時，會導致免疫機制出現失調現象，淋巴細胞亞群會表現出異常的數量，機體免疫絮亂現象出現，會降低免疫功能從而引發一系列疾病。

CD3+細胞均為外周血成熟的 T 淋巴細胞，CD4+、CD8+不同的亞群則是據 CD4、CD8不同的表達情況來區分，各群均具有特殊的免疫功能。在本研究中,采用流式細胞技術檢測了支氣管重癥肺炎患兒與普通支氣管肺炎組的T 淋巴細胞亞群和B 淋巴細胞亞群及NK 細胞計數。在進行比較時，重癥肺炎組患兒T 淋巴細胞及NK 細胞的計數均低于普通肺炎組，而B 淋巴細胞均會高于普通肺炎組。表明支氣管肺炎重癥患者的細胞免疫功能出現降低，B 淋巴細胞更高則表明肺炎重癥患者的細胞免疫降低與患者的疾病發展嚴重程度所相關,而B 淋巴細胞會與機體一起提高抗感染的機制,代償性會升高[16]。當支氣管肺炎發生時，T 淋巴細胞亞群會異常分布，B 細胞分泌、 表達的血清免疫球蛋白會隨T 細胞進行調節, 當 T 細胞 CD3+、CD4+功能減少低下時，會減少協助B 細胞產生抗體的能力[17]。而T 淋巴細胞 CD3+、CD8+在增加時會對 T 細胞、B 細胞和其余免疫細胞的增值和分化。支氣管重癥肺炎患者的T 淋巴細胞出現大量凋亡降低總數時，由亞群的變化會帶來免疫功能的絮亂,導致患者感染的因素會抑制機體的細胞免疫功能[18]。出現免疫抑制會使患者容易出現并發感染的癥狀,對感染難以控制，從而導致病情出現惡化的現象[19]。對患者T 細胞的持續降低進行關注則可對患者疾病發展程度進行有效評估,例如患者T 淋巴細胞CD4+水平出現降低且在經過1 周的積極治療后持續下降，無上升趨勢則表明患者可能會預后不良。與本研究中重癥肺炎組患者的T 淋巴細胞亞群水平均低于對照組結果相同。NK 細胞為的主要表達為CD15+、CD16+分子，是天然免疫細胞系統中的重要細胞，對病毒與細菌的感染進行主要控制，對體內環境進行穩定調節，從而產生細胞因子，殺傷腫瘤細胞，建立獲得性免疫與先天性免疫的聯系[20]?？蓪Σ≡w和已感染細胞進行直接殺傷，在機體免疫的調控中發揮重要作用，對其表達分子水平進行有效測定可對機體的免疫活性細胞功能狀態進行準確反映。

綜上所述，T 淋巴細胞亞群與NK 細胞可作為對重癥肺炎患者的評價重要指標，免疫水平的改變代表機體免疫免疫功能的改變，可對病情程度進行反映，對疾病的預后轉歸有效判斷，對臨床治療有著指導效用，對免疫制劑治療的使用提供一定的理論依據，有利于縮短患者病程對疾病進行更好的控制。