Ash2L、抗內皮細胞抗體與川崎病患兒冠脈血管損傷的關系

馮迎軍，王芳潔，呂愛婷，孫琪青

（鄭州大學附屬兒童醫院 河南省兒童醫院 鄭州兒童醫院，河南 鄭州450018）

川崎病屬于一類全身血管性炎癥疾病,炎癥反應的過度活化誘發血管基質代謝異常可造成冠狀動脈損傷,因此冠狀動脈損傷是川崎病發生率最高的并發癥,但截至目前川崎病異常炎癥反應的相關機制尚不明晰[1]。相關研究[2,3]結果顯示內皮細胞的功能紊亂和損傷可能是川崎病并發血管類并發癥的重要原因，但具體還需要進一步研究證實。

血管內皮細胞抗體（anti-endothelial cell antibody，AECA） 可在多種血管炎癥免疫疾病中遇到，其屬于血管內皮細胞表面的異質性抗體,系統性紅斑狼瘡等多種常見血管炎癥疾病中均發現AECA不僅是炎癥和血管損傷的標記,還可能參與疾病的發生、發展過程[4]。Ash2 樣蛋白（Ash2-like protein，Ash2L）是重要的炎癥介導蛋白，相關研究[5]已經證實其在白細胞分化階段起重要作用。本研究探討了Ash2L、AECA 與川崎病患兒冠脈血管損傷的關系,旨在為臨床川崎病的治療和預后提供更多的數據參考，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 1 月-2019 年 2 月在我院治療的川崎病患兒87 例（觀察組），其中伴有冠脈損傷患兒50 例，納入標準：⑴川崎病診斷符合《小兒川崎病的臨床診斷標準》中的標準[6]；⑵均為初治急性期患兒；⑶患兒監護人知情同意。排除標準：合并有惡性腫瘤、血液系統疾病、免疫系統疾病等。同時選取健康兒童80 例作為對照組（血常規、肝腎功等無異常），觀察組和對照組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 觀察組和對照組一般資料比較

1.2 實驗方法 取所有患者空腹靜脈血5ml，3000r/min 離心10min 后分離上清并分成兩份，分別檢測血清Ash2L 和AECA,酶聯免疫法檢測血清Ash2L和AECA 水平，酶標儀購于美國貝克曼公司，血清Ash2L 和AECA 試劑盒購于南京建成生物研究所；超聲心動圖檢測觀察組左冠狀動脈內徑（LCA）/主動脈瓣環內徑（AAO）。

1.3 冠脈損傷標準 采用超聲心動圖進行判斷[8]：⑴出現冠狀動脈內膜回聲增強； ⑵左冠狀動脈內徑超鄰近節段內徑的1.5 倍； ⑶左冠狀動脈內徑（LCA）/主動脈瓣環內徑（AAO）＞0.2。

1.4 統計學處理 統計分析采用SPSS22.0 軟件，計量資料采用（±s)表示，兩組間比較使用t 檢驗，計數資料采用頻數或百分比表示，兩組間比較使用非參數χ2檢驗，相關性采用Pearson 相關分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 觀察組和對照組血清Ash2L、AECA 水平比較觀察組血清Ash2L 和AECA 明顯高于對照組，差異比較有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 觀察組和對照組血清Ash2L、AECA水平比較

2.2 觀察組有無冠脈損傷患兒血清Ash2L、AECA及LCA/AAO 比較 有冠脈損傷患兒血清Ash2L、AECA 及LCA/AAO 明顯高于無冠脈損傷患兒（P＜0.05）。見表3。

表3 觀察組有無冠脈損傷患兒血清Ash2L、AECA及LCA/AAO比較

2.3 相關性分析 將觀察組患兒血清Ash2L、AECA 與 LCA/AAO 進行相關分析，結果顯示： 血清Ash2L、AECA 與 LCA/AAO 呈正相關 （r=0.825 和0.876，P＜0.05），見圖1。

2.4 Ash2L、AECA 及 LCA/AAO 診斷價值 Ash2L、AECA 及LCA/AAO 診斷有冠脈損傷的ROC 曲線下面積分別為 0.736、0.734 和 0.755，P＜0.05, 截斷值分別為 3.60pg/ml、920.50pg/ml 和 0.20，靈敏性分別為78.00%、77.50%和 80.00%, 特異性分別為66.00%、64.00%和67.80%，見圖2。

3 討論

圖1 相關分析圖

圖2 ROC曲線圖

川崎病屬于臨床兒科常見病,全身血管性炎癥反應時本病的主要病理特征,可誘發炎癥心血管病變，對兒童的身體健康產生嚴重威脅，而冠狀動脈損傷是川崎病的最常見并發癥之一[8,9]。大量文獻[10-13]均提示內皮細胞功能障礙是造成川崎病患者冠狀動脈損傷和血管炎癥疾病的重要原因。AECA 屬于B 淋巴細胞分泌的非特異性自身抗體,先前的研究[14]提示川崎病患兒治療后AECA 顯著下降并提示AECA 水平可能與KD 患兒疾病的活動性具有相關性。研究[15,16]發現 Ash2L 可催化 IFN-γ 基因組蛋白發生H3K4me3 甲基化，進而發揮介導炎癥反應的T 細胞亞群的作用。本研究結果顯示觀察組血清Ash2L 和AECA 明顯高于對照組,上述結果提示Ash2L 和AECA 可能是川崎病患兒發病過程中特有標志物, 具有成為診斷川崎病重要指標的潛力。AECA 結合內皮細胞后可通過多種途徑介導血管內皮的功能障礙和內皮損傷[17,18]：⑴增加趨化因子、炎性細胞因子的合成，活化內皮細胞；⑵促進內皮細胞表面黏附分子表達,促進中性粒細胞和單核細胞的聚集和遷移;⑶通過抗體和補體細胞毒作用引起內皮細胞的溶解和損傷,這也間接提示檢測AECA 水平對診斷和評估川崎病可能具有提示作用。

觀察組有無冠脈損傷患兒血清Ash2L、AECA及LCA/AAO 比較結果顯示有冠脈損傷患兒血清Ash2L、AECA 及 LCA/AAO 明顯高于無冠脈損傷患兒。上述結果提示川崎病并發冠狀動脈損傷患兒血清 Ash2L、AECA 及 LCA/AAO 明顯升高。釋放蛋白溶解酶、活性氧、細胞因子等毒性介質、誘導中性粒細胞的活化是AECA 的關鍵作用,進而損傷血管內皮細胞并造成機體局部血管功能障礙，參與川崎病并發冠狀動脈的發生、發展過程。因此通過檢測血清Ash2L、AECA 有助于判斷川崎病并發冠狀動脈的發生及所處于的發展階段。

本研究進一步將觀察組患兒血清Ash2L、AECA 與 LCA/AAO 進行相關分析，結果顯示： 血清Ash2L、AECA 與 LCA/AAO 呈正相關。該結果提示川崎病患兒血清Ash2L、AECA 明顯升高,與冠脈血管損傷存在一定相關性,血清Ash2L、AECA 水平越高，冠狀動脈損害越嚴重。故而，筆者推測對外周血Ash2L、AECA 表達水平檢測,有助于早期診斷川崎病合并冠狀動脈損害及預后。

相關文獻[19,20]提示T-bet 的高表達可能是川崎病患兒IFN-γ 基因H3K4me3 修飾異常的重要原因，IFN-1 可結合靶細胞表面受體結合, 促使STAT1 磷酸化，并誘導T-bet 的表達，因此基于本研究結果筆者推測在內、外源性配體及炎癥因子的共同作用誘導TLR4 信號，T-bet 表達水平升高并促進IFN-γ 基因組蛋白甲基化酶Ash2L 結合，促進IFN-γ 基因組蛋白發生甲基化修飾及H3K4me3水平顯著升高,進而導致IFN-γ 和Thl 細胞表達異常,進一步加重炎癥反應和內皮細胞功能障礙。

綜上所述,川崎病患兒血清Ash2L、AECA 明顯升高，與冠脈血管損傷存在一定相關性，值得進一步研究。本研究對Ash2L、抗內皮細胞抗體與川崎病患兒冠脈血管損傷的關系進行了分析探討并分析了可能存在的相關機制，實驗結果更加全面，能夠為臨床川崎病的治療和預后提供更多的數據參考，具有一定的臨床意義。