血清PAPPA、HSP90α 在NSCLC患者中的變化及其臨床意義

金燦輝，崔貫一，王愛紅，孟元普

（河南科技大學第一附屬醫院胃腸腫瘤外科，河南 洛陽 471000）

基礎方面的研究認為，腫瘤調控蛋白的改變，能夠在非小細胞肺癌（英文全稱，NSCLC）的發生過程中發揮重要的調控作用[1]。腫瘤蛋白的改變，能夠通過影響到癌細胞轉錄、 腫瘤細胞增殖及癌細胞凋亡抑制過程,最終影響到肺癌的發生發展[2]。熱休克蛋白90α（英文全稱，HSP90α）是腫瘤熱休克蛋白家族成員, 其能夠通過誘導腫瘤微環境的改變，加劇腫瘤細胞浸潤和粘附能力的增強，最終促進肺泡上皮細胞的侵襲和轉移過程[3,4]；妊娠相關血清蛋白A（英文全稱，PAPPA）是妊娠滋養細胞間質成分分泌的糖蛋白，其不僅能夠維持妊娠狀態，同時還能夠提高腫瘤細胞偽足形成的風險，提高上皮細胞突破基底膜組織的能力。為了揭示PAPPA、HSP90α 在肺癌患者中的表達情況，從而深入揭示PAPPA、HSP90α 在 NSCLC 病情進展過程中的作用, 本次研究選取 2016 年 8 月-2018 年 5 月本院經病理學檢查確診的60 例NSCLC 患者, 探討了PAPPA、HSP90α 的表達及其與肺癌患者臨床病理特征的關系。

1 對象與方法

1.1 對象 選取 2016 年 8 月-2018 年 5 月本院經病理學檢查確診的60 例NSCLC 患者為 NSCLC組、體檢中心獲取的60 例健康成年人作為志愿者為對照組。NSCLC 組，年齡 44～76 歲，平均 61.8±8.2 歲；男 36 例、女 24 例；TNM 分期：Ⅰ期 14 例、Ⅱ期 19 例、Ⅲ期 20 例、Ⅳ期 7 例；病腫瘤部位：中央型24 例、周圍型36 例；腫瘤經病理學檢查分化程度：高分化 16 例、中分化27 例、低分化 17 例；發生淋巴結轉移34 例； 腫瘤直徑≥3cm 23 例、＜3cm 37 例。對照組 60 例,年齡 40～75 歲,平均 60.2±12.0 歲；男 31 例、女 29 例。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 相關標準 診斷標準：NSCLC 患者診斷標準參考中華醫學會呼吸病學分會制定的標準[5]；納入標準：⑴患者年齡范圍19～79 歲以內；⑵經胸部CT、MRI 檢查及病理學檢查確診； ⑶既往未接受放化療、免疫學治療；⑷對照組血液標本來源于本院體檢中心結果健康的自愿者；⑸本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關醫學倫理規定。排除標準：⑴合并肺結核、哮喘、慢阻肺、肺部纖維化等疾??；⑵長期使用糖皮質激素、免疫抑制劑；⑶其他部位感染及其他系統的重大疾病；⑷類風濕性疾病、免疫系統疾病患者。

1.3 檢測方法 采用患者的肘部靜脈血5ml，1000r/min 離心10min，取上清液待測。密封袋中取出實驗板條，空白孔中加入樣品或者稀釋液100μl/孔，檢測孔中加入標本100μl/孔, 膠紙封閉實驗表條孔,36℃條件下孵育60～90min,磷酸鹽緩沖液清洗5次,空白對照孔中加入生物素抗體稀釋液100μl，檢測孔中加入生物素抗體檢測液100μl，膠紙封閉實驗表條孔，36℃條件下孵育30～60min，空白對照孔中加入酶結合稀釋液100μl，檢測孔中加入酶結合檢測液100μl，膠紙封閉實驗表條孔，磷酸鹽緩沖液清洗 5 次,加入 TMB 顯色底液（品牌：YSRIBIO湖州英創生物科技公司）,避光36℃孵育15min，加入終止液 100μl，3min 內檢測 OD450 值，BioTek 酶標儀購自美國伯騰儀器有限公司。

1.4 統計分析 本研究中所有數據的分析均采用SPSS21.0 版本，計量指標采用±s 表示，組間比較采用t 檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 二組血清 PAPPA、HSP90α 水平比較 NSCLC組患者的血清PAPPA、HSP90α 水平顯著高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05）,見表1。

表1 二組血清 PAPPA、HSP90α 水平比較（±s）

表1 二組血清 PAPPA、HSP90α 水平比較（±s）

組別 n NSCLC 組對照組t 值P 值60 60 PAPPA（ng/ml）10.84±3.17 6.20±2.53 8.862 0.000 HSP90α（μg/L）381.4±133.9 72.0±26.4 17.560 0.000

表2 不同病理學特征的NSCLC組患者血清PAPPA水平比較(±s)

表2 不同病理學特征的NSCLC組患者血清PAPPA水平比較(±s)

因素 n PAPPA（ng/ml） t 值TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期吸煙-3.790 33 27 9.27±2.83 12.18±3.11 0.541是 否25 35 11.15±2.81 10.74±2.95分化程度高+中低分化淋巴結轉移-1.357 43 17 10.20±3.06 11.33±2.46 3.735是 否34 26 11.74±2.91 8.87±3.00病灶直徑（cm）≥3cm＜3cm 0.844 23 37 11.20±2.96 10.52±3.08 P 值0.000 0.590 0.180 0.000 0.402

表3 不同病理學特征的NSCLC組患者血清HSP90α 水平比較(±s)

表3 不同病理學特征的NSCLC組患者血清HSP90α 水平比較(±s)

因素 n HSP90α（μg/L） t 值TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期吸煙-3.598 33 27 344.0±128.4 461.9±123.6 0.639是 否25 35 394.8±125.4 373.5±128.6 P 值0.001 0.525分化程度高+中低分化淋巴結轉移-2.4890.016 43 17 361.0±114.2 445.4±128.7 2.2220.030是 否34 26 413.0±131.4 339.7±120.0病灶直徑（cm）≥3cm＜3cm 0.6370.526 23 37 396.0±128.6 375.3±118.3

2.2 不同病理學特征的NSCLC 組患者血清PAPPA、HSP90α 水平比較 不同 TNM 分期、是否發生淋巴結轉移的NSCLC 組患者的血清PAPPA 水平組間比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）；是否吸煙、不同分化程度、不同病灶直徑的NSCLC 患者血清PAPPA 水平差異無統計學意義(P＞0.05),見表2。

不同TNM 分期、是否發生淋巴結轉移、不同分化程度的NSCLC 組患者的血清HSP90α 水平組間比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）；是否吸煙、不同病灶直徑的NSCLC 患者血清HSP90α 水平差異無統計學意義（P＞0.05）,見表3。

3 討論

NSCLC 的發生,能夠顯著增加肺癌患者的病死率，導致肺癌患者整體臨床結局的惡化。在高齡、長期吸煙或者合并有相關乙肝基因攜帶的群體中，NSCLC 具有更高的發病風險和致殘風險[6]。臨床上NSCLC 中晚期病情進展的風險較高, 早期疾病的診斷及中晚期臨床結局的預測缺乏可靠的指標。通過對于NSCLC 患者病情或者臨床病理特征的評估,能夠為臨床上肺癌的診療及病情預后評估提供依據?，F階段臨床上已有的相關指標如癌胚抗原等非特異性腫瘤標志物,雖然能夠在肺癌的診斷過程中起到一定的參考作用。但癌胚抗原與肺癌患者的組織學分級、 淋巴結轉移等病理特征的關系并不密切[7,8]。通過尋找臨床上新的NSCLC 指標標志物, 不僅能夠進一步揭示NSCLC 的發生機理, 同時還能夠為臨床上NSCLC 的病情整體評估提供參考。

PAPPA 是妊娠狀態過程中滋養細胞分泌的糖蛋白成分，其主要成分為非特異性的多肽結構，能夠在上皮細胞連接、 滋養細胞損傷修復等過程中發揮作用。近年來相關研究認為，PAPPA 還能夠在其他臟器組織中存在低水平的表達,其表達濃度的維持,能夠影響到炎癥反應或者惡性腫瘤的發生過程；HSP90α 是熱休克蛋白成員,其作為熱休克蛋白家族的重要組成成分,能夠在癌細胞信號通路的激活方面發揮作用。HSP90α 對于癌細胞轉錄調控基因的激活，能夠增強癌基因的轉錄翻譯速度，促進腫瘤細胞增殖速率的加快[9]。有研究者探討揭示了熱休克蛋白在肺癌患者中的表達情況,認為在肺癌患者中,熱休克蛋白的表達濃度或者表達陽性率均可明顯上升[9-11]，但對于PAPPA 的表達分析不足。

通過蛋白定量分析技術探討了PAPPA、HSP 90α 在肺癌患者血清中的表達情況，發現在肺癌患者中，PAPPA、HSP90α 蛋白的表達濃度均明顯高于對照組，推測 PAPPA、HSP90α 的高表達均能夠影響到NSCLC 的病情進展過程，其中PAPPA、HSP90α 的高表達趨勢取決于腫瘤細胞的增殖活躍狀態和腫瘤病情進展速度。有其他研究者也發現，在肺癌患者中，PAPPA 蛋白的表達濃度水平雖然仍然維持在較低的水平,但NSCLC 患者中PAPPA 的表達濃度可較正常對照人群上升3~4 倍，同時肺癌患者的短期內惡病質的表現越為明顯，PAPPA 蛋白的表達水平的上升越為顯著[12]。在探討PAPPA、HSP90α 的表達與肺癌患者臨床病理特征的關系過程中,發現在臨床分期為中晚期或者發生了顯著引流部位淋巴結轉移的患者中，PAPPA蛋白的表達濃度較高，提示PAPPA 的高表達能夠顯著影響到肺癌的臨床病理特征。這分析其原因，主要由于PAPPA 能夠提高生長因子的活性，促進癌細胞核DNA 的分裂，增強了癌細胞結構蛋白的合成速度，最終促進了肺癌病理或者生物學行為的惡化。但在不同分化程度的患者中，PAPPA 的表達并無明顯的差異，表明PAPPA 并不能影響到肺癌細胞的分化成熟過程。在臨床分期進展明顯、淋巴結轉移或者癌細胞低分化的患者中，HSP90α 的表達濃度較高，表明HSP90α 的表達同樣能夠顯著影響到肺癌患者的臨床病理特征。這主要由于HSP90α 能夠通過提高癌細胞內MAPK 或者P16/AKT 信號通路的激活，增加了癌細胞上皮-間質轉換的風險，誘導了癌細胞粘附淋巴結組織能力的增強，最終促進了相關病理特征的進展[13-16]。

NSCLC 組患者的血清 PAPPA、HSP90α 水平較健康人群顯著升高,并能夠影響到肺癌患者的臨床分期、淋巴結轉移等病理特征。