新疆維吾爾族癲癇兒童卡馬西平致過敏反應與HLA-B*1502基因型的相關性

貝力克孜·艾合坦木，阿不都亥力力·依馬木

卡馬西平是一種電壓依賴性鈉通道阻滯劑，臨床上常用于治療癲癇、三叉神經和舌咽神經痛、雙相情感障礙等疾病，因其藥效明確且價格低廉而成為臨床最常用的經典抗癲癇藥。其常見不良反應主要有頭暈、頭痛、嗜睡、疲勞、復視、胃腸道不適、肝損害、血小板和粒細胞減少以及皮膚過敏反應等。隨著卡馬西平的應用增多，其藥物不良反應所致的皮疹成為人們關注的焦點 。

近年研究[1-3]發現，HLA在卡馬西平所致的皮膚過敏反應發生及演變中發揮了極大作用。美國食品藥品監督管理局也結合文獻報道[4]推薦亞洲人群在使用卡馬西平之前進行HLA-B*1502基因型篩查。亞洲不同國家或種族人群HLA-B*1502基因型與卡馬西平引發的藥疹相關性存在明顯差別，但維吾爾族人群中卡馬西平引發的藥疹是否與HLA-B* 1502等位基因型相關尚未見文獻報道，故本研究探討新疆維吾爾族癲癇兒童出現卡馬西平導致的皮膚不良反應與HLA-B*1502等位基因型的相關性。

1 對象與方法

1.1 對象 收集2017年1月至2019年12月在我院住院或門診選用卡馬西平單藥治療的維吾爾族兒童癲癇患者100例。納入標準：(1)診斷為癲癇(診斷標準依據2014年國際抗癲癇聯盟制定的癲癇實用性定義[5])，且服用卡馬西平單藥治療;(2)如服用卡馬西平后2周內出現過敏反應的，皮膚過敏反應由皮膚科醫生進行診斷，排除其他原因引起過敏;(3)用藥前肝腎功能指標正常，藥物服用依從性高、耐受性好;(4)年齡1～18歲；(5)三代以內直系親屬均為維吾爾族;(6)家屬簽署研究知情同意書。排除標準：(1)卡馬西平單藥治療中需要有其他藥物聯用;(2)合并有其他基礎疾病;(3)與入組對象有親戚關系。本研究方案已被新疆阿克蘇地區人才項目倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 分組方法 將服用卡馬西平后2周內出現過敏反應的患者分為觀察組，未出現過敏反應的患者作為對照組。

1.2.2 標本采集 采集入組患者的外周靜脈血約3 ml，置于EDTA抗凝的試管中4 ℃保存。用飽和氯化鈉法提取DNA樣本，測定DNA純度和濃度后，將濃度調至30 ng/L，-40 ℃保存。

1.2.3 基因檢測 本研究分別采用PCR和堿基序列測序技術(SBT)測定樣本。PCR儀系美國應用公司ABI測序儀3500。基因組DNA提取全血試劑盒系芮寶生物科技公司生產。檢測試劑盒SeCore系賽默飛公司生產。采用SYBR Green熒光特性和RT-PCR 定性檢測HLA-B*1502基因。該試劑盒包括一對HLA-B*1502基因特異引物和一對內部控制基因引物，在檢測過程中每一份樣本必須同時測試兩個獨立的PCR，在PCR中監測PCR產物的變化，檢測結果根據結合內部控制組數值判定是否為HLA-B*1502陽性樣本。SBT是國際組織相容性工作組織公布的堿基序列測序分析法，具有分辨率高、直接得到實際基因型等特點。PCR-SBT法對所有DNA樣本進行高分辨率的HLA基因B位點的確定基因型檢測分析。

1.2.4 觀察指標 比較兩組患者HLA-B*1502基因型陽性率及基因頻率，同時對檢測出的每個單個等位基因進行基因頻率總結。

2 結 果

2.1 分組結果 100例單藥服用卡馬西平的兒童患者中，卡馬西平所致的皮膚不良反應發病率為3%。觀察組3例，既往均無個人藥物過敏史及家族藥物過敏史，發生皮膚過敏反應前除服用卡馬西平外，未服用其他任何藥物;男1例，女2例;平均年齡(13.33±4.50)歲;臨床表現為全身性的斑丘疹伴瘙癢，未出現皮膚黏膜水泡、破潰，屬于輕型皮疹，均經皮膚科醫生專科診治后治愈;1例患者發生輕度肝功能損害，給予保肝治療后恢復正常。對照組97例，均為服用卡馬西平半年以上從未出現卡馬西平相關不良反應者;其中男58例，女39例;平均年齡(10.57±4.66)歲。兩組性別、年齡差異無統計學意義(均P>0.05)，具有可比性。

2.2 基因檢測結果 基因檢測結果顯示，觀察組HLA-B*1502基因型均陰性，其攜帶的B位點的實際基因型分別為HLA-B*4601、HLA-B*5001、HLA-B*1501、HLA-B*3801、HLA-B*1302、HLA-B*1801。對照組僅1例患者HLA-B*1502基因型陽性，陽性率1.03%，基因頻率0.005。兩組基因陽性率差異無統計學意義(χ2=0.031，P=1.000)。兩組HLA-B單個等位基因的頻率見表1。

表1 兩組HLA-B單個等位基因的頻率(n=200)HLA-B例數基因頻率HLA-B例數基因頻率HLA-B例數基因頻率HLA-B例數基因頻率27∶0730.01554∶0110.00515∶1840.02015∶0830.01548∶0130.01544∶0280.04008∶0150.02540∶0220.01037∶0140.02049∶0130.01546∶0150.02555∶0130.01555∶0210.00507∶0710.00552∶0120.01044∶0350.02515∶1710.00514∶0270.03515∶0190.04558∶0190.04515∶0210.00535∶0370.03551∶01310.15540∶0650.02515∶0710.00556∶0110.00557∶0170.03538∶0170.03515∶1110.00545∶0120.01027∶0520.01081∶0210.00540∶0110.00541∶0120.01035∶0180.04035∶0810.00538∶0210.00513∶0110.00550∶01100.05018∶0180.04040∶0310.00507∶0270.03513∶02100.05035∶0250.025

3 討 論

癲癇是多種原因造成的反復發作性慢性腦部疾患，是小兒神經系統的常見病之一[6]。據WHO報告全球約5 000萬癲癇患者，在世界范圍內的患病率5.00‰～11.2‰；據中國抗癲癇協會統計數據顯示，目前我國有900萬例癲癇患者，而且每年還會有40萬新發病例，我國0～14歲兒童癲癇的發病率為1.51‰，患病率為3.45‰[6]。臨床上主要通過規范服用抗癲癇藥來控制發作。卡馬西平是經典一線抗癲癇藥物，可作為多種癇性發作類型患者的首選藥物。雖然卡馬西平療效肯定，應用廣泛，但其皮膚過敏反應問題長期困擾著臨床醫生。

抗癲癇藥物皮膚不良反應包括斑丘疹、藥物超敏綜合征以及嚴重危及生命性不良反應的史蒂文斯-約翰遜綜合征(SJS)和中毒性表皮壞死松解癥(TEN)。其中卡馬西平的藥物不良反應更嚴重，嚴重的藥物不良反應會造成沉重的醫療負擔，那么避免SJS/TEN的發生是抗癲癇治療過程中的重大挑戰之一。有文獻[7-9]報道，抗癲癇藥所致的皮膚不良反應與HLA-B*1502基因型有一定的相關性，HLA-B*1502等位基因型是HLA-B62亞型的一部分，其基因多態性與卡馬西平的皮膚不良反應是近年關注的熱點。Kim等[10]研究顯示，亞洲人群HLA-B*1502等位基因型與卡馬西平誘導的SJS相關。隨后的眾多文獻報道也證實了這一點，來自馬來群島[11]、泰國[3]、中國大陸漢族人[12-13]、中國臺灣地區漢族人[1]、中國香港[2]的亞洲人群中，HLA-B*1502基因型與卡馬西平所致SJS/TEN存在很強的相關性。美國食品藥品監督管理局也結合文獻報道修改了卡馬西平的說明書，建議亞洲人群在服用卡馬西平前需進行HLA-B*1502等位基因檢測[4]。然而，隨后的研究結果與先前的結果相悖。在服用抗癲癇藥過敏(包括卡馬西平所致SJS/TEN)的日本患者中并沒有發現攜帶HLA-B*1502基因型[14]，且在486名健康日本人中也未發現攜帶該基因[15]。Kim等[16]對24例韓國卡馬西平誘導的皮膚不良反應患者(7例SJS綜合征、17例藥物超敏綜合征)的研究中發現，7例SJS患者中僅1例HLA-B*1502等位基因型陽性。Alfirevic等[17]發現卡馬西平所致SJS的歐洲患者中無一攜帶HLA-B*1502等位基因型。本研究未發現卡馬西平所致SJS/TEN，僅有3例患者出現斑丘疹，而且HLA-B*1502基因型均陰性，對照組發現1例患者HLA-B*1502基因型陽性，兩組HLA-B*1502基因型陽性率對比無統計學意義。因此，卡馬西平所致SJS/TEN與HLA-B*1502基因型的相關性在不同人群間存在顯著差異，需要進一步開展國家及種族卡馬西平所致SJS/TEN與HLA-B*1502的相關性的研究。

研究[12,16,18-24]表明，卡馬西平所致的藥物不良反應除了HLA-B*1502基因型，還與多種HLA等位基因(包括HLA-A*3101、HLA-B*1518、HLA-B*5901、HLA-C*0704、HLA-B*5801、HLA-B*3503/B*4601、HLA-B*1511)、CYP3A4基因、MRP2基因、HSP70基因和促胃動素基因等相關。卡馬西平所致的藥物不良反應極其復雜，可能是多因素共同作用的結果。

有文獻[13,25]報道，年齡、性別及所患疾病等因素對HLA-B*1502基因型的陽性率無顯著影響。孔韋東等[13]發現，卡馬西平相關的斑丘疹與HLA-B*1502基因型相關性并不顯著。本研究出現斑丘疹相關基因型分別為HLA-B*4601、HLA-B*5001、HLA-B*1501、HLA-B*3801、HLA-B*1302、HLA-B*1801，與現有文獻報道的基因型也不一致。

綜上所述，卡馬西平導致皮膚不良反應的患者攜帶HLA-B*1502等位基因型的情況幾乎只見于某些亞洲人群，HLA-B*1502等位基因型陰性的患者也不能排除出現卡馬西平誘發皮膚不良反應的可能。新疆阿克蘇地區維吾爾族人群里卡馬西平的皮膚不良反應發生率低，且不良反應發生病例屬于斑丘疹，未發現與HLA-B*1502等位基因型的相關性，今后需要擴大樣本量進一步研究。