實驗大鼠和小鼠穴位定位的研究概況

程覓,張雪,史陽琳,尚盼盼,樸耕希,徐玉東,3

(1.上海中醫藥大學附屬岳陽中西醫結合醫院,上海 201203;2.慶云大學,韓國龜尾 730-739;3.上海市針灸經絡研究所,上海 200030)

針灸基礎科學研究需要以實驗動物及相關疾病模型為對象開展針灸效應機制以及經穴特異性等方面的探索。目前,最常用的實驗動物包括狗、貓、家兔、豚鼠、大鼠、小鼠等[1]。其中大鼠、小鼠等嚙齒類動物與人類基因同源性較高,且繁殖能力強,生長發育成熟周期短,體型小易養殖[2],在針灸基礎研究中使用最多。在針灸動物實驗中,精準的穴位定位是針灸治療起效的基礎,也是針灸科學研究的必要前提條件之一[3],但是實驗大鼠、小鼠穴位定位尚無統一的國際標準和規范化的穴位定位方法,在一定程度上影響了針灸現代化和國際化的發展。

筆者以“小/大鼠”“穴”“定位”作為中文文獻主題詞,“mouse/rats acupuncture” OR“mouse/rats acupoint”作為英文文獻主題詞分別檢索中國知網(CNKI)、重慶維普數據庫(CQVIP)、萬方和PubMed數據庫,檢索到公開發表的大鼠、小鼠穴位定位方法類文獻共20篇,其中單穴定位文獻共15篇,系統穴位定位文獻共5篇(國內3篇,國外2篇)。

本文將從穴位定位依據、穴位數量與分布、穴位解剖位置描述等方面梳理分析這些定位體系的差異、優勢與不足,以期為大鼠、小鼠的穴位規范化準確定位提供文獻參考,也為研制新的實驗動物穴位定位國際標準提供參考依據。

1 國內外實驗大鼠、小鼠穴位定位的研究概況

實驗大鼠、小鼠系統穴位定位研究的文獻共5篇,4個研究團隊。其中國內分別以華興邦、鄭利巖研究員的團隊研究為代表,國外則由慶熙大學針灸經絡科學研究中心、釜山國立大學醫學部制定了相關定位方法(見表1)。

表1 國內外大鼠、小鼠穴位定位基本情況

華興邦等根據大量針灸實驗研究論文以及《中獸醫學》和人體經穴確定了42個大鼠、20個小鼠針灸穴位,并對穴位名稱、定位描述、針刺方法、功能主治等進行了研究[4],且繪制了大鼠、小鼠的針灸穴位圖譜[5],以往各版本《實驗針灸學》教材也多參考了該定位體系。鄭利巖等[6]采用皮膚電阻導電量測定及聲測經絡技術驗證了大鼠經穴與人體經穴具有相同的生物物理學特性,共確定大鼠穴位46個,比華興邦團隊定位的大鼠經穴總數多4個。韓國與中國地理位置相近,有著悠久的文化和歷史交流,韓國針灸學者非常重視實驗針灸的基礎研究,傾向于建立基礎理論、科學研究、術語、針灸技術等基礎學科。慶熙大學針灸經絡科學研究中心的韓國學者Yin CS等[7]在該國學者前期工作基礎上,研究了大鼠、小鼠十二經脈及任督二脈的穴位,并提出了一套121個穴位的小鼠和大鼠模型定位系統,對其定位進行了詳細描述。另外,釜山國立大學醫學部的研究者Koo ST等[8]就實驗大鼠、小鼠研究中常用的穴位定位達成共識,用英文描述ST36、LI4、PC6、SP6等22個穴位的位置,并配以解剖圖進行說明,這將為針灸學科國際化的進一步發展奠定基礎。據統計,5篇國內外文獻共同記載的大鼠穴位有后三里、三陰交、陽陵泉、環跳、太沖、曲池、少海、內關、神門、合谷10個,小鼠穴位有后三里、三陰交、環跳、內關、胃俞、合谷6個(見圖1),這是針灸基礎研究中常用的一些穴位。實驗動物單穴定位的文獻僅涉及大鼠,共15篇,記載的腧穴包括人迎、肺俞、心俞、脾俞、腎俞、次髎、關元、神闕、命門、胃脘下俞、夾脊,總計11個。

圖1 系統穴位定位文獻中大鼠、小鼠穴位定位數據韋恩圖

2 實驗大鼠、小鼠穴位定位依據

實驗動物穴位的發展歷經了從起步到逐漸規范的過程,其定位描述從粗略到詳細,定位參考從龐雜到明確,均離不開穴位定位參考依據作支撐。

華興邦等[5]關于實驗動物穴位定位依據包括3類,①廣泛收集國內外有關針灸實驗研究資料,占比95%;②參照《中獸醫學》及其他實驗動物穴位,占比19%;③從比較解剖學的角度,根據人體穴位所處部位按比例投影到動物身上,并接納國內部分著名針灸專家意見進行修訂,占比21%。隨后,鄭利巖及其團隊為了更客觀準確地標定出常用實驗動物的經穴,應用皮膚電阻導電量測定及聲測經絡技術來測定經穴點[6]。韓國慶熙大學針灸經絡科學研究中心[7]對大鼠、小鼠的穴位定位進行了較為詳細的描述,其定位依據包括3類。①采用傳統獸醫針灸系統的動物穴位;②根據穴位的生理特征來定位,如電阻抗降低或具有高密度神經末梢易興奮的皮膚/肌肉-神經復合體;③轉位法,將人體穴位的解剖位置相對應轉位到動物皮膚表面來進行定位,在小鼠和大鼠模型中提出了一個121穴位轉位系統。Koo ST等[8]所采取的定位依據與Yin CS[7]等一致,并借用《世界衛生組織標準針灸經穴定位》中關于人類穴位定位的專業術語來對實驗動物的穴位定位進行描述。其他單穴定位文獻一定程度上也參考了上述穴位定位依據。由此可見,國內外研究者均結合了《中獸醫學》、針灸、動物解剖學及現代實驗技術方法作為實驗大鼠、小鼠的穴位定位依據。

3 實驗大鼠、小鼠穴位的分布

統計顯示,實驗大鼠、小鼠穴位定位方法類的20篇文獻所記載穴位的分布涉及6個不同部位,包括頭面頸部、胸腹部、背腰部、前肢、后肢、尾部,而2篇韓國文獻均未記載尾部穴位(尾尖)(見表2)。其分布部位以大小鼠四肢、背腰部居多,其中大鼠四肢部及背腰部腧穴占比分別為46.9%和25.9%,小鼠分別為44.6%和25.4%,且4篇系統穴位定位文獻共同記載的10個大鼠穴位、6個小鼠穴位均分布在四肢部。四肢部穴位在實驗大鼠、小鼠的針灸研究中出現頻次最高,可能與四肢部穴位的屬性有關,如五輸穴、郄穴、下合穴、八脈交會穴等特定穴均分布在四肢肘膝關節以下,其治療作用廣泛[9],不僅可治療局部、鄰近、循經的疾病,還可以用于全身疾病的治療。其次,四肢部位的骨性標志較多,如橈骨莖突、肱骨外上髁、脛骨粗隆、腓骨頭、外踝、內踝等,這些骨性標志在四肢的體表形成較明顯的隆起或凹陷,有利于實驗動物的穴位定位。

表2 實驗大鼠、小鼠穴位分布及數量

4 實驗大鼠、小鼠穴位定位的描述

經統計顯示,系統穴位定位研究的5篇文獻共同記載的大鼠穴位有10個、小鼠穴位6個,對其作比較分析(見表3、表4)。而國內外對動物穴位定位的方法多有不同,以解剖學骨性標志做參考,國內多采用絕對的距離長度進行定位,而國外多以骨度分寸折量定位。

表3 不同文獻大鼠共有穴位名稱和位置

表4 不同文獻小鼠共有穴位名稱和位置

5 實驗大鼠、小鼠穴位歸經

統計顯示,系統穴位定位研究的5篇文獻中所記載的實驗大鼠和小鼠穴位可歸屬于十四經,尚有部分經外奇穴(見表5),其中歸屬于膀胱經的穴位最多(總計27個)。單穴定位研究文獻中記載的大鼠腧穴包括人迎、肺俞、心俞、脾俞、腎俞、次髎、關元、神闕、命門、胃脘下俞、夾脊,總計11個,其中5個為背俞穴,歸屬于膀胱經。因膀胱經為循行路線最長的經脈,由頭走足,分行四肢,且膀胱經背俞穴均有相應的神經后支伴行,與相應內臟所屬神經節段具有一致性,主治范圍廣泛,因此研究者較多關注實驗大鼠和小鼠膀胱經上的穴位定位。此外,大鼠陽經穴位85個,陰經穴位49個;小鼠陽經穴位80個,陰經穴位47個。實驗大、小鼠固定后,陽經穴位多位于肢體外側,便于定位取穴和針灸操作。

表5 實驗大鼠、小鼠穴位歸經

續表

6 討論

實驗動物是進行針灸效應探索的主要載體,而準確的穴位定位是針灸治療起作用的一個關鍵因素,因此,動物穴位的精確定位是針灸學科發展的必經之路。但目前國內外對大鼠、小鼠的穴位定位尚無統一標準。有研究對2012年至2017年針灸基礎實驗中大鼠穴位使用情況做出統計,以大鼠常用穴位“足三里”為例,僅以解剖形態作為定位標志對大鼠“足三里”進行定位的方法描述包括7種[10]。本文對比研究了國內外相關文獻對大鼠、小鼠穴位定位描述以及定位依據的異同,華興邦等[5]與鄭利巖等[6]研究的大鼠穴位,兩者共有的穴位35個,但是只有太淵、神門、少海、昆侖、申脈5個穴位的定位描述是一致的。缺乏統一規范的大鼠、小鼠穴位定位方法,在針灸動物實驗研究中可能導致取穴偏差,無法真實體現針灸的效應,另外也使得研究結果缺乏可比性,一定程度上影響了針灸研究結果的科學性和可靠性。因此制定規范的實驗動物穴位定位標準,是提高針灸學基礎研究水平和推動針灸現代化、國際化的迫切需要[11]。

筆者綜合分析了國內外的大鼠、小鼠穴位定位方法,發現在定位位置的測量和穴位定位理論依據等方面存在爭議和問題。一是對于穴位定位的描述,國內外多有不同,國內多習慣用尺寸單位來表示,而國外以骨度分寸折量定位。相比較來說,骨度分寸折量法似乎更為科學,因為根據實驗動物種屬、性別、周齡、體質量等的不同,其形體大小也有較大差異。有研究者對不同周齡期Wistar大鼠的身長、體質量、尾長進行研究[12],發現3周齡、6周齡、13周齡的雄性大鼠身長分別是(1.38±0.81)cm、(14.97±0.83)cm、(20.60±0.69)cm,雌性大鼠身長分別是(1.90±0.69)cm、(15.20±1.21)cm、(18.52±0.43)cm,提示不同周齡、不同性別間大鼠的身長有顯著差異。若仍以尺寸單位進行定位,結果必然存在偏差。有研究對解剖位置的表述進行了深入討論,建議能以骨度分寸折量定位的穴位,將不再使用國際單位的尺寸,如小鼠“三陰交”穴如能確定在后肢內踝尖與脛骨內側髁下1/4與上3/4交點處,則不再定義為“位于內踝尖上0.5 cm”。二是穴位定位依據,國內外研究者均結合了《獸醫針灸學》作為實驗大鼠、小鼠的穴位定位依據。《獸醫針灸學》主要是古人對馬、牛等大型家畜疾病的針灸治療實踐中積累的經驗[13],具有幾千年的歷史。但把獸醫針灸應用于實驗動物有一定局限性[14],獸醫針灸的研究主要集中于大型家畜,實驗動物大多是嚙齒類動物,其體型很小,這使得動物精準的穴位定位和針刺操作變得更加困難,通過模擬牛、馬的穴位進行定位比較粗略模糊,不具有精準性。現代研究發現,經脈循行線及穴位表現出低電阻高電容[15]、高振聲和聲信號[16]、熱學特性(經絡穴位處皮膚溫度要比附近非經穴部位高出0.5～1.0 ℃)[17]。因此,依據穴位的生物、物理和化學特性有助于實驗動物的準確穴位定位[18]。但穴位的理化特性易受多種因素的干擾[19],如動物穴位處皮膚的溫度、濕度以及被測量表面的清潔程度,以及動物情緒、健康狀況等內在因素,所以關于穴位的生理特征是否能準確反映穴位,目前尚無定論。

針灸實驗來源于臨床而最終又要回歸于臨床,在臨床上,針灸特定經絡和穴位能夠產生相對特異的治療作用,因此經穴效應是驗證穴位定位是否準確的重要標準。有研究[20]對大鼠“人迎”穴進行標準定位,并通過針刺降壓效應來驗證,結果顯示,與針刺非穴位治療大鼠自發性高血壓相比,針刺“人迎”穴后血壓明顯下降,證實了“人迎”穴的準確定位及確切的降壓效應。魏媛媛等[21]研究發現針刺穴位組(穴取“水溝”)可以明顯縮小大腦中動脈缺血模型(MCAO)大鼠病灶側腦梗死面積,效應明顯優于非穴位組(穴取患側肋下髂嵴上10 mm的固定點處)。徐朝霞等[22]采用電針刺激家兔“陽陵泉”穴可使奧狄氏括約肌放電明顯增強,而刺激“非經非穴”點則無反應。以上研究結果表明,與非穴點相比較,動物經穴點具有顯著的特異性效應,因此,應當以是否產生特異性效應作為動物穴位定位的重要標準。此外,目前已有的實驗動物穴位局部和深層解剖結構研究還不充分,針灸科研人員在針刺操作過程中僅根據穴位的文字描述定位,大大增加了實際操作中的不確定性,影響針灸研究的可靠性。國內部分研究探索通過參照大鼠的解剖圖譜對部分穴位進行定位,如田環環等[23]根據《WISTAR大鼠解剖圖譜》中“髖結節平對第6腰椎”的描述,將其作為腰骶部的骨性標志,并對“腎俞”進行定位,向上順摸4個椎體即是第2腰椎,旁開7 mm即是腎俞;劉海濤等[24]根據《大鼠的解剖與組織》中的描述,即T2位于頸胸彎曲的最低點,在大鼠俯臥位時棘突最高,可將T2作為椎骨定位的體表標志來確定“肺俞”“心俞”的位置;徐東升等[25]同時參考了《WISTAR大鼠解剖圖譜》和《大鼠斷層解剖彩色圖譜》進行大鼠形體結構圖的繪制,并按照《實驗針灸學》[26]中介紹的穴位名稱與定位來繪制實驗大鼠穴位圖譜。這些研究將實驗動物穴位定位與現代解剖學相結合,為動物穴位的定位提供了更詳細、客觀的解剖學依據。

綜上所述,準確的實驗動物穴位定位是針灸基礎研究中至關重要的一步,但目前實驗大鼠、小鼠的穴位定位方法無規范化標準,一定程度上影響了針灸學科的發展水平,亟需制定大鼠、小鼠等實驗動物相關的穴位定位國家標準。筆者認為,應參考人體針灸穴位和獸醫針灸穴位,結合大鼠、小鼠解剖標志物進行大致的穴位轉位定位;在此基礎上,根據動物經穴效應的實驗數據,并結合現代解剖學、神經、電生理和免疫學等研究,對大鼠、小鼠的穴位精確定位;進一步制訂大、小鼠穴位定位的國際標準,并繪制相應的解剖圖譜,在世界范圍內推廣和規范應用,這將對促進針灸學科的發展具有重要意義。