無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型正反定型結(jié)果不一致原因分析

吳 蓉 施冬梅 張偉芳

珠海市中心血站(珠海 519000)

臨床上溶血性輸血不良反應(yīng)最重要原因之一是ABO鑒定錯(cuò)誤[1]。供血者血型鑒定正確是確保臨床輸血安全的基礎(chǔ)。隨著血型檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化要求的不斷提高，國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)普遍利用全自動(dòng)血型分析儀自動(dòng)化程度高、高效率、節(jié)省人力并可以保存原始數(shù)據(jù)等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行批量檢測(cè)從而有力的保證了臨床用血的需求。但在實(shí)際工作中會(huì)遇到一些特殊的樣本，如結(jié)果低于判定規(guī)則時(shí)儀器不能正確判定[2]，出現(xiàn)ABO血型正反不一致，此時(shí)極易發(fā)出錯(cuò)誤報(bào)告。無(wú)償獻(xiàn)血者血型鑒定的準(zhǔn)確性[3]特別是ABO血型正反不一致的疑難血型的鑒定是臨床輸血安全的關(guān)鍵問題。本研究通過分析2019年6月1日—2020年11月30日本血站的無(wú)償獻(xiàn)血者樣本血型鑒定結(jié)果，以探討無(wú)償獻(xiàn)血者ABO血型正反定型結(jié)果不一致原因分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年6月1日—2020年11月30日在珠海市中心血站捐獻(xiàn)的44 808例無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本為研究對(duì)象。所有無(wú)償獻(xiàn)血者均符合衛(wèi)生部《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》要求，并簽署知情通知書。嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行的SOP操作要求進(jìn)行ABO血型正定型和反定型檢測(cè)。

1.2 主要儀器與試劑

主要檢測(cè)儀器:Metis150全自動(dòng)血型分析儀由深圳市愛康生物科技有限公司提供。低溫離心機(jī)由賽默飛世爾科技有限公司提供。主要試劑：抗A、抗A1、抗B、抗H、抗D(IgM)檢測(cè)試劑由上海血液生物醫(yī)藥有限公司提供；ABO反定型紅細(xì)胞試劑由長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限公司提供；不規(guī)則抗體篩查紅細(xì)胞試劑和微柱凝膠卡均由達(dá)亞美有限責(zé)任公司提供；抗AB檢測(cè)試劑由江蘇中濟(jì)萬(wàn)泰生物醫(yī)藥有限公司提供；BASO放散液和凝聚胺試劑均由珠海貝索生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 初篩方法 使用Metis150全自動(dòng)血型分型儀自動(dòng)完成加樣，孵育，離心，震蕩，讀板，ABO血型結(jié)果判讀。如果ABO血型正反定型結(jié)果一致，則為檢測(cè)最終判讀結(jié)果。如出現(xiàn)ABO血型正反定型結(jié)果不一致，則采用鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果正反定型一致，則為最終判讀結(jié)果。試管法仍然顯示正反血型結(jié)果不一致的疑難血型樣本則送血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)一步確認(rèn)。

1.3.2 血型參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn) 嚴(yán)格按照各試劑說(shuō)明書操作要求進(jìn)行：①試管法或微柱凝膠血型卡法增加被檢紅細(xì)胞分別與抗A1、抗AB、抗H試劑反應(yīng)；②直接抗人球蛋白試驗(yàn)確定被檢紅細(xì)胞致敏狀態(tài)；③不規(guī)則抗體篩查及特異性鑒定；④冷凝集自身抗體特異性和抗體效價(jià)測(cè)定；⑤吸收放散試驗(yàn)確定紅細(xì)胞的血型抗原及其強(qiáng)度。

2 結(jié) 果

2.1 一般結(jié)果

44 808例樣本出現(xiàn)ABO血型正反定型結(jié)果不一致134例，發(fā)生率為0.30%。其中因嚴(yán)重脂血、弱凝集導(dǎo)致儀器判讀錯(cuò)誤4例(2.98%)；因吸取紅細(xì)胞或血漿異常加樣量不準(zhǔn)確25例(18.66%)；經(jīng)鹽水介質(zhì)試管法復(fù)檢確認(rèn)65例(48.51%)；血型參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)40例(29.85%)。經(jīng)參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)導(dǎo)致ABO正反定型不一致的原因是抗體缺失或者減少、不規(guī)則抗體、亞型、抗原減少、冷凝集素分別為22例(16.42%)、8例(5.97%)、6例(4.48%)、2例(1.49%)、2例(1.49%)。見表1。

表1 134例ABO血型初篩正反不一致的原因

2.2 ABO血型初篩正反不一致樣本處理方法

根據(jù)ABO血型初篩正反不一致的不同原因，在初篩實(shí)驗(yàn)室通過人工判讀、糾正試劑或血漿量、手工試管法復(fù)核確定ABO血型各4例、25例、65例。血型參比實(shí)驗(yàn)室通過延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或改變反應(yīng)溫度確定因抗體缺失或減少22例、冷凝集素2例；增加抗A1、抗AB、抗H血清和吸收放散試驗(yàn)確定亞型6例、抗原減少2例；洗滌自身紅細(xì)胞吸收放散后定型、吸收后血清反定型確定不規(guī)則抗體8例。見表2。

表2ABO血型初篩正反不一致樣本處理方法

2.3 40例血型參比實(shí)驗(yàn)ABO血型血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

40例血型參比實(shí)驗(yàn)ABO血型血清學(xué)確認(rèn)結(jié)果為O型21例(52.50%)、A型8例(20%)、B型7例(17.5%)、AB型4例(10.00%)。見表3。

表340例血型參比實(shí)驗(yàn)ABO血型血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

出現(xiàn)ABO血型正反不一致的原因有技術(shù)性的問題或紅細(xì)胞和血清本身的問題[4]。目前鑒定血型的方法有經(jīng)典試管法、微量板法、微柱凝膠血型卡法等血清學(xué)方法[5]。分子生物學(xué)方法因?qū)嶒?yàn)條件要求高，在國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)尚未普及。試管法是鑒定ABO血型的經(jīng)典方法[6]，其操作便捷、準(zhǔn)確度可靠、但操作過程不易自動(dòng)化、檢結(jié)果不易保存等缺點(diǎn)限制了其在采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)用。本研究采用U形微量板法初篩檢測(cè)44 808例無(wú)償獻(xiàn)血者血液樣本，ABO血型正反不一致發(fā)生率為0.30%，顯著低于侯瑞琴[7]曾報(bào)道26 923例住院患者發(fā)生率1.6%，其差異可能與研究對(duì)象不同相關(guān)。無(wú)償獻(xiàn)血人群一般為18～55周歲的健康人群，基本可以排除因年齡、疾病(白血病、肝臟疾病、結(jié)核病等)以及臨床治療因素對(duì)血型鑒定的影響[8]。本研究自2019年6月開始使用全自動(dòng)血性分析儀，在使用初期多發(fā)生因樣本管放置高度錯(cuò)誤導(dǎo)致加樣量不準(zhǔn)確，或者樣本中有凝塊，或者弱凝集時(shí)細(xì)胞扣太小儀器判讀錯(cuò)等現(xiàn)象從而導(dǎo)致ABO血型正反不一致，這種情況一般通過經(jīng)典的試管法復(fù)查可以鑒定血型。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室不斷糾正實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中的不規(guī)范操作，后期ABO血型正反不一致發(fā)生率明顯下降。對(duì)儀器、試劑、樣本及操作過程等關(guān)鍵質(zhì)量控制點(diǎn)有效監(jiān)控是減少ABO血型正反不一致發(fā)生的重要措施。故平常工作中應(yīng)高度警惕試驗(yàn)操作原因：①注意樣本抗凝是否充分，樣本有無(wú)被污染，有無(wú)嚴(yán)重脂血溶血等情況；②試劑是否在有效期內(nèi)使用，試劑的保存溫度是否正確；③儀器是否進(jìn)行正常的保養(yǎng)和維護(hù)，加樣針感應(yīng)位置是否恰當(dāng)，加樣針是否定期進(jìn)行疏通；④儀器判讀是否正確，溶血是否誤判為陰性,細(xì)胞扣減小、弱凝集或混合凝集是否漏檢；⑤是否嚴(yán)格遵循雙人核對(duì)。上述原因均可在初篩實(shí)驗(yàn)室糾正并正確鑒定ABO血型。

對(duì)于因被檢紅細(xì)胞或血清自身原因影響的疑難血型鑒定，如抗體缺失或者減少、抗原減少、不規(guī)則抗體、亞型、冷凝集素等，需要血型參比實(shí)驗(yàn)室補(bǔ)充一些特殊試驗(yàn)鑒定ABO血型。本研究中血型參比實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)結(jié)果中O型21例(52.50%)>A型8例(20%)>B型7例(17.5%)>AB型4例(10.00%)，這與血型分布特征相符合[9]。本研究40例疑難血型樣本中最主要原因是抗體減弱(22例，55%)：通過增加血清量、延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間、放置4 ℃冰箱一段時(shí)間、多次離心等方法確定。其次為不規(guī)則抗體陽(yáng)性(8例,20%)。存在不規(guī)則抗體陽(yáng)性的血液制品嚴(yán)重影響到輸血安全，這也是臨床退血的最主要的原因[10]。另外因抗原減弱(2例，5%)、亞型(6例，15%)、冷凝集素(2例，5%)。這些特殊無(wú)償獻(xiàn)血者，血站采取屏蔽限制獻(xiàn)血并詳細(xì)告知ABO血型檢測(cè)結(jié)果。其中6例亞型無(wú)償獻(xiàn)血者單獨(dú)建立健康檔案存入稀有血型數(shù)據(jù)庫(kù)，專供臨床亞型同型輸血，以減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。

綜上所述，全自動(dòng)化血型儀在完成常規(guī)大量的血型檢測(cè)工作有一定的優(yōu)勢(shì)，它實(shí)現(xiàn)了從樣本條碼掃描、加樣、檢測(cè)到結(jié)果判讀及數(shù)據(jù)保存的完全自動(dòng)化處理，不僅極大提高了檢測(cè)的工作效率，也減少了人為因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾[11]。但是遇到ABO血型正反定型結(jié)果不一致的時(shí)候，還是需要實(shí)驗(yàn)室工作人員認(rèn)真分析原因,再適當(dāng)增加補(bǔ)充試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)血型。其中減少不規(guī)則抗體對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，防止弱亞型的漏檢尤為重要。