胃腸寧膠囊質量標準提高研究

龍洋 李小華 夏永芳 寧知貴

摘要：目的：建立胃腸寧膠囊的質量標準。方法：采用TLC法對胃腸寧膠囊中的主要藥味元胡、黃連、山楂進行定性鑒別;采用HPLC法測定元胡中延胡索乙素的含量，色譜柱：Agilent-C18（250mm×4.6mm，5um），流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（用三乙胺調節PH值至6.0）（55：45），檢測波長：280nm，流速：1.0mL/min。結果：薄層色譜斑點清晰，在與對照藥材或對照品相應的位置上顯相同的斑點，陰性對照無干擾;元胡中延胡索乙素的線性范圍40.16～401.6 ug，r=0.9995，平均回收率為99.21%，RSD為0.54%（n=9）。結論：本方法操作簡單，結果準確可靠，重復性好，可作為胃腸寧膠囊的質量控制方法。

關鍵詞：胃腸寧膠囊;延胡索乙素;薄層色譜法;高效液相色譜法;含量測定

【中圖分類號】R453 【文獻標識碼】A 【文章編號】1673-9026（2021）04-349-02

胃腸寧膠囊收載于《湖北省醫療機構制劑規范》（2011年版），是由蒼術（炒）、延胡索（醋蒸）、砂仁、白頭翁、山楂（炒）、豬苓、黃連、木香8味中藥組成的復方制劑，具有清熱燥濕，化滯之功效，臨床主要用于濕熱所致的急慢性胃炎、腸炎、痢疾等[1]。由于該制劑現行質量標準制定的年代久遠，只有針對鹽酸小檗堿的薄層鑒別，不能較全面的反映該中藥制劑的質量。本研究對該制劑的質量標準進行了提高，增加了薄層層析法（TLC）用于定性鑒別該制劑中的延胡索、黃連，并采用高效液相色譜法（HPLC）測定主要藥味延胡索中延胡索乙素的含量。

1儀器與試藥

1.1儀器

BT-125D型電子分析天平（SartoriuS）;WaterS e 2695型高效液相儀（包括WaterS 2998型二極管陣列檢測器，EmPower色譜工作站），PCDX-WJ-20超純水機（成都品成科技有限公司）;JP-060S型超聲波清洗機（深圳市潔盟清洗設備有限公司）;WFH-203B型三用紫外分析儀（上海精科實業有限公司）

1.2試藥

延胡索乙素對照品（批號：110726-201819）、延胡索對照藥材（批號：120928-201609）、黃連對照藥材（批號：120913-201310）、鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201814），均購自中國食品藥品檢定研究院;胃腸寧膠囊3批（批號：2019087、2019252、2020114，由恩施州中心醫院制備）;陰性樣品均為自制;甲醇（色譜級），其他試劑為分析純。硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）

2方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1延胡索的薄層鑒別?取本品20粒，加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，濾液加中性氧化鋁5g，振搖數分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水適量使溶解，加濃氨試液調節PH值至9～10，用乙醚振搖提取3次，每次10mL，乙醚液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材1g，加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，自“濾液蒸干 ”起，同法制成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液;取缺延胡索的陰性樣品20粒，按供試品溶液的方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各5μL，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇 （7.5：4：1）為展開劑，置用展開劑預飽和15min的展開缸內，展開，取出，晾干，置碘缸中約3min后取出，揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈（365 nm）下檢視[2]。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。陰性對照品無干擾。（結果見圖1）

2.1.2黃連的薄層鑒別?取本品6粒，加甲醇20mL，超聲處理20min，濾過，濾液作為供試品溶液[1]。另取黃連對照藥材0.2g，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液;取缺黃連的陰性樣品6粒，按供試品溶液的方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液、陰性對照溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（5：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照品無干擾。（結果見圖2）

2.2延胡索中延胡索乙素的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗?色譜柱為Agilent C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（用三乙胺調節PH值至6.0）（55：45），檢測波長：280nm[2]，流速：1.0mL/min。分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液10μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件記錄色譜圖（見圖 5），陰性對照溶液在延胡索乙素峰位置處無干擾峰，延胡索乙素與樣品中其他組分色譜峰可完全分離 。

2.2.2 對照品溶液的制備?精密稱取延胡索乙素對照品10.04mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解后稀釋至刻度（延胡索乙素對照品濃度100ug/mL），搖勻，精密量取5mL置25mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45um微孔濾膜濾過，即得對照品溶液（延胡索乙素對照品溶液濃度為 20.08ug/mL）。

2.2.3 供試品溶液的制備?取本品內容物2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25mL，蒸干，殘渣水20mL，用稀鹽酸調節PH為2，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，水層用氨試液調節PH至11，用乙醚振搖提取，3次，每次20mL，合并乙醚液，回收溶劑至干，加甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，用0.45um微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.4 缺延胡索陰性樣品溶液的制備?取缺延胡索陰性樣品2g，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液，按上述色譜條件測定。結果在陰性樣品色譜圖上，在與對照品相應保留時間處無色譜峰出現，表明陰性樣品不干擾延胡索乙素測定（見圖5）。

2.2.5 線性關系考察?分別精密吸取2、5、10、15、20μL 對照品溶液，注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。以峰面積積分值（Y ）為縱坐標，以進樣量（X）的對數值為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y =31443X -4642.3，r =0.9995。線性范圍為40.16μg～ 401.6μg 進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗?取同一對照品溶液20μL，按上述色譜條件重復進樣6 次，測定峰面積，結果延胡索乙素對照品峰面積的RSD=0.38%。

2.2.7穩定性試驗?取同一供試品溶液20μL，按上述色譜條件分別在 0、4、8、12、16、20、24 h 進樣測定延胡索乙素的峰面積，計算延胡索乙素面積RSD為0.81%（n=6），結果表明供試品溶液在24h內穩定。

2.2.8 重現性試驗?取同一批樣品按“2.2.3”項下制備6份供試品溶液，依上述測定條件測定，延胡索乙素的平均含量為77.01ug/粒，RSD為 1.63 %。

2.2.9 加樣回收試驗?精密稱取本品9份，每3組為一份，分別精密加入對照品溶液（濃度為 100.4ug/mL）1mL、1.5mL、2mL，按“2.2.3”項下制備供試液，按上述測定條件測定，計算回收率，結果表明，延胡索乙素的平均回收率為99.2 %，RSD為1.26 %。結果見表1

2.2.10 樣品測定?取胃腸寧膠囊3批，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，精密量取10uL注入液相色譜儀，以外標法計算延胡索乙素的含量。結果見表2

3 討論

3.1 延胡索的含量測定

延胡索為胃腸寧膠囊制劑中的君藥，其主要藥效成分為延胡索乙素，測定延胡索乙素的含量對控制制劑質量有較大意義，所以選用延胡索乙素作指標成分進行含量測定。延胡索中的延胡索乙素具有抗潰瘍的藥理作用，臨床常配伍其他中藥治療多種消化系統疾病[4-6]。原質量標準中只有鹽酸小檗堿的薄層鑒別，故本研究增加了延胡索乙素的含量測定，能夠更好的控制該制劑的內在品質，保證藥物的臨床治療效果[3]。

3.2 延胡索、黃連的鑒別方法優化

延胡索TLC鑒別中，供試品溶液的制備，采用酸沉堿提法除去干擾。黃連TLC鑒別中，展開劑用正丁醇-冰醋酸-水（5：1：1）替代甲苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（12：6：3：3：1），降低了毒性，展開效果良好，陰性對照無干擾。

3.3 本研究在原有質量標準的基礎上增加了延胡索藥材的薄層鑒別。

綜上所述，對胃腸寧膠囊進行質量標準研究，采用薄層色譜法對胃腸寧膠囊中對延胡索、黃連、山楂進行定性鑒別;采用HPLC對制劑中的延胡索乙素進行含量測定，該方法操作簡單、重現性好、專屬性高，可作為含量測定的指標。

參考文獻

[1]湖北省食品藥品監督管理局.湖北省醫療機構制劑規范[M].湖北：湖北科學技術出版社，2011：136-137.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015 年版[M].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2015：139-140.

[3]李晰，吳丹，趙美，等.腸康膠囊的質量標準研究[J].中國醫藥導報，2020，17（31）：25-29.

[4]唐逸豐.延胡索化學成分與藥理作用研究概況[J].中醫臨床研究，2018，10（23）：144-146.

1.恩施土家族苗族自治州公共檢驗檢測中心?湖北恩施?445000;2.恩施土家族苗族自治州中心醫院?湖北恩施?445000;3.湖北一正藥業有限公司?湖北恩施?445000