甲胎蛋白、甲胎蛋白異質體3比率、高爾基體蛋白73聯合檢測在原發性肝癌診斷中的價值

張曉坤 司徒瑞儒

1廣州市荔灣中心醫院檢驗科（廣州510170）；2廣州市海珠區中醫醫院檢驗科（廣州510220）

肝臟疾病是威脅人類健康的主要疾病。其中慢性肝炎最為常見。如果慢性肝炎患者得不到及時的診斷和治療，極有可能進一步進展為肝纖維化，再進一步發展成肝硬化了；肝硬化的發展有兩種結局，一是肝衰，即肝臟衰竭，另外一種就是肝癌［1-2］。目前臨床上診斷肝損傷主要是靠ALT、AST、ALP、GGT等血清學指標。但這些標志物特異性較差，而且受很多因素的影響。同時由于肝臟的代償能力也比較強，很多肝臟損傷早期ALT依然是正常，導致炎癥不被發現而錯過早期治療的最佳時機。無論是慢性肝炎、肝硬化還是原發性肝癌，早診斷、早治療往往是控制疾病發展的關鍵。特別是原發性肝癌，大多數患者早期都無明顯癥狀，不易發現，如果等到出現消瘦、黃疸、腹水、肝區疼痛等癥狀時，病情往往已進入中晚期，甚至出現癌細胞擴散，從而錯過最佳的治療時機［3］。同時，由于原發性肝癌早期的病灶體積較小，單憑影像學的診斷經常出現漏診。病理檢查雖是肝臟疾病診斷的“金標準”，但也有一定局限性，病理檢查是有創傷的操作，肝穿刺只能取整個肝臟的一小部分，一次檢查不一定能反映全貌，同時，由于病理醫生存在讀片的主觀性，結果也有一定的差異［4］。因此，尋找原發性肝癌的早期診斷方法，對提高疾病的治療效果、延長患者的壽命有著十分重要的意義。

甲胎蛋白（AFP）是目前原發性肝癌輔助診斷的重要血清標志物，在肝臟良性疾病如慢性肝炎、肝硬化中也有部分患者會出現不同程度的升高。根據與小扁豆凝集素（LCA）的親和力，AFP被分為AFP?L1、AFP?L2和AFP?L3三種類型［5］，AFP?L3由癌變的肝細胞產生［6］。2005年美國FDA批準監測甲胎蛋白異質體比率（AFP?L3%）應用于原發性肝癌預警，并把AFP?L3%≥10%作為診斷原發性肝癌的臨界值，并認為是診斷原發性肝癌的高特異性指標［7］，提示原發性肝癌的發生率>95%。

GP73是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白，是近年來醫學界發現用于肝損傷、肝硬化和原發性肝癌的診斷新標志物。與慢性肝炎病程發展中肝損傷密切相關［7-9］。血清GP73水平在單純肝硬化患者中顯著升高，而無肝硬化的原發性肝癌患者并無升高。因此，GP73在臨床上應是診斷肝硬化指標而不是原發性肝癌的指標。以前國內有相關報道GP73與AFP用來診斷原發性肝癌［10-11］，因為中國的原發性肝癌患者80%～90%有肝硬化的背景［12］。所以對原發性肝癌患者大多都能測出來GP73很高，實際是一個肝硬化的指標，也是臨床上唯一的一個肝硬化指標。本文通過對甲胎蛋白（AFP）、胎蛋白異質體3比率（AFP?L3%）和高爾基體蛋白73（GP73）的檢測分析，來探討這幾項指標在慢性肝炎、肝硬化和肝癌等疾病中的臨床診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇2017年4月至2020年5月在我院和海珠區中醫醫院確診和治療的患者為研究對象，其中選取慢性肝炎患者196例為慢性肝炎組，其中男132例，年齡27～64歲；女64例，年齡31～66歲。肝硬化患者146例為肝硬化組，男93例，年齡29～68歲；女53例，年齡43～71歲。原發性肝癌患者92例為原發性肝癌組，男61例，年齡53～79歲；女31例，年齡51～76歲。納入標準：診斷標準符合中華實驗和臨床感染病雜志（電子版）發表的慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）中的病毒性肝炎診斷標準［14］及中國抗癌協會肝癌專業委員會發布的原發性肝癌規范化病理診斷指南（2015年版）［15］。排除標準：（1）繼發性肝癌；（2）妊娠期；（3）自身免疫性疾病。同時選擇同期在我院105例健康體檢人群作為對照組，男70例，女35例，均排除消化系統，呼吸系統、心血管系統等方面疾病，年齡和性別上與研究組比較無顯著性差異，具有可比性。

1.2 標本采集和測定方法所有對象均清晨空腹用干燥真空管采靜脈血5 mL，4 000 g離心分離血清，檢測AFP、AFP?L3和GP73水平。AFP檢測試劑購自羅氏公司，采用化學發光法檢測；AFP?L3檢測采用親和吸附原理，用北京熱量生物技術有限公司提供親和吸附離心管分離AFP?L3，在羅氏化學發光儀上分別檢測AFP和AFP?L3值，計出AFP?L3%；GP73采用北京熱景生物技術有限公司提供的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑檢測。以上操作均嚴格按說明書進行，標準品、質控品由相應公司提供。項目的參考區間：AFP：0～20 ng/mL；AFP?L3%參考區間0%～10%，GP73參考區間：0～150 ng/mL。

1.3 統計學方法各組數據用SPSS 19.0軟件進行分析，計量資料比較采用t檢驗或單因素方差分析，計數資料比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組對象血清AFP、AFP?L3%和GP73水平見表1。

2.2 各組對象血清AFP、AFP?L3%和GP73陽性率比較見表2。

表1 各組對象血清AFP、AFP?L3%和GP73水平Tab.1 Serum AFP，AFP?L3% and GP73 levels in each group ±s

表1 各組對象血清AFP、AFP?L3%和GP73水平Tab.1 Serum AFP，AFP?L3% and GP73 levels in each group ±s

注：與正常對照組比較，▲P<0.05；與慢性肝炎組比較，*P<0.05；與肝硬化組比較，#P<0.05

組別慢性肝炎組肝硬化組原發性肝癌組對照組例數196 146 92 105 AFP（ng/mL）97.1±88.2▲208.2±204.1▲284.5±275.2▲*11.1±8.2 AFP?L3%（%）5.7±4.5 7.9±5.1 32.8±21.3▲*#0.8±0.7 GP73（ng/mL）97.6±62.2▲234.3±91.8▲224.3±83.7▲*31.2±25.6

表2 各組肝病患者的AFP、AFP?L3和GP73的陽性率比較Tab.2 Comparison of positive rates of AFP，AFP?L3 and GP73 in liver disease patients in each group例（%）

2.3 原發性肝癌組AFP、AFP?L3%和GP73臨床診斷價值見表3，單項檢測AFP敏感度和特異性較差，分別為68.2%和84.4%。AFP?L3%和GP73敏感度分別為79.6%和75.4%；三項聯合檢測的敏感度為91.1%。單項檢測AFP?L3%和GP73和三項聯合檢測的特異性均較高，分別為94.5%、87.6%、97.2%。可見三項指標聯合檢則的敏感度和特異性均有所提高。

表3 單項AFP、AFP?L3%和GP73及聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值Tab.3 The diagnostic value of single AFP，AFP?L3%，GP73 and combined detection for primary liver cancer

2.4 AFP、AFP?L3%和GP73單獨檢測與聯合檢測診斷原發性肝癌的ROC曲線AFP曲線下面積AUC為0.837，AFP?L3%曲線下面積AUC為0.769，GP73曲線下面積AUC為0.715，AFP、AFP?L3%和GP73聯合檢測曲線下面積AUC為0.942。見圖1。

圖1 AFP、AFP?L3%和GP73單獨檢測與聯合檢測診斷原發性肝癌的ROC曲線圖Fig.1 ROC curves of AFP，AFP?L3% and GP73 separately and in combination

3 討論

盡管慢性肝炎肝臟存在明顯的炎癥，其常規肝功能并未異常。這些患者如果錯過早期治療時機，肝組織會壞死及纖維化，從而發展成肝硬化甚至原發性肝癌［16］，預后差，惡性高，對于原發性肝癌早期患者，影像學和病理學診斷比較困難，因此，血清學具有簡便、無創、微量、早期的特點，成為早期篩查的重要手段［17］，重要的是克服單個檢測指標的局限性，找出合適的組合指標［18-20］，提高檢測效能，并有較高的敏感性和特異性，提高早期診斷的準確率就成為研究的重要目標和價值體現。

本研究通過檢測各組對象血清AFP、AFP?L3%和GP73水平，與正常對照組比較，三組AFP和GP73水平都明顯升高，與對照組比較差異有統計學意義（P<0.05）。原發性肝癌組AFP?L3%與對照組比較差異有統計學意義（P<0.05）。原發性肝癌組AFP、AFP?L3%和GP73與慢性肝炎組比較均差異有統計學意義（P<0.05）。原發性肝癌組AFP?L3%與肝硬化組比較差異有統計學意義（P<0.05）。數據顯示AFP和GP73均有早期診斷價值，在預測早期原發性肝癌有重要意義，而AFP?L3%在預測早期原發性肝癌方面較差。如表1所示：慢性肝炎組和肝硬化組AFP?L3%升高不如原發性肝癌癥組明顯。說明AFP?L3只能由癌變的肝細胞產生。

通過對各組對象血清AFP、AFP?L3%和GP73陽性率比較，與正常對照組比較，慢性肝炎組AFP、AFP?L3%和GP73陽性率雖有升高，但不明顯。肝硬化組AFP?L3%和GP73陽性率與對照組比較差異有統計學意義（P<0.05）。原發性肝癌組的三項指標升高明顯，與對照組、慢性肝炎組和肝硬化組比較均差異有統計學意義（P<0.05）。血清GP73水平在肝癌患者中顯著升高，但肝硬化GP73水平和陽性率更高。

通過AFP、AFP?L3%和GP73單獨檢測與聯合檢測診斷原發性肝癌的ROC曲線圖可以看出：曲線下面積AUC比較，AFP大于AFP?L3%，GP73曲線下面積AUC最小，AFP、AFP?L3%和GP73聯合檢測曲線下面積AUC為0.942。三項聯合檢測的敏感性和特異性均高于單項檢測，檢測診斷價值也比單項檢測高。

甲胎蛋白（AFP）作為傳統的原發性肝癌輔助診斷的重要血清標志物，在篩查原發性肝癌方面應用最多，但假陰性較高，單項診斷價值有局限［21-23］，需與其他血清標志物聯合檢測以提高診斷準確率。同時監測AFP?L3%，對肝臟的原發性肝癌的診斷更為準確。GP73在慢性肝病和肝硬化的診斷中價值較高，肝癌細胞GP73表達水平更高，本研究兩者水平相近。

綜上所述，甲胎蛋白（AFP）在作為原發性肝癌輔助診斷指標時更應同時監測AFP?L3%和GP73。AFP?L3%是診斷原發性肝癌的高特異性指標，血清GP73水平在單純肝硬化患者中顯著升高。如三者同時檢查測，可提高慢性肝炎、肝硬化和原發性肝癌的敏感率和準確率，對提高原發性肝癌的早期診斷價值，在預測早期原發性肝癌方面有重要意義。