濰坊市無償獻(xiàn)血人群HTLV 感染情況分析

楊紅霞 ，王廣成 ，張慶武 ，顏明雙 ，李青璇

1.濰坊市中心血站，山東濰坊 261041；2.濰坊市腫瘤醫(yī)院，山東濰坊 261000

人類嗜T 淋巴細(xì)胞病毒（human T-lymphtropic virus,HTLV）是最早由美國 Poiesz BJ 等[1]和日本 Miyoshi I 等[2]發(fā)現(xiàn)的1 種人類逆轉(zhuǎn)錄病毒，HTLV-1 可感染CD4+淋巴細(xì)胞，與癌癥相關(guān)的一種逆轉(zhuǎn)錄病毒。 傳播途徑輸血、注射公用針頭、性接觸、器官移植、母體垂直傳播等。 人感染HTLV 后可引起成人T 淋巴細(xì)胞白血病（adult T-cell leukemia/lymphoma,ATL）、 熱帶痙攣性麻痹癥、 淋巴結(jié)炎、多肌炎、HTLV 相關(guān)性脊髓病等[3]疾病，臨床危害大，有的甚至導(dǎo)致死亡。 現(xiàn)為止沒有發(fā)現(xiàn)HTLV 的特效藥物，或者說沒有HTLV 的疫苗來預(yù)防。 只有切斷傳播途徑才能有效控制HTLV 的傳播。為了解濰坊市無償獻(xiàn)血者HTLV 的感染情況，保證患者輸血的安全性，并可以為全國范圍內(nèi)普查HTLV 提供該地區(qū)的資料，該文把該市篩查2018 月9—12 月10 120 份標(biāo)本進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究材料

隨機(jī)抽取2018 年濰坊市符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》無償獻(xiàn)血標(biāo)本10 120 人份，年齡18～55 周歲，血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測。

1.2 試劑與儀器

由北京萬泰HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測試劑盒， 采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法，試劑批號T20170904B，均在有效期內(nèi)，嚴(yán)格按照試劑說明書規(guī)定使用。 MICRO STAR 全自動加樣系統(tǒng)（瑞士HAMILTON）進(jìn)行加樣，F(xiàn)AME 全自動酶免分析儀（瑞士HAMILTON 公司）進(jìn)行酶免實驗。

1.3 方法

對隨機(jī)抽取10 120 份樣本進(jìn)行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測。 嚴(yán)格按照ELISA 試劑盒說明書規(guī)定計算臨界值（Cut-off）值，臨界值=0.18+陰性對照孔 A 均值。樣本 OD值與臨界值（Cut-off）的比值（S/CO）≧1.0 為陽性，＜1 為陰性。 初篩為反應(yīng)性標(biāo)本的9 份標(biāo)本分離血漿，送往北京臨檢中心用蛋白印記實驗（Western blot）進(jìn)行確認(rèn)。剩余血漿凍存-20℃冰箱，每間隔7 d 取出充分融化，重復(fù)進(jìn)行檢測。 同時隨機(jī)抽取200 份陰性標(biāo)本按陽性的方式，每7 天的間隔期進(jìn)行檢測。

表1 抗-HTLV 反應(yīng)性標(biāo)本檢測信息表

2 結(jié)果

無償獻(xiàn)血者的10 120 份標(biāo)本經(jīng)抗-HTLV-ELISA檢測，結(jié)果反應(yīng)性標(biāo)本9 份，兩孔復(fù)檢后確定ELISA 法為陽性。 經(jīng)蛋白印記法確認(rèn)有1 份不確定性，但未出現(xiàn)特異性條帶。 經(jīng)反復(fù)凍融的反應(yīng)性標(biāo)本有衰減，陰性標(biāo)本無任何的變化。 見表1。

3 討論

在國外流行的地區(qū)為日本、中非、加勒比地區(qū)以及南美洲等[4]，超過1 500 萬感染者；我國是自季陽等[5]首次在福建地區(qū)發(fā)現(xiàn)人類嗜T 淋巴細(xì)胞病毒存在，之后發(fā)現(xiàn)HTLV 主要是在東南沿海地區(qū)，福建省最高[6-9]。 其HTLV 在獻(xiàn)血者的總體流行率為0.024 3%，其中北京2013 年篩查中未檢測出HTLV[10]，2002 年天津地區(qū)無償獻(xiàn)血者HTLV 篩查3 509 份樣本檢測1 份陽性，山東地區(qū)分別在關(guān)淑芬等[11]1996 年，Wang.Y 2004—2005 年檢測HTLV 中未檢出陽性標(biāo)本。從圖表的數(shù)據(jù)觀察到，該市地區(qū)10 120 份標(biāo)本中檢測出9 份初篩反應(yīng)性標(biāo)本，經(jīng)臨檢中心確認(rèn)1 份不確定性，未發(fā)現(xiàn)HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染情況，該地區(qū)屬于低檢出率，符合山東省的HTLV 的檢測情況。

由于HTLV 致病性較強(qiáng)，輸血是傳播途徑之一，血液篩查HTLV 是有效的控制傳播的措施。 HTLV 的特點是病毒抗原在體內(nèi)很少表達(dá)，不能直接大批量檢測，現(xiàn)在采供血機(jī)構(gòu)對于HTLV 感染的診斷一般采用抗體檢測，一般采用ELISA，免疫印跡，免疫熒光，化學(xué)發(fā)光法等[12]。國外的很多國家對于HTLV 的感染采取不同的措施，美國，日本將HTLV-I/II 納入獻(xiàn)血者篩查的常規(guī)項目，但是因為檢測成本和獻(xiàn)血者采血困難等問題，只有日本開展HTLV 至今[13]。我國廈門于 2004 年、深圳于 2014 年已對獻(xiàn)血者全面開展HTLV－Ⅰ/Ⅱ抗體檢測[14]，其他地區(qū)因為考慮檢測成本，采血困難的問題及地區(qū)不是流行區(qū)域等問題，只是部分篩查檢測，并沒有全部檢測。

該研究大規(guī)模篩查HTLV 采用國產(chǎn)試劑盒，如北京萬泰試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA），方法局限性敏感性高，特異性差，存在假陽性。實驗過程要注意樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,以及樣本采集后盡早進(jìn)行實驗，若不能立即實驗，將標(biāo)本放入-20℃保存，避免反復(fù)凍融。從表1 中可以分析，HTLV-I 抗體在經(jīng)過一定時間反復(fù)凍融影響實驗結(jié)果。儲存-20℃后第一次檢測率為82.3%，第二次為64.59%（剔除了沒有樣的標(biāo)本），對于高發(fā)地區(qū)立即檢測標(biāo)本，或者不能檢測儲存-20℃，可設(shè)置一定的灰區(qū)，防止漏檢。對于HTLV 的檢測，該研究初篩可以選擇檢測靈敏度高的試劑，篩選呈反應(yīng)性后標(biāo)本可以用特異性高些試劑進(jìn)行復(fù)試檢測，充分利用試劑的靈敏度、特異性，最后進(jìn)行蛋白印記法（Western Blot）確認(rèn)，蛋白印記法檢測主要是通過轉(zhuǎn)印技術(shù)將滅活HTLV 病毒粒子產(chǎn)生的特異性蛋白電泳轉(zhuǎn)移到特定載體上，再與檢測血漿進(jìn)行反應(yīng)。該研究出現(xiàn)的不確定的標(biāo)本是未出現(xiàn)WB 的特異性條帶，可能是其他的原因造成的。 由于ELISA 實驗的局限性的特點，不可避免地出現(xiàn)初篩反應(yīng)性而確認(rèn)結(jié)果陰性，可能由于非特異性抗原引起的交叉反應(yīng)。所以要利用實驗方法的特點，起到既能節(jié)約成本，又能保證血液輸血安全的作用。

國家衛(wèi)健委要求各地區(qū)根據(jù)實際情況制定HTLV篩查策略，該市從病原體不是主流行區(qū)、檢測成本、效益、輸血安全、采血角度綜合分析，可以采取：①加強(qiáng)人類嗜T 淋巴細(xì)胞病毒HTLV 的知識宣傳，講解HTLV 的知識，傳播途徑，感染后與獻(xiàn)血后的危害。②預(yù)防經(jīng)輸血傳播不僅是對血液進(jìn)行HTLV 篩查，對血液成分進(jìn)行白細(xì)胞過濾[15]，或者存放14 d 以上，也可降低HTLV 的傳播。 ③全部采用了病毒滅活技術(shù)。 ④可以實行初次獻(xiàn)血者采取HTLV 抗體篩查，進(jìn)一步保證血液的安全，又能節(jié)約成本。