濰坊市無償獻血人群HTLV 感染情況分析

楊紅霞 ，王廣成 ，張慶武 ，顏明雙 ，李青璇

1.濰坊市中心血站，山東濰坊 261041；2.濰坊市腫瘤醫院，山東濰坊 261000

人類嗜T 淋巴細胞病毒（human T-lymphtropic virus,HTLV）是最早由美國 Poiesz BJ 等[1]和日本 Miyoshi I 等[2]發現的1 種人類逆轉錄病毒，HTLV-1 可感染CD4+淋巴細胞，與癌癥相關的一種逆轉錄病毒。 傳播途徑輸血、注射公用針頭、性接觸、器官移植、母體垂直傳播等。 人感染HTLV 后可引起成人T 淋巴細胞白血病（adult T-cell leukemia/lymphoma,ATL）、 熱帶痙攣性麻痹癥、 淋巴結炎、多肌炎、HTLV 相關性脊髓病等[3]疾病，臨床危害大，有的甚至導致死亡。 現為止沒有發現HTLV 的特效藥物，或者說沒有HTLV 的疫苗來預防。 只有切斷傳播途徑才能有效控制HTLV 的傳播。為了解濰坊市無償獻血者HTLV 的感染情況，保證患者輸血的安全性，并可以為全國范圍內普查HTLV 提供該地區的資料，該文把該市篩查2018 月9—12 月10 120 份標本進行分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究材料

隨機抽取2018 年濰坊市符合《獻血者健康檢查要求》無償獻血標本10 120 人份，年齡18～55 周歲，血漿標本進行檢測。

1.2 試劑與儀器

由北京萬泰HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測試劑盒， 采用雙抗原夾心酶聯免疫法，試劑批號T20170904B，均在有效期內，嚴格按照試劑說明書規定使用。 MICRO STAR 全自動加樣系統（瑞士HAMILTON）進行加樣，FAME 全自動酶免分析儀（瑞士HAMILTON 公司）進行酶免實驗。

1.3 方法

對隨機抽取10 120 份樣本進行HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗體檢測。 嚴格按照ELISA 試劑盒說明書規定計算臨界值（Cut-off）值，臨界值=0.18+陰性對照孔 A 均值。樣本 OD值與臨界值（Cut-off）的比值（S/CO）≧1.0 為陽性，＜1 為陰性。 初篩為反應性標本的9 份標本分離血漿，送往北京臨檢中心用蛋白印記實驗（Western blot）進行確認。剩余血漿凍存-20℃冰箱，每間隔7 d 取出充分融化，重復進行檢測。 同時隨機抽取200 份陰性標本按陽性的方式，每7 天的間隔期進行檢測。

表1 抗-HTLV 反應性標本檢測信息表

2 結果

無償獻血者的10 120 份標本經抗-HTLV-ELISA檢測，結果反應性標本9 份，兩孔復檢后確定ELISA 法為陽性。 經蛋白印記法確認有1 份不確定性，但未出現特異性條帶。 經反復凍融的反應性標本有衰減，陰性標本無任何的變化。 見表1。

3 討論

在國外流行的地區為日本、中非、加勒比地區以及南美洲等[4]，超過1 500 萬感染者；我國是自季陽等[5]首次在福建地區發現人類嗜T 淋巴細胞病毒存在，之后發現HTLV 主要是在東南沿海地區，福建省最高[6-9]。 其HTLV 在獻血者的總體流行率為0.024 3%，其中北京2013 年篩查中未檢測出HTLV[10]，2002 年天津地區無償獻血者HTLV 篩查3 509 份樣本檢測1 份陽性，山東地區分別在關淑芬等[11]1996 年，Wang.Y 2004—2005 年檢測HTLV 中未檢出陽性標本。從圖表的數據觀察到，該市地區10 120 份標本中檢測出9 份初篩反應性標本，經臨檢中心確認1 份不確定性，未發現HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染情況，該地區屬于低檢出率，符合山東省的HTLV 的檢測情況。

由于HTLV 致病性較強，輸血是傳播途徑之一，血液篩查HTLV 是有效的控制傳播的措施。 HTLV 的特點是病毒抗原在體內很少表達，不能直接大批量檢測，現在采供血機構對于HTLV 感染的診斷一般采用抗體檢測，一般采用ELISA，免疫印跡，免疫熒光，化學發光法等[12]。國外的很多國家對于HTLV 的感染采取不同的措施，美國，日本將HTLV-I/II 納入獻血者篩查的常規項目，但是因為檢測成本和獻血者采血困難等問題，只有日本開展HTLV 至今[13]。我國廈門于 2004 年、深圳于 2014 年已對獻血者全面開展HTLV－Ⅰ/Ⅱ抗體檢測[14]，其他地區因為考慮檢測成本，采血困難的問題及地區不是流行區域等問題，只是部分篩查檢測，并沒有全部檢測。

該研究大規模篩查HTLV 采用國產試劑盒，如北京萬泰試劑盒采用雙抗原夾心酶聯免疫法（ELISA），方法局限性敏感性高，特異性差，存在假陽性。實驗過程要注意樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,以及樣本采集后盡早進行實驗，若不能立即實驗，將標本放入-20℃保存，避免反復凍融。從表1 中可以分析，HTLV-I 抗體在經過一定時間反復凍融影響實驗結果。儲存-20℃后第一次檢測率為82.3%，第二次為64.59%（剔除了沒有樣的標本），對于高發地區立即檢測標本，或者不能檢測儲存-20℃，可設置一定的灰區，防止漏檢。對于HTLV 的檢測，該研究初篩可以選擇檢測靈敏度高的試劑，篩選呈反應性后標本可以用特異性高些試劑進行復試檢測，充分利用試劑的靈敏度、特異性，最后進行蛋白印記法（Western Blot）確認，蛋白印記法檢測主要是通過轉印技術將滅活HTLV 病毒粒子產生的特異性蛋白電泳轉移到特定載體上，再與檢測血漿進行反應。該研究出現的不確定的標本是未出現WB 的特異性條帶，可能是其他的原因造成的。 由于ELISA 實驗的局限性的特點，不可避免地出現初篩反應性而確認結果陰性，可能由于非特異性抗原引起的交叉反應。所以要利用實驗方法的特點，起到既能節約成本，又能保證血液輸血安全的作用。

國家衛健委要求各地區根據實際情況制定HTLV篩查策略，該市從病原體不是主流行區、檢測成本、效益、輸血安全、采血角度綜合分析，可以采取：①加強人類嗜T 淋巴細胞病毒HTLV 的知識宣傳，講解HTLV 的知識，傳播途徑，感染后與獻血后的危害。②預防經輸血傳播不僅是對血液進行HTLV 篩查，對血液成分進行白細胞過濾[15]，或者存放14 d 以上，也可降低HTLV 的傳播。 ③全部采用了病毒滅活技術。 ④可以實行初次獻血者采取HTLV 抗體篩查，進一步保證血液的安全，又能節約成本。